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EVALUACIÓN ULTRASONOGRÁFICO DEL DIAGNOSTICO TEMPRANO DE LA GESTACIÓN EN GANADO BOVINO PRODUCTOR DE LECHE, UTILIZANDO DOS TRANSDUCTORES DE DIFERENTES FRECUENCIAS. TEMA DE TESIS PARA OBTENER EL TITULO DE: MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA PRESENTA: FERNANDO SOLORIO LUNA M.C. PABLO LUNA NEVAREZ ASESOR Vo. Bo. M.V.Z. JOSE M. ACEVES GUTIÉRREZ CO-ASESOR Vo. Bo. M.V.Z. M.A. CARLOS M. AGUILAR TREJO COORDINADOR DE LA CARRERA DE MVZ. COMITÉ: PRESIDENTE: ______________________ SECRETARIO: ______________________ VOCAL: ________________________ ii DEDICATORIAS A Dios: Por estar conmigo, en todas la etapas de mi vida guiándome en todo momento con su amor y sabiduría, por darme el valor de salir adelante y llevar a termino mis estudios profesionales. A mis Revisores: M.C. José F. Torres S. M.C. Javier Rolando Reyna Granados M.V.Z. ESP. Alberto Torres Garaygordobil Por los grandes y sabios consejos que me dieron, los cuales guiaron positivamente este trabajo para que sirva de referencia a futuras generaciones. A mis amigos y compañeros: Por haberme brindado su apoyo y confianza en este largo trayecto, lo cual fue parte fundamental para que pudiera salir adelante con una etapa mas de mis estudios, gracias por todo amigos. A la “Posta” ITSON: Por haber contribuido abriéndome las puertas para la elaboración de este trabajo de investigación, formando gran parte del trabajo. iii AGRADECIMIENTOS A mi madre: Sra. Mercedes Luna Ponce: Por saber brindarme ese apoyo incondicional en los buenos y malos momentos, por haberme engendrado en su vientre, por su amor, entrega y sacrifico durante esta etapa de estudiante y juventud. Gracias por aguantar mis malos humores, gracias por quererme y confiar en mi. A mi padre: M.C. Carlos Solorio Moreno: Por sus valiosos consejos como padre y amigo, los cuales fueron esenciales para el desarrollo de mis estudios profesionales. Gracias por evitar caer en momentos difíciles que en ocasiones nos presenta la vida. Gracias por ser mi padre, quererme y confiar en mi. A mis hermanas: Mercedes y Karla Solorio Luna: Por haberme brindado ese apoyo, comprensión y cariño en todos los momentos difíciles, gracias por ser mis hermanas y amigas, por los consejos que me brindaron. Las quiero mucho. A mis abuelos y familiares: Gracias por su estar al pendiente de mi vida, por brindarme esa mano cuando mas la necesite, por ese hombro que me brindan para llorar en el y esa sonrisa que festejan junto conmigo, gracias por todo. Los quiero mucho. iv A mi asesor: M.C. Pablo Luna Nevárez. Por su invaluable ayuda como maestro y amigo, por su confianza, por brindarme su mano sincera que me ayudo a contribuir en una parte importante en mi etapa de estudiante. Gracias pablo por ser un buen amigo. A mi Co – asesor: M.V.Z. José María Aceves Gutiérrez: Por haber contribuido con las bases en la formación para esta carrera como amigo y maestro en la obtención de valiosos conocimientos que me ayudaron en esta parte final como estudiante. A mi novia: Jessica Castaños Piña: Por estar conmigo y brindarme su apoyo incondicional, por festejar y llorar conmigo los momentos de la vida, por esa confianza y seguridad que me brindas, por creer en mí como parte de ella y tu como parte de mi ser, por los consejos y las mas sensatas recomendaciones para dar solución a mis problemas, por tu apoyo moral, lealtad y amor que me has brindado, el cual me motivó aún más a seguir preparándome y para ese gran futuro que nos espera, a partir de que nuestras vidas se encuentren unidas. ¡¡ TE AMO !! v CONTENIDO RESUMEN ................................................................................................................. vii LISTA DE CUADROS ............................................................................................... viii INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 1 REVISIÓN DE LITERATURA ............................................................................... 3 1. GESTACIÓN ........................................................................................................ 3 2. FASES DE LA GESTACIÓN ............................................................................... 3 2.1 Cigoto .......................................................................................................... 3 2.2 Embrión ........................................................................................................ 3 2.3 Feto ............................................................................................................... 5 3. TÉCNICAS UTILIZADAS PARA EL DIAGNOSTICO DE GESTACIÓN ........ 6 3.1 Manual ......................................................................................................... 7 3.2 Ultrasonografía ............................................................................................ 9 4. LA ULTRASONOGRAFÍA APLÍCADA A LA REPRODUCCIÓN .................. 11 4.1 Principios Básicos ....................................................................................... 11 4.2 Tipos de Ecógrafos .................................................................................... 15 5. EVALUACIÓN ULTRASONOGRÁFICA DEL TRACTO REPRODUCTOR .. 16 5.1 Morfología ultrasónica del ovario ............................................................... 16 5.2 Morfología ultrasónica del útero ................................................................. 18 5.3 Examen ultrasonográfico del feto ............................................................... 19 6. ANATOMÍA ULTRASONOGRÁFICA DE LA GESTACIÓN ............................ 20 6.1 Características Ultrasonográficas del embrión y del feto ........................... 20 vi 6.1.1 Sonografía del embrión (día 11 al 20 de gestación) ........................ 21 6.1.2 Sonografía del embrión (día 20 al 39 de gestación) ........................ 23 6.1.3 Sonografía de la etapa fetal temprana (día 40 al 60 de gestación) .. 24 6.2 Dinámica de los Fluidos Placentarios ........................................................ 27 6.3 Latido Cardiaco ........................................................................................... 28 MATERIALES Y MÉTODOS .................................................................................. 29 RESULTADOS Y DISCUSIÓN ................................................................................. 31 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ......................................................... 36 LITERATURA CITADA .......................................................................................... 38 vii RESUMEN Solorio Luna Fernando. Evaluación ultrasonográfica del diagnóstico temprano de la gestación en el ganado bovino productor de leche, utilizando transductores de diferentes frecuencias. Asesor: M.C. Pablo Luna Nevárez. Con el objetivo de detectar gestación y sus estructuras embrionarias a los 30 y 35 días pos inseminación, evaluando dos transductores de diferentes frecuencias (5.0 MHz y 7.5 MHz) en ganado bovino productor de leche, se utilizaron 30 vacas de la raza Holstein-Friesian, de 4 a 6 años de edad, de 2 a 4 partos, las cuales fueron evaluadas en dos grupos experimentales: grupo 1 (T1) Evaluación del útero a los 30 días pos inseminación utilizando los dos transductores (5.0 MHz y 7.5 MHz) para detectar la presencia de las estructuras embrionarias como la presencia del saco embrionario, presencia del embrión y la presencia del latido cardiaco. En el grupo 2 (T2) se evaluaron de igual manera las mismas 30 vacas pero a los 35 días pos inseminación utilizando las dos transductores antes mencionados para detectar la presencia de saco embrionario, presencia del embrión y latido cardiaco. Los resultados muestran que en el T2 se encuentra un incremento significativo, con respecto al T1, tanto para Saco Embrionario como para embrión, aún cuando no se encontró diferencia significativa en los tratamientos para Latido Cardiaco, se puede observar que si hubo diferencia de un 8.3 % de diferencia en el T2 contra el T1 en el diagnostico de Latido Cardiaco. viii LISTA DE CUADROS CUADRO 1 PÁGINA Diagnóstico de estructuras embrionarias al día 30 de gestación Para ambos tratamientos................................................................... 32 2 Diagnóstico de estructuras embrionarias al día 35 de gestación Para ambos tratamientos................................................................... 