Download Escherichia coli Productora de Toxina Shiga Escenario en chile

Escherichia coli Productora de
Toxina Shiga
Escenario en chile
Dr. Juan Carlos Hormazábal O.
Subdepto. Enfermedades Infecciosas
Instituto de salud Pública de Chile
STEC en Chile
§ Aspectos
Microbiológicos
§ Aspectos Epidemiológicos
§ El Ambiente
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
§Aspectos Microbiológicos
Escherchia coli
Es un grupo heterogéneo, cuyos miembros son generalmente no
patógenos y son parte de la flora normal del tracto intestinal de hombre
y animales
Ciertas poblaciones de esta especie han adquirido genes que les
permiten causar enfermedad intestinal o extraintestinal
E. coli que causan enfermedad se han agrupado en patotipos, basados
en sus factores de virulencia y los mecanismos por los cuales causan
enfermedad
Uno de estos patototipos es el grupo STEC
E coli que produce al menos un tipo de Toxina Shiga (Stx)
§Aspectos Microbiológicos
E. coli Diarreogénicos, Determinantes en su
Diferenciación
§Factores de Virulencia Específicos
§Características Clínicas Asociadas a la Infección
§Características Epidemiológicas
§Tendencia a Agruparse en Serotipos Definidos
Dra. V. Prado ICBM
§Aspectos Microbiológicos
Grupos diarreogénicos E. coli
§Aspectos Microbiológicos
Diagnóstico E. coli Diarreogénicos
§Cultivo
§Serotipificación
Solo Orienta, es necesaria la determinación
de factores de virulencia
§Determinación de Factores de Virulencia
PCR
Inmunoensayos
§Aspectos Microbiológicos
STEC
Shigatoxina (Stx): similitud con citotoxina producida por
Shigella dysenteriae Serotipo1
Verotoxina: Efecto citotóxico en células Vero
STEC que causan colitis hemorrágica y SHU, se denominan
Enterohemorrágicas EHEC
Determinantes de Virulencia EHEC:
Intimina (eae): Adhesinas bacterianas
Tir: Receptor para Intimina
Toxina shiga
Gyles, J. Anim Sci 2007, 85:E45-E62
Bugarel et al. BMC Microbiol 2011,11:142
§Aspectos Microbiológicos
Muestra de
deposición
MacConkey
+ XLD
Estudio de
rutina con
búsqueda
dirigida de
Salmonella
spp, Shigella
spp y Yersinia
spp
Dra. D. Benadof, Hosp. R del Río
MacConkey
sorbitol
Colonias
sorbitol
negativo
Bateria confirmar
E.coli +
inmunocromatogra
fía para O157 y/o
Seroaglutinación
0157
Hasta 48 horas
De incubación
§Aspectos Microbiológicos
Detección de Toxina Shiga
ImmunoCard STAT EHEC. Meridian
§Inmunoensayo cromatográfico en
deposiciones
§Stx 1 / Stx 2
Elisa Premier EHEC (Meridian)
Inmunoensayo enzimático en
deposiciones y cultivos
Stx1 / Stx2
Validados
Solo en
O157
§Aspectos Microbiológicos
STEC: Factores de Virulencia PCR
stx2
eae
stx1
bfp
Sitio blanco
gen
Tamaño (pb)
shiga toxina2
stx2
584
shiga toxina 1
stx1
348
Intimina (factor adhesión al epitelio intestinal)
eae
482
Determinante de adherencia (Bundle Forming Pilus)
bfp
300
Lab. Microbiología Molecular, Sección Bacteriología ISP
§ Aspectos Epidemiológicos
Incidencia SHU en el Cono Sur respecto de otros Países
Incidencia por 100,000 niños < 4 años.
Laboratorio de Enteropatógenos (LEP). Universidad de Chile. Datos no publicados .
§ Aspectos Epidemiológicos
STEC, Vigilancia de Laboratorio
1985: Implementación técnica Serológica y Biológica para E. coli
Enterohemorrágico, confirmación voluntaria
1989: Primer caso confirmado de Serotipo O157:H7, toxina positiva.
1997: Implementación de técnicas moleculares para factores de
virulencia
1999: Inicio de Sistema de vigilancia de Laboratorio para E. coli
Verotoxigénico (O157 y otros)
§ Aspectos Epidemiológicos
STEC: Objeto de Vigilancia de Laboratorio,
Decreto Nº158 MINSAL 2004
Laboratorio de Referencia
§ Confirmación Bioquímica de especie.
§ Determinación de factores de virulencia por métodos moleculares
§ Serotipificación: Somática O y Flagelar H.
