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UNIVERSIDAD DEL CAUCA
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMAS MEDICINA Y ENFERMERIA IV SEMESTRE
ASIGNATURAS: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA BASICO CLINICA Y CUIDADO DE LAS
PERSONAS CON PROCESOS INFECCIOSOS
GUIA ELABORADA POR LILIANA CALDAS ARIAS
DOCENTE DEPARTAMENTO MEDICINA INTERNA
TINCION DE GRAM
METODOLOGIA DE ENSEÑANZA. Revise y estudie la presente guía para su discusión y
aplicación en el desarrollo del laboratorio número 1 en la unidad de Bacteriología.
PROPOSITOS EDUCATIVOS
1. Conocer la utilidad de la tinción de Gram como herramienta para el diagnóstico
microbiológico de algunos procesos bacterianos.
2. Conocer el fundamento de la coloración de Gram.
3. Adquirir conocimientos teórico-prácticos sobre la realización de esta técnica de
coloración.
4. Realizar lecturas microscópicas para identificación bacteriana preliminar.
UTILIDAD. Ya que por el método de coloración de Gram, tanto las bacterias patógenas,
oportunistas y las que hacen parte de la flora normal pueden teñirse y observadarse, es
importante tener en cuenta el sitio anatómico de donde provienen las muestras clínicas y su
adecuada recolección para que la tinción de Gram, constituya una herramienta de utilidad
diagnóstica en las infecciones bacterianas.
La tinción de Gram tiene valor diagnóstico y puede ser aplicada a diversos y múltiples tipos de
especimenes clínicos como líquidos corporales estériles (LCR), exudados, excreciones (orina),
secreciones (esputo), abscesos y tejidos.
También puede aplicarse a diferentes tipos de materiales de uso hospitalario como catéteres y
soluciones para el diagnóstico y control de las enfermedades intrahospitalarias.
El uso de la tinción de Gram es LIMITADO en muestras de materia fecal y NO tiene valor en
muestras faríngeas como en el caso de faringitis estreptocócica y en muestras nasofaríngeas.
La observación de esta tinción permite encontrar características como forma (cocos, bacilos,
cocobacilos y espirilos), agrupación (parejas, racimos, cadenas y empalizadas), y tamaño de las
células bacterianas a partir tanto de muestras clínicas como de cultivos bacterianos.
En la interpretación de este método es relevante considerar la presencia de respuesta
leucocitaria o respuesta inflamatoria y otro tipo de células del huésped como células epiteliales,
con el fin de orientar la presencia de infección aguda o crónica y en algunos casos permitir la
evaluación de la calidad de la muestra clínica como sucede con las muestras de esputo.
REACTIVOS. La tinción de Gram utiliza en orden estricto de primero a cuarto los siguientes
reactivos:
1. CRISTAL VIOLETA o violeta de genciana:COLORANTE BASICO
2. LUGOL DE GRAM: MORDIENTE
3. ALCOHOL - ACETONA: DECOLORANTE
4. FUSCINA (SAFRANINA): COLORANTE DE CONTRASTE
FUNDAMENTO. El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular
bacteriana, con al ayuda del mordiente que refuerza la unión del colorante.
Las bacterias GRAM POSITIVAS debido a la estructura y composición bioquímica de su pared
celular retiene el complejo cristal violeta-lugol y aún después del tratamiento con el decolorante
conserva el colorante básico, por lo que se observan al microscopio de color azul oscuro o
violeta una vez concluida la técnica de tinción.
Las bacterias GRAM NEGATIVAS pierden el colorante básico cuando son tratadas con el
decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lípidico de la pared celular lo que
aumenta la permeabilidad celular, dando como resultado la pérdida del complejo cristal violetalugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual
estas células bacterianas se observan al microscopio de color rosado una vez concluida la
técnica de tinción.
TÉCNICA
1. Marcar y realizar un extendido delgado de la muestra clínica o de una colonia sobre un
portaobjetos (placa) y dejar secar.
2. Fijar el material a estudio a la placa pasándola 2 o 3 veces por la llama de un mechero
evitando el excesivo calentamiento.
3. Colocar la placa sobre un soporte y cubrirla con cristal violeta durante un minuto.
4. Lavar con agua corriente.
5. Cubrir la placa con lugol de Gram durante un minuto.
6. Lavar con agua corriente.
7. Cubrir la placa con alcohol-acetona durante 5 segundos.
8. Lavar con agua corriente.
9. Cubrir la placa con fuscina ( safranina) durante un minuto.
10. Lavar con agua corriente.
11. Dejar secar al aire
12. Observar al microscopio con aceite de inmersión, objetivo de 100X, condensador
abierto totalmente para que la luz pase y se obtenga buena iluminación
INFORME DE RESULTADOS. Una tinción de Gram a partir de un espécimen clínico debe
contener la siguiente información:
Respuesta leucocitaria y su tipo ya sea PMN o MN (polimorfonuclear o mononuclear
respectivamente) en términos de escasa moderada o abundante cantidad.
Forma, coloración y a veces agrupación bacteriana en términos de escasa moderada o
abundante cantidad.
En muestras de esputo sirve para evaluar la calidad de la muestra y se deben contar los
PMN y las células epiteliales con objetivo de 10X además de informar los morfotipos
bacterianos.
OBSERVACIÓN La flora bacteriana observada con la tinción de Gram se informa por género y
a veces agrupación pero no se indica la especie ya que solo la identificación mediante pruebas
bioquímicas a partir de cultivos permite precisar la especie.
REQUERIMIENTOS DEL ESTUDIANTE
Traer preparado este material para su discusión
Guantes, tapabocas y bata de manga larga,
Jabón y toalla para el secado de manos
Traer Colores: entre otros Azul oscuro y Rosado
ATENCION ESTUDIANTES MEDICINA Y ENFERMERIA:
Para mejorar su aprendizaje en el área de Bacteriología Clínica le recomiendo la asistencia
puntual a las clases y laboratorios, usted deberá ampliar algunos conceptos de manera
independiente y para lograrlo al finalizar este documento hay unos textos que orientaran su
búsqueda, también se le recomienda el uso del diccionario médico para aclarar algunos
términos que usted debe dominar.