34 ix INTRODUCCIÓN En la actualidad la industria lechera es una de las empresas más grandes mundialmente hablando. En nuestro país existen importantes estados tales como Sonora, Coahuila, y Chihuahua, en los cuales la producción lechera va aumentando día con día, por lo tanto se le da mucha importancia ya que es utilizada para el abastecimiento de una necesidad básica de consumo humano. Sin embargo, en la actualidad las explotaciones de ganado lechero mantienen niveles productivos que promedian menos de 25 litros de leche al día en un período de lactancia de 305 días, cuando lo óptimo sería rebasar los 30 – 32 litros. Existen varios factores que están involucrados en esta problemática, como son la nutrición, reproducción, sanidad, instalaciones, etc., ya que la interacción de todos ellos es indispensable para eficientar la producción láctea , y que por el contrario, cuando alguno o algunos de dichos factores no son adecuadamente manejados, se traducen en una disminución significativa de los parámetros productivos de una explotación lechera. En lo que se refiere al manejo reproductivo, además de la sincronización de estros y la inseminación artificial, es escasa la aplicación de técnicas reproductivas que permiten mejorar la productividad de la explotación. Al respecto, en la actualidad el diagnóstico de preñes se realiza en la mayoría de las instalaciones utilizando la técnica manual de palpación rectal, lo que permite detectar con precisión la gestación de 50 a 60 días posteriores a la inseminación. Existen técnicas más novedosas y eficientes para el diagnóstico de preñez, tal y como lo es el uso de la ultrasonografía, por medio de la cual es posible la detección de la preñez desde los 30 a 35 días posteriores a la inseminación artificial. El respecto, la 1 precisión del diagnóstico de gestación por ultrasonido está influenciada por la frecuencia de sonido del transductor, el cual puede ser de 5.0 MHz o de 7.5 MHz, ya que el primero tiene mayor alcance pero proporciona una imagen nítida, en comparación con el de 7.5 MHZ, el cual tienen menor alcance o profundidad pero genera una imagen de mayor calidad. 2 REVISIÓN DE LITERATURA 1. GESTACIÓN El estado de gestación se refiere a la duración del embarazo en los animales vivíparos, es decir, el periodo comprendido desde la fertilización del óvulo hasta el parto, pasando por los periodos embrionario y fetal. Varía en las distintas especies; por lo que se refiere al hombre, tiene una duración media de 266 días, o aproximadamente 280 días desde la última regla (Gispert, 1999). En lo que respecta a las especies de animales domésticos, la duración de la gestación es muy variable: vaca, 273 a 292 días (Bos taurus), 271 a 310 días (Bos índicus); yegua, 333 a 346 días; oveja, 143 a 147 días; cabra, 146 a 155 días; cerda, 111 a 116 días; perra, 58 a 68 días; y, gata, 61 a 70 días (Blood y Studdert, 1993). 2. FASES DE LA GESTACIÓN Cigoto: Cuando el folículo esta a punto de romperse, la zona fimbriada del oviducto se aproxima a él y en la ovulación, el líquido folicular y el ovocito son eliminados hacía el oviducto. Si la hembra a sido fecundada durante el celo entonces los espermatozoides esperan al ovocito en la parte superior del oviducto. Después de la fertilización, comienza la división del cigoto y, como resultado de las contracciones peristálticas y de las corrientes ciliares en el oviducto, el embrión será transportado hacía el útero. Cuando alcanza el útero, a los tres o cuatro días , el cigoto o morula está formado por 16 a 32 células. Con las sucesivas divisiones celulares y la orientación celular que ocurre en la morula, ésta desarrolla un espacio interior configurado el blastocito. Hasta el momento de perder la zona pelúcida, en el noveno día, hay poco crecimiento absoluto del embrión, siendo su tamaño de 0.14 mm (Arthur et al., 1991). Embrión: Desde el momento de su llegada al útero hasta su nidación, el embrión se mantiene en la luz uterina, donde se alimenta de leche uterina. Una vez formados los blastocitos, se disponen por todo el útero, para utilizar de manera efectiva el espacio uterino. De esta 3 manera ocurre la migración libre de los embriones entre los cuernos, sin tener en cuenta del ovario que proceden (Joe et al., 1982). A partir del noveno día el blastocito se alarga rápidamente. La fijación embrionaria al útero ocurre a los 12 días. El mismo embrión bovino, aunque diferenciado rápidamente, se alarga lentamente en comparación con el corion y un mes después de la cubrición tiene aproximadamente 1 cm de largo. La vesícula coriónica, que al principio es similar a un cordón con una esfera central dilatada del amnios conteniendo al embrión, es ocupada progresivamente por el líquido alantoideo formando un extenso saco alantocoriónico, que comienza a dilatar primero el cuerno gestante alrededor de los 35 días. En este momento, el corion ya se extiende por el cuerno no gestante. Su longitud es aproximadamente de 40 cm y en la parte más ancha de la porción, que depende del cuerno gestante, tiene de 4 a 5 cm de diámetro. El alantocorion se pone en contacto con las carúnculas uterinas, surgen desde el alantocorion hacia las criptas de las carúnculas materiales, que están también rodeadas por plexos capilares, vellosidades que tienen abundantes plexos capilares. Así se forma el cotiledón característico del rumiante, o placentoma, a través del cual tiene lugar el intercambio nutritivo y gaseoso entre la madre y el feto (Arthur et al., 1991). Recordemos que el corion, y siguiéndole el alantoides, se extiende en el cuerno no gestante y de esta manera es normal en el rumiante que haya numerosos cotiledones funcionando en el cuerno no gestante. Durante el desarrollo temprano del embrión en los rumiantes ocurre una función extensa entre el alantoamnios y el alantocorion, de esta manera se oblitera considerablemente la cavidad alantoides. Como resultado, donde yace sobre el amnios, el alantoides queda reducido a un estrecho canal. En este momento, su forma recuerda a la letra “T” con el tronco saliendo del uraco, a lo largo del cordón umbilical y luego divergiendo como las dos piezas de la cruz sobre el canal lateral del amnios. Por consiguiente, hay poco líquido alantoideo sobre el área amniótica. La mayoría se extiende por las extremidades del alantoides, una de las cuales se introduce por el cuerno no gestante. Sin embargo en la ultima fase de la gestación el alantocorion tiende a volver a separarse de nuevo del alantoamnios por la presión que ejerce el acumulo de líquido alantoideo, de manera que el alantoides puede casi rodear al amnios (Hafez, 1996). 4 Feto: A los 28 días de gestación el amnios es esférico y tiene aproximadamente 2cm de diámetro. Ocupa la porción libre del cuerno gestante. El alantoides tiene aproximadamente 18 cm de largo. Pero la cantidad de líquido que contiene es suficiente para dilatarlo y su diámetro es significante. Ocupa casi por completo el cuerno gestante. En este momento el embrión tiene 0.8 cm de largo, un tamaño bastante inapreciable (Arthur et al., 1991). A los 35 días del cuerpo fetal tiene una longitud de 1.8 cm y el diámetro de la esfera amniótica es de 3 cm. Todavía ocupa la parte libre del cuerno. A los 60 días la longitud fetal occipitocoxígea es aproximadamente de 6 cm. Es saco amniótico es oval y tenso, tiene un diámetro transversal de 5 cm. Esto provoca que la parte libre del cuerno gestante tenga una anchura de unos 6.5 cm, comparado con los 2 a 3 cm que tiene en el estado no gestante. La rapidez de crecimiento al crecer desde el óvulo fecundado esférico hasta el feto a terminado, el embrión no sólo aumenta de talla y peso, sino que también experimenta muchos cambios de forma. La rapidez de crecimiento, o sea el aumento porcentual en peso y dimensiones por unidad de tiempo (crecimiento relativo), es mayor en las fases tempranas y declina a medida que avanza la gestación, mientras que el incremento absoluto por unidad de tiempo (crecimiento absoluto) es exponencial, hasta alcanzar un máximo a finales de la preñez. En el bovino, más de la mitad del aumento del peso del fetal ocurre durante los últimos dos meses de gestación. Al término, el peso del feto representa alrededor del 60 % del peso total de los productos de la gestación (Hafez, 1996). Las variaciones de crecimiento del feto y sus órganos y tejidos varían durante las distintas fases de la vida intrauterina. En el desarrollo fetal temprano la región cefálica crece con rapidez y, en consecuencia, la cabeza fetal es desproporcionadamente grande. En etapas más avanzadas el crecimiento cefálico se desacelera, y en el momento del parto la cabeza y la extremidades están relativamente más desarrolladas que los músculos. La rapidez del crecimiento fetal depende