§ Estudio de clonalidad según estándar PulseNet CDC-OPS
§ Informe de resultados a Autoridad Sanitaria y laboratorio local
§ Aspectos Epidemiológicos
STEC, Serogrupos en
Casos Confirmados por el Lab. de Referencia
2006 - 24 de Junio 2011
n=413 Casos
§ Aspectos Epidemiológicos
Serogrupo STEC por Servicio de Salud, ISP 2010
20
20
NT
18
O111
17
O117
16
15
O124
O157
O25
14
O26
12
O5
12
O88
10
8
6
6
5
4
4
3
2
2
0
2
2
1
1
1 1
1 1
1
111 1 1 1
1
11
1
1
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0 00000 00 0000 0000 0000 0 00 0000 0000 0000 0 00
§ Aspectos Epidemiológicos
Situación Epidemiológica STEC
R. Metropolitana 2010
§ Se han confirmado 106 aislamientos.
§ 81 (76 %) provienen de la RM
§ Sólo 2, provienen del sistema público de salud
39 (O26) y 30 (O157)
§ 5 % (4) han evolucionado a SHU
§ Rango etareo: 1 a 6 años
§ Comunas de residencia: Lo Barnechea, Huechuraba
(2), La Reina, Peñalolen.
§ Factores de riesgo más probable:
hamburguesas, churrasco en carro ambulante, contacto
con carne cruda.
§ Aspectos Epidemiológicos
Situación Epidemiológica STEC
R. Metropolitana 2011 (31 mayo 2011)
§ Se han confirmado 42 aislamientos
§ 25 provienen de la RM (14 O26 y 11 O157)
§ 20 % (5) han evolucionado a SHU
O157
1 por nexo epidemiológico O157 (brote familiar)
§ Rango etareo: 2 a 6 años
§ Comunas residencia: Las Condes (2), La Reina,
Huechuraba, Lampa
§ Factores de riesgo más probable: consumo de
completos en restaurant, presencia de animales en el
domicilio (bovinos, ovinos, animales
domésticos), consumo de “crudo de carne” en restaurant
§ El Ambiente
§ El Ambiente
STEC: Reservorio
Rumiantes, especialmente ganado Bovino
Ganadería Intensiva y la industria de la carne representan la principales
potenciales fuentes de infección.
Fundamental
Procesos Industriales
Faenamiento de animales
Control ambiental y de la autoridad sanitaria
Sistemas de control de riesgos
§ El Ambiente
Presencia de ECEH aisladas de animales de abasto en
Plantas Faenadoras de RM
Total Muestras
Presencia ECEH
Bovinos
136
39 (28.7%)
Cerdos
120
82 (68.3%)
Tipo Ganado
Fuente: Borie C,Arch. med. vet. v.29 n.2 Valdivia 1997
Tipo de Carne
Nº muestras
analizadas
Presencia
E. coli O157:H7
Bovino
123
0
Equino
28
0
Cerdo
28
0
TOTAL
179
0
Fuente: Laboratorio Microbiología Alimentos ISP 2008
§ El Ambiente
“En Chile, hemos descrito frecuencias de aislamiento de
STEC, desde el contenido intestinal de cerdos y bovinos
faenados, en un 7% y 17 % respectivamente. Así, si los
protocolos o procesos de faenamiento para estos
animales no son los adecuados, la carne se puede
contaminar cuando, por error, su contenido intestinal
tiene contacto con la materia muscular”
Comunicación Dr. Roberto Vidal, Microbiología ICBM, U. de Chile, 2011
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
STEC, y el control en los alimentos en Chile
El control de los alimentos que se elaboran y se consumen en Chile
lo realiza la SEREMI de Salud
Reglamento Sanitario de los Alimentos (RSA) DS 977/97:
Indicadores de Higiene y
detección de microorganismo
patógenos, que se definen en el artículo Nº173 de este reglamento
El laboratorio de Alimentos de la Región Metropolitana realiza la
detección por PCR de Toxinas Shiga. El resto de los laboratorios no
tiene implementadas técnicas de Biología Molecular
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
De acuerdo al RSA, la detección de E.coli en los
siguientes alimentos:
Quesillo, queso fresco, queso chacra, queso de suero
Caldos, sopas, cremas, salsas y puré de papas deshidratadas instantáneas
Caldos, sopa, cremas, salsas y puré de legumbres deshidratadas que requieren cocción
Cereales para desayuno
Masas con relleno o coberturas
Fórmulas deshidratadas para niños menores a 12 meses
Fórmulas deshidratadas para niños mayores de 12 meses
Preparaciones reconstituidas, listas para el consumo administradas exclusivamente por biberones o mamaderas
Platos preparados y papillas listos para el consumo
Cecinas cocidas
Cecinas crudas acidificadas
Pescados y mariscos crudos congelados
Pescados y mariscos precocidos o cocidos congelados
Pescados y mariscos ahumados
Frutas y verduras frescas
Frutas y otros vegetales comestibles pre-elaborados, listos para el consumo
Frutos y otros vegetales comestibles congelados, que no requieren cocción
Zumos, néctares, bebidas a base de frutas y verduras no pasteurizados
Frutas y verduras desecadas o deshidratadas
Comidas y platos cocidos, que se sirven en caliente, listos para el consumo. Excepto emparedados
Comidas y platos mixtos con ingrediente (s) crudo (s) o cocido (s), incluidos emparedados.