principalmente del aporte de nutrimentos y de la capacidad de feto de utilizarlos. Las diferencias de especie, raza y cepa en el tamaño fetal se deben a diferencias en la rapidez de división celular, que es determinada genéticamente. De este modo, existe una estrecha integración entre el suministro de 5 alimento al feto (factores ambientales), la rapidez de división celular (factores genéticos) y, por lo tanto, la rapidez de crecimiento. A los 80 días el feto mide 12 cm y la cantidad total de líquido es de aproximadamente 1 litro (Joe et al., 1982). Durante el período de los 120 a los 160 días de gestación es posible palpar el feto en más del 50% de los casos. Un extremo del feto puede palparse delante y debajo del borde pélvico. En algunos casos el feto puede tocarse de manera transitoria al principio de la explotación y luego se hunde en la profundidad del útero fuera de el alcance de la mano. Entre los cinco meses y medio y los siete meses y medio de gestación el feto se detecta con menos frecuencia que durante los períodos anteriores. Desde los siete meses y medio hasta el final de la gestación el feto puede detectarse rápidamente en la mayoría de los casos. Sin embargo, otras veces, pueden encontrarse en vacas con mucho abdomen, multíparas, que el feto no puede palparse con una única exploración, incluso al final de la gestación. Diversos autores han observado variaciones en el tono miometrial durante las últimas fases de la gestación (Arthur et al., 1991). 3. TÉCNICAS GESTACIÓN UTILIZADAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE El saber si una hembra doméstica está o no preñada reviste considerable valor económico. En general, se requiere de un diagnostico temprano de preñez al poco tiempo del apareamiento a la inseminación, con el objeto de identificar de manera oportuna las hembras no preñadas y así reducir las perdidas de tiempo. Se dispone de métodos clínicos y de laboratorio para el diagnóstico de preñez. La elección depende de la etapa de gestación, costo, exactitud y rapidez de diagnóstico (Hafez, 1996). 6 3.1. Manual (exploración rectal): La exploración (palpación o examen) rectal se realiza con el objetivo de palpar el útero a través de la pared rectal para detectar al agrandamiento uterino que ocurre durante la gestación, así como el feto o las membranas fetales (Hafez, 1996). La primera palpación es recomendable realizarla entre los 35 y 42 días después de la inseminación. Las vacas que no entren en estro el día 60 después del apareamiento, se deben de palpar por última vez. Unas cuantas preñeces a los 30 – 35 días causarán muerte embrionaria, pudiendo ser consideradas como vacías en la revisión de los 60 días. Pocas preñeces terminan después de los 60 días, excepto cuando son resultado de alguna enfermedad que ocasione el aborto. El cervix es la principal marca sobresaliente que sirve como guía para la localización de otras estructuras. La posición y el tamaño proporcionan una indicación del estado de preñez, aunque nunca se debe basar el diagnóstico exclusivamente en este aspecto (Joe et al., 1982). La mayor parte del diagnóstico se basan en el útero y en su contenido. El tamaño del útero influencia su posición en relación con la pelvis, lo cual debe hacerse notar. También es importante el grosor y tono de la pared uterina. La pared uterina se torna más gruesa conforme avanza la gestación y es muy elástica al tacto, comparándola con el útero de una vaca vacía. Esto es de particular importancia para establecer la diferencia entre preñez y un estado que causa agrandamiento del útero sin preñez. A los 30 ó 50 días se detecta un bulto dorsal en el área del cuerpo del útero. La pared uterina es más fina en este punto y la presión creada por el contenido del útero causa el efecto del abombamiento (Arthur et al., 1991). 7 Se puede detectar la membrana coriónica al coger la pared uterina entre el índice y el pulgar de manera suave. Con un poco de práctica, se puede sentir el deslizamiento de la membrana entre el índice y el pulgar, por lo que se ha utilizado el termino “deslizamiento de la membrana” para describir este procedimiento. A los 120 días, los placentomas son suficientemente grandes como para palparlos a través de la pared uterina. Al principio tendrá el diámetro de una moneda pequeña, aumentando su tamaño hacia el final de la preñez (Hafez, 1996). El contenido del útero es el diagnóstico más positivo de las estructuras que se van a palpar. Entre los 30 y 50 días, el amnios se encuentra completamente turgente y por lo general se puede detectar al palpar los cuernos uterinos con el pulgar y el índice. Lo anterior se inicia cerca de la punta del cuerno uterino, aplicando presión suave conforme el dedo pulgar e índice se mueve hacía atrás a la cerviz. Después de 50 días el amnios se torna suave y a los 60 días ya no se detecta. Después de los 60 días se puede palpar el feto, excepto durante el período de 170 a 230 días cuando se encuentra demasiado profundo en la cavidad abdominal como para que pueda alcanzarse en vacas grandes. Los ovarios se pueden palpar aproximadamente a los 120 días. Las estructuras ováricas pueden ayudar a confirmar un diagnóstico positivo o negativo. La preñez siempre se acompaña de un cuerpo lúteo. Sin embrago, debe recordarse que un cuerpo lúteo no siempre va acompañado de preñez (Joe et al., 1982). La palpación a los 45 y 50 días de gestación el útero aún se encuentra en el piso de la cavidad pélvica. Ligeramente aumentado de tamaño del cuerno uterino preñado con respecto al no preñado, teniendo el cuerno preñado un diámetro de 6.5 cm, con el abultamiento más pronunciado. El amnios tendrá un tamaño semejante al de una pequeño 8 huevo de gallina. La membrana se puede deslizar en cualquier cuerno. El cuerpo lúteo se encontrará en el ovario adyacente al cuerno preñado. La palpación a los 60 días el cuerno preñado estará ligeramente caído sobre el borde de la pelvis, sintiéndose como un balón lleno de agua. El cuerno preñado tendrá un diámetro de 6.5 a 7.6 cm y el abultamiento ya no será detectable. Las membranas se pueden deslizar en ambos cuernos, pero ya no se detecta el amnios. Se puede rebotar el feto (5 cm de largo) al frotar la mano sobre la curvatura externa del cuerno uterino o al presionarla contra la curvatura externa y moviendo entonces la mano ligeramente y rápidamente en sentido posterior. El cuerpo lúteo en el ovario adyacente al cuerno preñado (Hafez, 1996). 3.2. Ultrasonografía: Para este tipo de diagnostico se utilizan tres tipos de ultrasonidos. El detector ultrasónico del pulso fetal, este se basa en el fenómeno Doppler en el que las ondas de sonido de alta frecuencia (ultrasónico) emitidas por una sonda, situada en el exterior del animal o en el recto, se reflejan en objetos móviles o partículas, es decir, el corazón fetal o la sangre que circula en las arterias. Las ondas reflejadas son recibidas por la misma sonda, la diferencia en frecuencias son conveniente en sonidos audibles y amplificados (Arthur et al., 1991). Los ultrasonidos de amplitud profunda (tipo-A) depende de una cabeza de un transductor que emite las ondas de sonido y recibe el sonido reflejado, que se manifiesta como una imagen unidimensional de amplitudes de eco para varias profundidades, generalmente en un osciloscopio, pero también en los diodos emisores de heces lumínicos, más recientes. La el transductor, se aplica a la superficie de la piel o se introduce en el recto. El transductor contiene un gran número de cristales piezoeléctricos que cuando se 9 someten a una corriente eléctrica se expanden o contraen y producen sonidos de alta frecuencia. Cuando estos sonidos de se transmiten a través de los tejidos una porción de ellos se reflejará de nuevo en el transductor, en función de las características del tejido, en los que los ecos que vuelven comprimirán los mismos piezocristales dando como resultado la producción de impulsos eléctricos que se manifiestan como imágenes bidimensionales o puntos en una pantalla. La luminosidad de los puntos será proporcional a la amplitud de los ecos reflejados y de ahí que proporcione una imagen que varía desde negro, pasando por varios tonos de grises, hasta blanco (Joe et al., 1982). Los líquidos no reflejan ultrasonidos y por tanto se muestran con color negro en la pantalla, es decir, no ecogénicas, mientras que los tejidos sólidos tales como hueso o cartílago reflejan una alta proporción de ondas sonoras, o sea, son ecogénicas y aparecen de color blanco en la pantalla. Puesto que una interfase tejido – gas puede dar lugar a que hasta un 99 % de las ondas sonoras se reflejen, es importante que el aire no quede detenido entre la superficie del transductor y los tejidos que son examinados. Por esta razón un medio de contacto o un gel (normalmente metil celulosa) se aplica a la superficie del transductor antes de que se coloque en la piel para que se elimine el aire. También es importante seleccionar un área que tenga poco pelo o, de manera alternativa, puede ser necesario rasurar la zona (Hafez, 1996). A esta técnica se alude normalmente como ultrasonido a tiempo real o de imagen. Esto supone que hay manifestaciones de vida o movimiento en las que los ecos aparecen sin interrupción. Los transductores normalmente contienen los piezocristales o elementos organizados continuamente en líneas. El área de objeto de estudio y las imágenes bidimensionales aparecen con la forma de un rectángulo. Otra disposición de los cristales en el transductor permite examinar sectores y por lo tanto que se produzca una imagen de 10 forma similar. A ésta se le denomina como transductor de sectores. En la actualidad éstos no se utilizan muy a menudo en los diagnósticos veterinarios (Joe et al., 1982). Cada transductor produce ondas ultrasónicas entre 1 y 10 MHz. Las frecuencias más utilizadas son de 3.5, 5 y, más recientemente 7.5 MHz. Los transductores de frecuencias más bajas permiten una mejor penetración del tejido, pero unos resultados menos exactos. Las ondas de sonido que golpean a un objeto en movimiento se refleja a la fuente de transmisión con una frecuencia ligeramente alterada. Esta técnica es utilizada para detectar movimientos fetales, como pulso, y circulación arterial uterina. El detector ultrasónico consiste en un amplificador y un transductor, que se inserta en el recto con el fin de localizar el movimiento fetal, los sonidos cardiacos del feto y el pulso de las venas umbilicales. Esta técnica puede alcanzar una exactitud de un 95 % en el diagnostico de gestación. La ultrasonografía requiere poca movilización de los animales, brinda resultados inmediatos y puede adaptarse para su uso en el campo (Arthur et al., 1991). 4. LA ULTRASONOGRAFÍA APLICADA A LA REPRODUCCIÓN 4.1. Principios Básicos de la Ultrasonografía: La ecografía o ultrasonografía es una técnica en la que se emplea ondas de sonido de alta frecuencia para producir imágenes de los tejidos blandos y órganos internos, las cuales podemos visualizar a través de la pantalla del ecógrafo. La técnica de ecografía en reproducción bovina se incrementa cada día por el veterinario clínico y el especialista en biotecnología de la reproducción, pues su utilización es demandada cada vez más por los ganaderos y los centros científicos, ya que su 11 aplicación confirma o desestima la valoración realizada por palpación rectal, constituyendo un medio diagnóstico de certeza precoz, sexado de las crías y la evaluación de los procesos patológicos del sistema reproductor, entre otros usos (Campo, 1998). La ecografía es una técnica de diagnóstico por imágenes sobre la base de la emisión de ultrasonidos y la recepción de ecos. Estos ecos se producen por la reflexión de los ultrasonidos a nivel de los distintos tejidos. Cuanto mayor sea la reflexión, mayor intensidad tendrán los ecos, pero menor calidad de ultrasonidos serán capaces de seguir avanzando y mandar información. En el formato de imagen llamado modo B, estos ecos van a ser presentados como puntos de brillo, que serán tanto más brillantes cuanto mayor sea la reflexión, y serán en una posición proporcional al tiempo que han tardados en ser recibidos. La imagen ecográfica se corresponde con el conjunto de puntos de brillo, que representa un corte anatómico de la región examinada. Los órganos o tejidos será, hiper, hipo o anaecogénicos, según la cantidad de ultrasonidos a nivel de estructuras reales del paciente, son los denominados artefactos, y es importante conocerlos y aprender a diferenciarlos de los ecos reales, para poder interpretar correctamente las imágenes (Diez, 1997; citado por Campo, 1998). La máquina de ultrasonidos o ecógrafos utiliza ondas de sonido de alta frecuencia, cuya magnitud de medida es el Megahertz (MHz), 1 MHz = 1,000.000 de ondas de sonido por segundo, para producir imágenes de los tejidos blandos y órganos internos. Las máquinas de ultrasonido están compuestas por el transductor y la consola. La corriente eléctrica viajará a través de los tejidos en diferentes ángulos de acuerdo a cómo orientamos al transductor. Los tejidos tendrán luego la capacidad de reflejar o propagar las ondas de sonido y el eco resultante será recibido por los cristales que transformarán las vibraciones en corriente eléctrica, que irá a la consola para ser luego transformada en imágenes, de 12 distintos tonos de gris. La intensidad y frecuencia de las ondas son directamente proporcionales a la distancia y la consistencia de los tejidos. El color de las imágenes se traducirá en distintos tonos de gris desde blanco al negro. Los líquidos (folículos, amnios) se ven en la pantalla de color negro ya que no reflejan ondas y se llaman no ecogénicos. Los tejidos densos como el hueso reflejarán las ondas y se les llaman hipercogénicos y se verán de color blanco. La sondas que atraviesan los tejidos son muy delgadas (2 mm), por lo tanto la imagen producida será equivalente a un corte histológico. Los límites entre 2 tejidos adyacentes de distintas densidad se denominan interfase. Las interfases nos permiten delimitar los órganos en estudio y las distintas densidades nos permiten evaluar los cambios normales o anormales de dichos órganos (Campo, 1998). Los “scanners” utilizados en la actualidad para bovinos son de modo B y tiempo completo, equipados con transductores lineales o sectoriales de 3.5 MHz, 5.0 MHz o 7.5 MHz. Modo B se refiere a la modalidad de brillo donde la imagen es un corte bidimensional del órgano en estudio. El tiempo completo se refiere a que los impulsos se van transmitiendo simultáneamente y de esta manera tenemos la visión instantánea de los tejidos examinados. Hay tres tipos de transductores: lineales, convexos y de sector. Los lineales tiene los cristales alineados a lo largo del transductor. La estimulación secuencial de estos cristales produce la imagen en forma de rectángulo y el diámetro horizontal corresponde con el largo de la fila de cristales. El transductor es generalmente orientado en sentido longitudinal. De esta manera vamos a observar al cuerpo del útero en sentido sagital y a los cuernos uterinos en un sentido transversal. Los transductores lineales son los más comúnmente usados en reproducción porque el recto posee una gran superficie plana, especial para trabajar con los transductores lineales. Los transductores de sector producen una imagen triangular con un vértice hacia arriba. La ventaja de los transductores de sector 13 es que necesitan un pequeña superficie de contacto (ejemplo: espacio intercostal). Los transductores de línea convexa (“convex array”) son bastante modernos y serían intermedios entre los lineales y los sectoriales. Los cristales en este caso están dispuestos de la misma manera que los lineales, pero la superficie es convexa y la imagen es de forma de abanico. Debido a que su principio es el mismo que los transductores lineales, la mayoría de las máquinas modernas pueden ser utilizadas con transductores lineales o convexos. En general los transductores convexos son de gran aplicación para la aspiración de folículos y la obtención de oocitos para su fertilización in vitro (Pierson et al., 1994). El menor tamaño de estructura que puede ser observada llamado poder de resolución, y la claridad de la imagen están en función del transductor y de la calidad de la máquina o consola. Los transductores de alta frecuencia como los de 5 MHz y 7.5 MHz tienen una resolución mucho mayor que los de menor frecuencia como el de 3.5 MHz. Por ejemplo, con un transductor de 3.5 MHz se puede visualizar un folículo de 6 mm y un cuerpo lúteo, pero con una de 5 MHz se puede visualizar folículos de 2 mm y analizar el cuerpo lúteo a lo largo de toda su vida funcional. También es importante señalar que los transductores de alta frecuencia tienen menor poder de penetración. Generalmente no necesitamos gran poder de penetración para la examinación reproductiva del bovino. Los transductores de 5 MHz o 7.5 MHz son los de elección en la examinación de ovarios, útero y preñeces no muy avanzadas. En el caso de preñeces muy avanzadas los transductores de 3.5 MHz son los más apropiados (Campo, 1998). Las ondas de sonido tienen las siguientes características: Amplitud: Es la altura de la onda, equivalente a la intensidad o volumen del sonido, y se mide en decibelios (dB). Velicidad: Depende del medio que el sonido atraviese, en tejido blando es de 1 540 14 Frecuencia: Es el número de ciclos o períodos por segundo (entre 2 y 10 MHz). Longitud: Es la distancia que la onda recorre en un segundo, o sea, 0.3 – 1.5 mm en el caso de los ultrasonidos. 