Aguas minerales y aguas envasadas.
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
CODEX ALIMENTARIUS, FAO
Sistemas de Calidad y Alimentos Inocuos
Recomendaciones para la industria alimentaria:
Hazzard Analytical Critical Control Point (HACCP)
§ Los Alimentos y el Marco regulatorio
L.
La Industria Alimentaria, Control Interno y Fizcalización
Puntos Críticos
Esencial Registros!
Gentileza Cecinas Winter
O104:H4 Expansión Clonal en Europa
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
Resist. Telurito
2 Copias
Stx2
Ausencia
Intimina
Resist. Telurito
Figure 1. Copy numbers variable regions of O104:H4 compared to DH10B if mapped to O157:H7. Red arrows: shiga toxin stx2 is amplified in O104:H4;
Green arrows: tellurite gene cluster ter are present in O104:H4; Light blue arrow: intimin gene eae is missing in O104:H4.
Violet arrow: copy number 2 region from 675kbp to 770kbp detected in DH10B.
BGI/Univ. Medical Centre Hamburg-Eppendorf 2011
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
Alta homología con EAEC
(93%)
Adquisición Stx por
tranferencia horizontal
E. coli Enteroagregativo
Productor de toxina Shiga
BGI/Univ. Medical Centre Hamburg-Eppendorf 2011
0 %
.5
1
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.5 %
-1 .5
%
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.0
8 .3
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97
96
95
93
94
92
91
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89
87
86
84
85
83
82
81
80
78
79
77
76
75
73
74
72
71
70
69
68
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65
64
62
63
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P
61
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t:
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E -X
59
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
BR
E2
E4
2
E1
4
E1
4
E3
2
1 8
9
-0 6
- 1
8
0
- 0
0
9
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2
6
0 1
2
0
0 0
2
9
-0 6
0 0
2
6
- 0
3
9
0 0
2
9
- 1
0
0
0 1
2
0
BR
BR
1 6
-0 7
2 6
1
-0 7
0 0
2
7
0 0
2
7
BR
2 7
1
-0 7
0 0
2
7
BR
BR
1 2
-0 6
1 8
-0 6
0 0
2
6
0 0
2
6
BR
2 4
1
-0 6
0 0
2
6
BR
BR
BR
2 7
1
-0 6
3 0
1
- 6
4 2
1
-9 8
0 0
2
6
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2
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9 9
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8
BR
BR
4 5
1
-0 6
4 6
1
-0 6
0 0
2
6
0 0
2
6
BR
7 -0
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6
0 0
2
6
BR
8 -0
6
0 0
2
6
BR
1
BR
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0
3 2
2
-0 9
0 0
2
6
0 0
2
9
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5
9
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- 1
2
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E0
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0 1
2
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7 1
1
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2
6
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E1
7
E3
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1
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0 1
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3
- 1
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0
E1
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BR
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3
5
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5
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2
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PC
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9
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2
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3
E3
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4
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- 0
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2
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BR
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0 6
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-0 6
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2
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- 0
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2
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BR
BR
1 -0
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9 0
1
- 9
2 0
0
9
0 0
2
9
BR
7 0
2
- 9
0 0
2
9
BR
7 1
2
-0 9
0 0
2
9
BR
2 1
3
-0 9
0 0
2
9
BR
2 2
3
-0 9
0 0
2
9
BR
2 3
3
-0 9
BR
BR
9 1
1
-0 9
6 9
2
-0 9
0 0
2
9
0 0
2
9
E1
3
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3
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0 0
2
9
BR
E2
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- 6
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2
9
0 0
2
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- 0
2
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2
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0
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- 0
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- 0
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- 0
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- 0
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E1
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1
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2
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E1
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- 0
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0 0
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E1
7
E1
7
E1
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- 0
3
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- 0
7
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- 0
9
4
0 0
2
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0 0
2
4
0 0
2
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- 0
0
9
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E1
8
E1
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2 0
0
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2
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0
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2
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- 0
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0 0
2
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0
-0 7
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5
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- 0
1
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- 0