4.2. Tipos de Ecógrafos: Los equipos ultrasonográficos utilizados en bovino son conocidos como scanners de modo B y tiempo completo con transductores lineales o sectoriales de 3.5, 5.0 o 7.5 MHz. Modo B indica la modalidad de brillo en el que la imagen es un corte bidimensional del órgano que se analiza. Por su parte, tiempo completo expresa que los impulsos se transmiten sucesivamente para conformar una visión instantánea de los tejidos examinados. Los ecógrafos sectoriales trabajan con transductor sectorial y producen una imagen tipo pirámide. Los lineales funcionan con transductores lineales conformando imágenes de tipo rectangular. Los transductores lineales son usados más frecuentemente en reproducción bovina, ya que el recto tiene una amplia superficie plana. La ventaja de los transductores convexos que son de frecuente aplicación en la tecnología de aspiración folicular y obtención de ovocitos para la fertilización in vitro. Las sondas lineales tienen más superficie de contacto, las hay externas y transrectales. Para la práctica de ecografía en la reproducción de vacas, es más conveniente una sonda lineal trasnrectal, esta misma sonda puede ser también aplicada para ecografía externa del aparato reproductor de las ovejas, cerdas y perras, así podemos decir que la sonda más versátil y amortizable económicamente. En la vaca es recomendable utilizar sondas transrectales lineales de 5.0 MHz, aunque los ovarios, útero y preñeces hasta 40 días se ven mejor con las sondas de 7.5 MHz, a la hora de sexar o en animales con útero descolgado, falta penetración con la sonda de 7.5 MHZ. Se aconseja trabajar con sondas de 15 una sola frecuencia, que posee mejor calidad de imágenes que las multifrecuencias (Campo, 1998). 5. EVALUACIÓN ULTRASONOGRAFICA DEL TRACTO REPRODUCTOR 5.1. Morfología Ultrasónica del Ovario: Los folículos ováricos, como cualquier estructura que está llena de líquido, aparecen en la pantalla del ecógrafo como áreas de color negro o también denominadas noecogénicas. Los folículos en general aparecen en forma redondeada, pero también pueden presentarse formas más irregulares, generalmente debido a la composición de los folículos adyacentes, al cuerpo lúteo o debido a compresión entre los folículos y el estroma ovárico. Las medidas que obtenemos de los folículos corresponden a las dimensiones del antro folicular y no incluye el diámetro de la pared. Las paredes que separan los folículos son a veces muy delgadas y de consistencia difíciles de distinguir. A veces, la presencia de dos folículos adyacentes y del mismo tamaño de la impresión de la presencia de un folículo irregular. Las medidas de los folículos son en realidad las medidas de antro folicular ya que no se incluye el espesor de la pared. Esto es conveniente debido a que el borde entre el antro y la pared folicular es más mucho más fácilmente distinguible que entre la pared folicular y el estroma del ovario. Los folículos preovulatorios se muestran como estructuras redondeadas anecogénicas de 1.5 a 2.5 cm o 1.5 – 17 mm, tamaño con el cual se produce la ovulación en la vaca (Pierson et al., 1994). 16 El advenimiento de la ultrasonografía permitió el seguimiento de los cambios que ocurren en el ovario durante el ciclo estral, sin la necesidad de sacrificar al animal. De esta manera se concluyó que existían ondas de desarrollo folicular durante el ciclo estral. El comienzo de un onda de crecimiento folicular ha sido definida como el crecimiento de un gran número de folículos al mismo tiempo, seguido por la posterior selección del folículo dominante y la regresión y atresia de los folículos o recesivos. En la ausencia de luteólisis el folículo dominante dejará de crecer y comenzará a regresar donde lugar al crecimiento de una nueva onda folicular. Una primera onda de desarrollo folicular comienza en promedio en el día 0 del ciclo. El día 0 es el primer día en que detectamos la desaparición del folículo preovulatorio del ciclo anterior. En la mayoría de los bovinos tienen 2 a 3 ondas de desarrollo folicular. En los animales con 2 ondas, las ondas comenzarán en los días 0 y 10, mientras que en las vacas de 3 ondas estas comenzarán en los días 0, 9 y 16. el folículo destinado a ovular será el folículo dominante de la segunda onda (en las vacas con 2 ondas) o de la tercera en las vacas con 3 ondas. Se ha demostrado que existen picos o aumentos de FSH aproximadamente 2 días antes del comienzo de cada onda folicular (Ginther, 2000). El Cuerpo Lúteo (CL) se muestra evidente en imágenes ecográficas alrededor de los 2 – 3 días posteriores a la ovulación. Esta estructura es hipoecogénica en la vaca, algo oscura y redondeada con 1.5 a 3.5 cm de tamaño en correspondencia con los estadíos del CL hemorrágico, CL maduro o CL en regresión. En investigaciones realizadas, entre el 30 y 80 % de los CL presentan cavidad central de 2 a 20 cm de diámetro con zona anecogénica oscura, probablemente conformada por el líquido folicular del folículo que originó al CL, y rodeada por tejido luteal; en estos casos, los CL son fisiológicos. La concentración de progesterona y el porcentaje de 17 gestación no muestran diferencias significativas en vacas con CL con cavidad en comparación con los que tienen CL compacto (Kastelic et al., 1990). En hembras superovuladas también podemos evaluar la presencia de cuerpos lúteos (CL), pero cuando la respuesta es superior a 10 ovulaciones por ovario es difícil precisar el número de ellos. Sin embrago, la ecografía nos permite hacer una valoración más precisa de la respuesta superovulatoria, determinar la presencia de folículos anovulatorios y descubrir estados patológicos, cuya información es fundamental para decidir si se efectúa, o no, la recolección de ovocitos / embriones (Campo, 1998). 5.2. Morfología ultrasónica del útero: Con la ultrasonografía podemos evaluar los cambios morfológicos del útero a lo largo del ciclo estral en el bovino. Los cambios de estructura visibles por ultrasonido incluyen cambios en el volumen del cuerpo del útero, evidenciados por el aumento de vascularización y edema y la acumulación de fluidos intrauterino, intracervical e intravaginal. El espesor del cuerno uterino empieza a aumentar aproximadamente 3 a 4 días previos a la ovulación y disminuye después de la ovulación, hasta el día 3 o 4 del ciclo, para mantener su tamaño a lo largo del diestro (Pierson et al., 1994). Es importante recordar que el día 0 del ciclo es el día de la ovulación que en el bovino ocurre a las 24 – 36 h de comenzado el estro. General mente el líquido intrauterino comienza a ser visible a los 3 o 4 días previos a la ovulación y decrece hasta el día 3 a 6 del ciclo. El período de máximo contenido de líquido coincide con el período de máxima descarga de mucus durante el estro y metaestro. La forma de los cuernos uterinos también varía ya que los scores aumentan después de la ovulación, llegan al máximo durante la mitad del diestro y van a desminuir a medida que nos vamos acercando al estro. La 18 coincidencia del número de secciones transversales y el score de la forma de los cuernos, confirman la teoría que el útero de la vaca está muy contorneado y tortuoso en el momento de máxima concentración de progesterona (Pierson et al, 1993). 5.3. Examinación ultrasónica del feto: Otros de los estudios de la técnica de ultrasonido es la evaluación temprana del feto. El feto puede ser detectado desde los 20 días de gestación pero tiene que ser confirmada posteriormente con la examinación del conceptus y el latido cardiaco. La curva de crecimiento es significativa en el día 50 de gestación. El embrión también va cambiando de forma desde una línea delgada (día 21) hasta una forma de C (día 24) para tener posteriormente una forma de L. La frecuencia cardiaca disminuye de 188 latidos/minuto en el día 20 a aproximadamente 145 latidos/minuto en el día 26 y después se mantiene aparentemente constante hasta el día 60 (Kastelic et al, 1991). Estudios recientes ha demostrado la posibilidad de detectar la gestación en la vaca en el día 18 del ciclo con un transductor de 5 MHz y en el día 16 con un transductor de 7.5 MHz. El diagnóstico temprano basado solamente en la presencia de fluido intrauterino no es eficiente por 2 razones: 1) el pequeño tamaño del conceptus elongado que llega casi al limite de resolución de los “scanners” comerciales y 2) la presencia aparente normal de flujo intrauterino entre el día 10 a 20 del ciclo se puede confundir con la vesícula embrionaria. De todas maneras si bien se ha determinado la presencia del embrión en el día 16 o 18 en la práctica de campo lo más conveniente sería examinar al animal entre el día 23 y 25 de gestación. Durante esta examinación es importante determinar la presencia de un cuerpo lúteo funcional y la evaluación del embrión junto con la visualización de los latidos cardiacos (Pierson et al, 1993). 19 La ultrasonografía permite una evaluación temprana y efectiva del conceptus con una gran eficiencia y seguridad a partir del día 23 de gestación, permitiendo además determinar la fecha exacta de servicio en programas donde se realiza inseminación artificial y posterior repaso con toros, o para determinar la fecha aproximada de parición. 6. ANATOMÍA ULTRASONOGRÁFICA DE LA GESTACIÓN 6.1. Características ultrasonográficas del embrión y del feto. Monitoreando el desarrollo embrionario y la alta dinámica del feto es quizás el mas obligatorio aspecto de la ultrasonografia en el ganado. Al observar el movimiento del feto bovino en un tiempo real es un memorable evento apara el ganadero, la ciencia, estudiantes y veterinarios. El termino embrión, vesícula embrionaria, embrión propio, feto y conceptos son confusos por el pobre uso y la concordancia entre autores. Para el día 39 (ovulación día 0), el termino embrión o vesícula embrionario se utilizo por ese concepto y embrión propio se utilizo cuando la atención fue directa hacia la porción de los conceptos y ese llego a ser el becerro. De ahí en adelante el termino feto, fue utilizado cuando ese llego a ser un becerro. Las membranas placentarias y sus fluidos se utilizaron por conceptos restantes. La ultrasonografia empezó a usarse durante la preñez por instituciones docentes, clínicas y en la investigación de objetos. Un interesante uso es de comprender a determinar el sitio del semen depositado. La tecnología del ultrasonido tiene un profundo impacto en conocimiento de los maravillosos eventos que ocurren durante la preñez. Muchos fenómenos de la preñez son 20 descubiertos en recientes años a través de este uso. Esta información es resultado de muchos estudios e investigaciones publicadas (Ginther, 2000). 6.1.1. Sonografía del embrión (día 11 al 20 de gestación). El día 11 a 19 se detecta la vesícula embrionaria y el embrión propio al día 20. Día 11: La esférica de la vesícula embrionaria tiene un diámetro de 3.5 mm localizada en el lumen del cuerno uterino en un plano sagital. Día 12: El alargamiento de la vesícula es de 3 mm de alto y 5 mm de largo. Día 13: La vesícula tiene un alejado alargamiento de 25 mm con una altura aproximadamente de 2 mm. Día 15: Esta vesícula es de 2 mm de alto y es visible a través de la porción entera del cuerno uterino. Día 19: Se observa un discreto bulto de 6 mm de alto en la vesícula embrionaria. Día 20: El embrión propio tiene un lugar ecogenico de 3 mm de largo dentro del bulto (Ginther, 1995). Los siguientes datos son de un estudio de 15 vaquillas Holstein que fueron escaneadas diariamente con un transductor lineal de 5 MHz. Más (14/15) vesículas aparentes fueron detectadas al día 10 al 13 en el cuerno uterino. El alargamiento de la vesícula involucra todo lo lateral y contralateral del cuerno en promedio el día 16 y 20 respectivamente. Las características son similares a las obtenidas en otras técnicas. En promedio, el día 19 la localización del bulto (promedio de altura, 3 mm) apareció en el centro del segmento. El embrión propio fue el primero detectado entre el día 19 y 24 dentro del bulto. 21 ANATOMIA ULTRASONOGRAFICA DE LA GESTACIÓN Estructura Anatómica Promedio +/- SEM Primer vesícula detectada Día Altura Espefica (%) Oblongo (%) Envolvimiento del cuerno (día) Cuerno lateral 20 % 60 % 100 % Cuerno contra lateral Primera detección 20 % 60 % 100 % Primer bulto detectado en la vesícula Día Altura (mm) Embrión propio primera detección Día Largo (mm) Latido cardiaco primera detección Día Velocidad (latidos/min) 11.7 +/- 0.4 2.6 +/- 0.2 73 27 14.3 +/- 0.4 15.7 +/- 0.8 19.3 +/- 0.9 16.7 +/- 0.6 17.9 +/- 0.8 18.9 +/- 0.8 19.6 +/- 0.9 19.7 +/- 0.2 2.9 +/- 0.4 20.3 +/- 0.3 3.8 +/- 0.3 21.1 +/- 0.4 188.0 +/- 4.8 (Ginther, 1998). Hay otros dos reportes que describen la morfología ultrasónica de los conceptos bovinos previo al día 20. En el estudio inicial describe ancogenicamente (negro) el área oblonga de 2 a 3 mm, fue detectada el útero lateral del cuerpo luteo en el día 12 a 14. en otro reporte un aparente concepto fue detectado 9 días después de la inseminación. La localización del bulto en el día 19 a 20 parece de confianza para la identificación de la vesícula en el diagnostico de preñez (Ginther, 1998). 22 6.1.2. Sonografía del embrión (del día 20 al 39 de la gestación). Los datos de esta sección son basados primeramente en un extenso estudio comprendiendo diariamente al explorar 15 vaquillas holstein. El estudio es conducido por el primer día de detección del embrión propio (promedio, día 20.3 +/- 0.3) al día 30 (14 vaquillas), día 40 (12 vaquillas), día 46 (10 vaquillas) y día 60 (7 vaquillas). Día 20: El embrión propio tiene de largo 3 mm y esta en bulto dentro de la vesícula embrionaria. Día 22: El embrión propio tiene de largo 6 mm. La alantoides es un circulo ecogenico encima del embrión. Día 24: El embrión tiene forma de C en un plano sagital. Día 28: El embrión es de 9.5 mm de largo y es visualizado en un plano dorsoventral. Las extremidades anteriores pueden ser vistas en áreas ecogenicamente aumentadas por enzima y por debajo de la línea del embrión. Día 29: En esta vista sagital se observase muestra de 12 mm en el embrión y se muestran las extremidades anteriores. Día 34: El embrión tiene 16.5 mm de largo y es visto ventrolateralmente. Extremidades anteriores y extremidades posteriores se extienden por enzima del borde del embrión. Día 38: En este plano sagital del embrión (largo del embrión 21 mm) muestra el aspecto craneal de el embrión en la superficie superior izquierda. Día 39: En el aspecto craneal el embrión mide 21 mm y esta hacia la parte superior izquierda de margen de la imagen. Las extremidades posteriores son visibles en el aspecto caudal del embrión. El amnio se encuentra enzima del embrión (Ginther, 1995). 23 6.1.3. Sonografía de la etapa fetal temprana (del día 40 al 60 de la gestación). Día 40: El feto se muestra en un plano sagital. Lo largo de la vesícula óptica es visible y el cordón umbilical alcanza la pared del útero. Las extremidades anteriores son visibles. Cranealmente el feto esta arriba a la izquierda. Día 41: El feto 23 mm es visto en la sección sagital. Se distingue la orofaringe y la vesícula óptica son visibles. Cranealmente el feto esta para la izquierda. Día 44: El feto es de 25 mm de largo y el cordón umbilical es visible. Cranealmente el feto esta para la derecha. Día 47: La pezuña es visible en la extremidad posterior. Cranealmente el feto esta hacia el fondo de la imagen. Día 51: La unión del cordón umbilical al útero es visible. El aspecto craneal del feto esta para la derecha. Los detalles de las estructuras craneales son visibles. La porción del amnio es visible sobre la cabeza. En el aspecto craneal el feto esta hacia el fondo de la imagen. Las costillas son identificadas en un plano sagital vista de el feto. Día 57: El feto es de 53 mm de largo. Las extremidades son prominentes. El cordón umbilical esta adherido a la pared abdominal. Día 60: El feto es de 69 mm de largo. Finos detalles del cráneo y áreas faciales son visibles, osificación de estructuras progresivas sobre la izquierda de la imagen. Se observa las vértebras cervicales y torácicas (Ginther, 1995). 