1
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0 0
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E2
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- 0
5
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- 0
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0 0
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- 0
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- 1
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0 0
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- 0
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-0 4 2
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E4
0
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E3
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2
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1
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BR
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BR
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2
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E0
4
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2
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E3
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1
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BR
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6
E4
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8
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0
9
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9
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E4
1
E4
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8
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E0
4
E1
E1
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7
E2
4
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0 0
2
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E3
2
E3
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9
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5
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2
8
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2
8
E3
7
- 0
2
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0 0
2
9
E3
1
E0
3
- 0
9
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2
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E0
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0
9
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2
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2
9
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8
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E4
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E4
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1
8
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2
8
E1
5
E3
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E7
1
- 0
2
8
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6
0
-0 6
0 0
2
8
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2
0
0 0
2
6
E2
6
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3
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2
7
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7
- 1
0
0
0 1
2
0
E4
9
E3
1
- 0
3
9
- 1
6
0
0 0
2
9
0 1
2
0
E4
2
- 0
3
9
0 0
2
9
E4
3
- 0
1
9
0 0
2
9
E1
3
E4
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- 1
5
- 0
2
9
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2
0 0
2
9
E2
3
-0 7
0 0
2
7
BR
E2
4
1 0
9
- 6
- 0
4
6
0 0
2
6
0 0
2
6
E2
8
E2
3
- 1
9
0
- 0
6
8
0 1
2
0
0 0
2
8
E3
5
- 0
4
9
0 0
2
9
E3
5
- 1
3
0
0 1
2
0
E1
8
E4
1
E0
1
- 0
3
4
- 0
6
9
- 1
9
0
0 0
2
4
0 0
2
9
0 1
2
0
E2
0
- 1
8
0
0 1
2
0
E3
1
- 1
7
0
0 1
2
0
E0
5
E0
3
- 1
0
0
- 1
6
0
0 1
2
0
0 1
2
0
E4
9
- 0
2
9
0 0
2
9
E1
0
E5
4
-0 1
-0 6
2 1
0
0 0
2
6
E5
6
-0 6
BR
8 5
1
-0 6
Librería
Genética
E coli STEC
0 0
2
6
0 0
2
6
E3
5
- 0
9
6
0 0
2
6
E4
- 1
8
0
0 1
2
0
PulseNet International
CDC - OPS
Protocolo O157
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
PulseNet International: Genotipo 0104:H4
PFGE protocolo para E. coli no-O157 (switch inicial 6.76s - switch final: 35.38s).
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
Robert Koch Institut
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
caso sospechoso:
Viajeros que ingresan a Chile provenientes de una zona de riesgo y que
presenten diarrea acuosa con o sin sangre, con o sin fiebre, en los 10
primeros días siguientes a su arribo.
Muestra de deposiciones para coprocultivo informando al laboratorio de la
sospecha clínica
Los cultivos con cepas sospechosas, deberán ser derivados rápidamente
al Instituto de Salud Pública para su confirmación microbiológica.
Las STEC son de vigilancia de laboratorio de acuerdo al DS 158/2004.
Esta infección no es de notificación obligatoria (ENO) pero dado el contexto
actual el caso sospechoso deberá ser reportado por la vía más expedita a
Epidemiología de la SEREMI de Salud correspondiente.
Depto. Epidemiología, MINSAL
§ Vigilancia y Detección STEC O104:H4
Conservación y Transporte Muestras
La muestra de deposición debe colocarse en un frasco limpio y ser
cultivada dentro de las 2 horas de recolección. Si el tiempo entre la
recolección de la muestra y la siembra es mayor, poner la deposición
en medio de transporte Cary-Blair, a temperatura ambiente.
Nivel Local
Coprocultivo
Al día siguiente enviar al Laboratorio de Referencia, Sección
Bacteriología del ISP la placa de coprocultivo debidamente sellada y
rotulada.
El envío se debe acompañar del formulario de envío de cepas de la
sección Bacteriología
Laboratorio de Referencia
§Seroagrupación O104
§Determinación Stx
§PFGE, patrón O104:H4 Alemán
Conclusiones
Aspectos Microbiológicos
§Revisión Métodos Diagnósticos
§ STEC no O157
§ Inmunoensayos Stx
§ Disponibilidad Métodos Moleculares
Aspectos Epidemiológicos
§Notificación Casos SHU (MINSAL)
§Vigilancia Laboratorio
El Ambiente
§Reservorio O104?
§Fisiopatología, Transmisión
§Potencial Epidémico
Los Alimentos y el Marco regulatorio
§Educación del Consumidor
§Cumplimiento Reglamento Sanitario Alimentos
Vigilancia y Detección STEC O104:H4
§Estandarización de Métodos Confirmatorios O104
§Caso Sospechoso y Notificación Inmediata
Agradecimientos:
Dra. Valeria Prado, ICBM Univ. de Chile
Dr. Roberto Vidal, ICBM, Univ. de Chile
Dra. María Cristina Martínez, Subdepto. Microbiol. Alimentos ISP
Dra. Verónica Solari, SEREMI Metropolitana
Dra. Dona Benadof, Hosp. Roberto del Río
Sección Bacteriología, Laboratorio ETA, ISP
Subdepto. Genética Molecular ISP