24 ANATOMÍA ULTRASONOGRAFICA DELEMBRIÓN Primer día de detectado Característica No. de vaquillas Embrión propio Promedio SEM Rango 15 20.3 +/- 0.3 19 a 24 Latido cardiaco 15 20.9 +/- 0.3 19 a 24 Alantoides 9 23.2 +/- 0.3 22 a 25 Embrión forma de C 11 25.4 +/- 0.8 22 a 30 Cordón espinal 14 29.1 +/- 0.5 26 a 33 Extremidades anteriores 14 29.1 +/- 0.3 28 a 31 Amnion 14 29.5 +/- 0.5 28 a 33 Vesícula óptica 14 30.2 +/- 0.4 29 a 33 Extremidades posteriores 13 31.2 +/- 0.3 30 a33 Embrión en forma de L 12 32.7 +/- 1.1 29 a 39 Placentomas 6 35.2 +/- 1.0 33 a 38 Lente óptico 12 40.0 +/- 0.6 37 a 44 Pezuñas 10 44.6 +/- 0.7 42 a 49 Costillas 7 52.8 +/- 0.5 51 a 55 (Ginther, 1998). El embrión propio fue detectado en el día 19 a 24 y esta asociado con el bulto en la vesícula embrionaria. El rango de largo del embrión propio incremento de 3.5 mm en el día 22 a 66 o 60. el embrión fue visto inicialmente en una pequeña línea ecogenica en el día 20. pero el día 22 al 30, el embrión tiene prominente forma de C. La forma es el resultado de la 25 flexura craneal y caudal y en general la flexura de la espalda. Pero el día 29 al 39, el cuello esta recto y la cabeza esta empujado, liberando al embrión el forma de L. El circulo ecogenico borrosamente se observo aproximadamente el día 23 , esta sujeto a la porción ventral del embrión. La estructura es visible por solo uno a dos días. Los bordes pueden llegar a ser indistintos. En un estudio donde se removieron los conceptos, la alantoides fue reportada prominente el día 22 – 23; este llenado del saco corionico en el cuerno lateral en el día 32 a 33 y se extendió a todo lo largo del saco corionico del día 35 a 37. El amnios apareció escasamente ecogénico rodeando la banda del embrión por primera vez fue observado aproximadamente el día 30. Los estudios indican que el amnio desarrollo completamente al embrión en el día 17 o 18. Aparentemente la membrana amniótica es fina o también cercana al embrión detectada antes del día 28. En el día 28 al 31 las extremidades anteriores llegaron a ser visibles al nivel del corazón. Las extremidades anteriores son visibles por el día 24 a 25 y las extremidades posteriores por el día 26. las pezuñas son observadas cuando tienen dos uñas por el día 42 a 49. En el día 29 a 33, áreas esféricas ancogénicas son detectadas en cada lado del aspecto craneal en el embrión. Esas áreas son de la vesícula óptica. El diámetro de la vesícula óptica incrementa diariamente hasta aproximadamente el día 42. antes de ese tiempo, aproximadamente el día 40 apareció una área ecogénica en el centro de la vesícula óptica. El área ecogénica agrandada llega a ser oblonga y eventualmente observada que disminuye ecogénicamente y la vesícula óptica se encuentra casi llena. En este período es muy difícil medir exactamente una de las estructuras. Basado en recientes estudios sobre embriones, la vesícula óptica aparece en el día 21 y el lente óptico aparece en el día 31. la 26 orofaringe no se observo ultrasonograficamente hasta el día 41 o 42. la cavidad oral se observa temprano, desde el día 26. El mejor cambio se observo después del día 45 cuando se comienzan a observar las costillas en los días 51 o 55. La calsificación es repostada que ocurre por el día 59. Los placentomas están elevados en la superficie del lumen uterino observados por los días 33 a 38 (Ginther, 1998). 6.2. Dinámica de los fluidos placentarios En este trabajo, se estudiaron doce vaquillas holstein, estas fueron escaneadas vía transrectal con el ultrasonido dos veces por semana del día 25 – 27 y 57 – 59, usando un transductor lineal de 5.0 MHz. De ahí en adelante se utilizo un transductor lineal de 3.5 MHz al termino de cada semana hasta llegar al parto. Se empezó a estudiar rápidamente todas las partes del útero, estudiando las porciones que contienen fluido alantoide y la localización del embrión propio, unión umbilical y feto. El embrión/feto es observado cuidadosamente por 5 minutos para estudiar su actividad intrinsica, y cambios de lugar, presentación y recumbencia. El útero relleno representa la invasión del saco alantoides lleno de fluidos dentro los filamentos corionicos con formación de la membrana coriónica. La alantoides emerge por debajo del embrión propio y es observado por el día 20. el corion en este día esta ya cercas de la punta del cuerno y es observado en una delgada línea ancogénica. El distinto relleno del cuerno uterino comenzó cerca del día 20, representa la invasión progresiva del saco alantoides dentro del corion. Después el fluido alantoico comienza a pasar resultando un transitorio vacío de algunas porciones del cuerno uterino. Sin embrago se cree que la lantoides se queda en un lugar durante pasa el fluido (Ginther, 1995). 27 6.3. Latido cardiaco La velocidad del corazón puede ser calculada por el scanner de la computadora cuando el operador pone el cursor en un lugar donde se marca en la pantalla, representando el tiempo de distancia entre los dos ciclos del corazón. Primera detección del latido cardiaco embrionario. El día promedio (ovulación =Día 0) de la primera detección del latido cardiaco embrionario fue detectado en 58 vaquillas Holstein examinadas diariamente con un scanner de 5.0 MHz. La mayoría (82%) de latidos cardiacos se detectaron por primera vez el día 22 y casi todo (98%) fue observado el día 24. En este estudio, el embrión propio y el latido cardiaco fueron detectados entre el día 26 y 29. en otro estudio, el latido cardiaco fue detectado en los días 22 a 24 y en todos los animales por el día 27. en otro estudio el latido cardiaco (promedio 188 latidos/segundo) fue detectado en promedio el día 20.9 +/- 0.3. La velocidad de los latidos incrementa después de la detección por primera vez el día 23 (promedio 138 latidos/segundo a un rango de 119 a 150) y son más altos los días 149 a 160 (aproximadamente 190 latidos/segundo) (Ginther, 1995). 28 MATERIALES Y METODOS Localización del sitio experimental: La presente investigación se llevó a cabo en el establo lechero de la posta – ITSON., el cual se encuentra ubicado en el block 204 del valle del Yaqui en el municipio de Cajeme Sonora. Sus coordenadas geográficas son 27 ° 20´40´´ de latitud Norte, 110°13´04´´ longitud Oeste; con una altitud de 35 metros sobre el nivel de mar, la temperatura promedio anual aproximada es de 33.68 °C y la mínima 17.41 °C y su precipitación pluvial es de 520.1 mm (S.AG.A.R., 1996). Metodología Durante el presente estudio, se utilizaron 30 vacas de la raza Holstein Friesian, de 4 a 6 años de edad, de 2 a 4 partos, con una condición corporal de 2.5 a 4.0 y con una gestación de 30 a 35 días. Para la evaluación ultrasonográfica se utilizó la técnica descrita por Pierson (1990), la cual consiste en introducir el brazo izquierdo en el recto con un guante para palpación y localizar el tracto reproductor especialmente los cuernos u cuerpo uterino; una vez localizados, se saca el brazo dejando sólo la palma de la mano en el esfínter anal para facilitar la introducción del transductor, el cual es colocado por debajo de la mano y fijado con los dedos hasta colocarlo de manera suave por encima de cada uno de los cuernos uterinos. 29 El tratamiento 1 (T1) consistió en monitorear 30 vacas para el diagnostico temprano de la gestación a los 30 y 35 días posteriores a la inseminación artificial; utilizando el aparato de ultrasonografía con transductor de 5.0 MHz. El tratamiento 2 (T2) consistió en el mismo monitoreo ultrasonográfico de 30 vacas descrito para el T1, con la única diferencia de que se utilizó un transductor de 7.5 MHz. Variables a analizar Mediante el monitoreo ultrasonográfico de los cuernos uterinos, se evaluaron las siguientes variables: 1) Presencia del saco embrionario 2) Presencia del embrión 3) Presencia del latido cardiaco Las vacas antes mencionadas, fueron evaluadas por ambos tratamientos a los 30 y 35 días posteriores a la inseminación artificial. Análisis estadístico de la información Se utilizó la prueba de “Ji – Cuadrada” para determinar si existe diferencia significativa en las variables antes mencionadas a los 30 y 35 días posteriores a la inseminación artificial. Para el análisis estadístico de la información se utilizó el procedimiento PROC FREQ del paquete estadístico SAS (V6.03). 30 RESULTADOS Y DISCUSIÓN El cuadro 1 muestra la presencia de estructuras embrionarias que fueron diagnosticadas por medio de ultrasonografía al día 30 post-inseminación, donde se observa que en el T1, el saco embrionario, el embrión y el latido cardiaco, fueron detectados en el 58.3%, 8.3% y 0.0% de las vacas, respectivamente; mientras que en el T2 se diagnosticó la presencia de las estructuras antes mencionadas, en un 100%, 75% y 8.3%, respectivamente; encontrando diferencia estadística (P<.05) entre ambos tratamientos tanto en el diagnóstico de la presencia del saco embrionario, como del embrión, mientras que para el diagnóstico del latido cardiaco no se encontró diferencia (P>.05) entre ambos tratamientos. Los resultados anteriores muestran que en el T2 se encuentra un incremento significativo, con respecto al T1, tanto para saco embrionario como para embrión, aún cuando no se encontró diferencia significativa en los tratamientos para latido cardiaco; sin embargo, se pudo apreciar una pequeña diferencia de un 8.3 % de diferencia en el T2 contra el T1 para esta última variable. Se piensa que los resultados obtenidos se deben a que el transductor con frecuencia de 7.5 MHz tiene menor alcance, pero una mayor resolución, lo cual favorece ampliamente el diagnóstico de la presencia de estructuras a las que se puede acercar íntimamente el transductor, tal y como ocurre en una preñez temprana (30 días) en la vaca, ya que el transductor se posiciona inmediatamente por encima del cuerno uterino grávido, separándolo únicamente de las estructuras embrionarias, la mucosa del recto y del útero; por lo tanto, ello facilita ampliamente el diagnóstico confiable de estructuras embrionarias. Por otra parte, el transductor con frecuencia de 5.0 MHz, tiene un mayor alcance pero menor resolución, sin embargo,es de mayor tamaño, lo cual dificulta el diagnostico de 31 Cuadro 1. Diagnóstico positivo de estructuras embrionarias al día 30 de gestación para ambos tratamientos. Tratamiento N Saco Embrionario Embrión Latido Cardiaco 1 (5.0) 12 58.3a 8.3a 0.0a 2 (7.5) 12 100.0b 75.0b 8.3a a,b Literales diferentes indican que existe diferencia estadística (P<.05). 32 estructuras embrionarias debido al tiempo de exposición utilizado en el presente trabajo. Lo anterior coincide con Campo (1998), quien recomienda utilizar para el examen ultrasonográfico de ovarios, útero y preñeces menores a 40 días, el transductor transrectal de 7.5 MHz, porque posee mayor calidad de imagen, requerida para el diagnóstico preciso de la gestación temprana. Sin embargo, se considera importante comentar que el poder de resolución de ambos transductores puede permitir que una persona con la suficiente experiencia en el diagnóstico de gestación por ultrasonografía, detecte de igual forma las estructuras embrionarias presentes al día 30 de la gestación, con cualquiera de los transductores utilizados en el presente experimento (7.5 y 5.0 MHz). Además, el tiempo asignado a cada medición fue de 30 segundos, situación que puede también haber limitado la posibilidad de la detección de estructuras embrionarias con el transductor de 5.0 MHz, ya que este es de mayor tamaño que el de 7.5 MHz, lo cual puede dificultar su manipulación sobre el tracto reproductor cuando no se tiene mucha experiencia en el uso del equipo de ultrasonido. Al respecto, Ginther (1995) comenta que la capacidad de resolución de los transductores de 5.0 y 7.5 MHz para la detección temprana de la gestación (desde el día 26), es muy similar, por lo que asume que la confiabilidad en la detección temprana de la gestación bovina no difiere con el uso de cualquiera de los dos transductores, a menos que éstos sean de baja calidad. Además, sumando el número de hembras que fueron detectadas gestantes con ambos transductores, nos da un porcentaje de 79% (19 de 24), lo cual coincide con Ginther (1998), quien reporta el mismo porcentaje con el uso de ambos transductores para la detección temprana de la gestación en el bovino. 33 El cuadro 2 muestra la presencia de estructuras embrionarias que fueron diagnosticadas por medio de ultrasonografía al día 35 post-inseminación, donde se observa que en el T1, el saco embrionario, el embrión y el latido cardiaco, fueron detectados en el 83.3%, 75.0% y 58.3% de las vacas, respectivamente; mientras que en el T2 se diagnosticó la presencia de las estructuras antes mencionadas, en un 100%, 91.7% y 75.0%, respectivamente; no encontrando diferencia estadística (P>.05) entre ambos tratamientos para ninguna de las estructuras diagnosticadas; aún y cuando, se observó una diferencia de 16.7% entre ambos tratamientos para las tres variables analizadas en el presente experimento. Los resultados anteriores muestran que en el T2 se encuentra un incremento no significativo, con respecto al T1, en la precisión para el diagnóstico tanto del Saco Embrionario, como del Embrión y del Latido Cardiaco. Esto se atribuye a que para el día 35 de edad embrionaria, las diferentes estructuras diagnosticadas en el presente trabajo son lo suficientemente evidentes para ser detectadas tanto con el transductor de 5.0 como con el de 7.5 MHz, razón por la cual con ambas frecuencias es posible diagnosticar estructuras embrionarias con bastante precisión desde el día 35 de edad en adelante. Pierson et al. (1994) señalan que los transductores de 5.0 y 7.5 MHz son considerados de alta frecuencia, ya que su poder de resolución es similar, pero mucho mayor que el transductor de 3.5 MHz. La única ventaja de este último, es que tiene mayor poder de penetración; sin embargo, no se requiere de gran poder de penetración para la detección de gestaciones tempranas de 30 a 35 días en el bovino. 34 Cuadro 2. Diagnóstico positivo de estructuras embrionarias al día 35 de gestación para ambos tratamientos. Tratamiento N Saco Embrionario Embrión Latido Cardiaco 1 (5.0) 12 83.3a 75.0a 58.3a 2 (7.5) 12 100.0a 91.7a 75.0a a Literales idénticas indican que no existe diferencia estadística (P>.05). 35 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES En base a los resultados encontrados en la presente investigación, se concluye que para el diagnóstico temprano de la gestación en el bovino, es decir, a los 30 días, es importante la utilización preferentemente del transductor de 7.5 MHz, sobre todo cuando no se tiene suficiente experiencia, lo cual en un momento dado, podría dificultar la adecuada manipulación del transductor de 5.0 MHz. Sin embargo, esta situación no se presentaría cuando la persona que realiza el diagnóstico ultrasonográfico posee amplia experiencia en dicha actividad, obteniendo la misma confiabilidad en el diagnóstico de estructuras embrionarias, independientemente del transductor utilizado. En lo que respecta a la evaluación realizada al día 35, es evidente que no debe existir diferencia en el diagnóstico de las estructuras embrionarias, debido a que a esta edad ya pueden ser fácilmente detectadas con cualquier transductor (7.5 y 5.0 MHz). Asimismo, el presente trabajo resalta la importancia de la utilización del ultrasonido como una importante herramienta para ayudar a mejorar el manejo reproductivo del ganado bovino productor de leche, ya que aún y cuando no corrige los problemas por sí solo, permite detectar las fallas existentes en el manejo reproductivo, por lo que el productor tiene la oportunidad de corregir dichas fallas a la brevedad y así evitar mayores pérdidas que a final de cuentas afectan la rentabilidad de la explotación lechera. En base a lo anterior, se recomienda la utilización rutinaria de la ultrasonografía para la detección de la gestación desde el día 30, con la finalidad de apoyar al productor permitiéndole mejorar de manera significativa su manejo reproductivo. 36 Por otra parte, también es recomendable la realización de otros trabajos de investigación similares en los cuales se inicie el diagnóstico de la preñez en etapas más tempranas, es decir, desde el día 25 al 28, utilizando transductores de alta resolución, con la finalidad de evaluar la precisión en la detección temprana de la gestación. 37 LITERATURA CITADA Arthur, G.H., D.E. Noakes y H. Pearson. 1991. Reproducción Y Obstetricia en Veterinaria. Bearden, J.H. y W. J. Fuquay. 1982. Reproducción Animal Aplicada. Ed. Interamericana. México, D.F. Blood, D.C. y V.P. Studdert. 1993. Diccionario de veterinaria. Ed. McGraw-Hill, Interamericana. México, D.F. Campos, J. 1998. La ecografía como medio diagnóstico y evaluación de los procesos reproductivos en el bovino. Universidad de la Habana, Cuba. Giespert, C. 1999. Diccionario de medicina. Grupo Editorial Océano. Barcelona, España. Ginther, O.J. 1995. Ultrasonic imaging and animal reproduction: Fundamentals. University of Wisconsin. U.S.A. Ginther, O.J. 1998. Ultrasonic imaging and animal reproduction: Cattle. University of Wisconsin. U.S.A. Ginther, O.J. 2000. Selection of de dominant follicle in cattle and horses. A review. Anim. Reprod. Sci. 60:61. Hafez, E.S.E. 1996. Reproducción e Inseminación Artificial e Animales. Ed. Interamericana. México, D.F. Kastelic, J.P., D.R. Bergfelt and O.J. Ginther. 1991. Ultrasonic detection of the conceptus and characterization of intrauterine fluid on days 10 to 20 in heifers. Theriogenology. 35:569. 38 Kastelic, J.P., R.A. Pierson and O.J. Ginther. 1990. Ultrasonic morphology of corpora lutea and central luteal cavities during the estrous cycle and pregnancy in heifers. Theriogenology. 34:487. Pierson, R.A., G.A. Bob y G.P. Adas. 1993. Uso de la ultrasonografía para el estudio de los evetnos reproductivos en el bovino. Memorias del Simposio Internacional de Reproducción Animal. Córdoba, Argentina. Pierson, R.A., J.P. Kastelic and O.J. Ginther. 1994. Ultrasonic imaging of the ovaries and uterus in cattle. Theriogenology. 29:21. 39