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Síntomas de enfermedades bacterianas Diagnóstico de Bacterias fitopatógenas 25 de abril de 2012 Ing. Agr. María José Montelongo Síntomas de enfermedades bacterianas Lesiones en frutos • Manchas foliares • Manchas en frutos • Cancros • Marchitez • Hiperplasia • Podredumbre • Costras • Necrosis Síntomas de enfermedades bacterianas Afecciones vasculares Xanthomonas axonopodis pv. citri Pseudomonas syringae pv. papulans Xanthomonas campestris pv. vesicatoria Síntomas de enfermedades bacterianas Marchitez Síntomas de enfermedades bacterianas Manchas foliares Síntomas de enfermedades bacterianas Manchas angulares, acuosas Síntomas de enfermedades bacterianas Manchas foliares Pantoea stewartii Síntomas de enfermedades bacterianas Cribado PASOS DEL DIAGNOSTICO Observación del problema Planteo de hipótesis Prueba de hipótesis Aceptación o replanteo de hipótesis Diagnóstico de enfermedades bacterianas • • • • • • • • • Observación de síntomas y signos Aislamiento en medios de cultivo Prueba de hipersensibilidad en no huésped Pruebas de patogenicidad Prueba de Gram Características culturales Pruebas bioquímicas y fisiológicas Pruebas serológicos (ELISA) Técnicas moleculares La bibliografía indica que podría ser una bacteria!! Técnicas para ver el signo de bacterias Microcorrida: para hojas Técnicas para ver el signo de bacterias Test de flujo: para tallos Diagnóstico de enfermedades bacterianas • • • • • • • • • Aislamiento Observación de síntomas y signos Aislamiento en medios de cultivo Prueba de hipersensibilidad en no huésped Pruebas de patogenicidad Prueba de Gram Características culturales Pruebas bioquímicas y fisiológicas Pruebas serológicos (ELISA) Técnicas moleculares Aislamiento Podemos utilizar el material observado en la microcorrida o test de flujo Aislamiento Indirecto Cultivo trampa Aislamiento Diagnóstico de enfermedades bacterianas • • • • • • • • • Diagnóstico de enfermedades bacterianas Observación de síntomas y signos Aislamiento en medios de cultivo Prueba de hipersensibilidad en no huésped Pruebas de patogenicidad Prueba de Gram Características culturales Pruebas bioquímicas y fisiológicas Pruebas serológicos (ELISA) Técnicas moleculares Hipersensibilidad en no huésped 1. Se realiza una inoculación masiva en el mesófilo de una hoja de una planta NO HUESPED 2. Se observa la ocurrencia (o no) de reacción de hipersensibilidad Prueba de patogenicidad Inoculación mediante aspersión Hipersensibilidad en no huésped La aparición de una reacción de hipersensibilidad indica que la bacteria inoculada es patógena. Prueba de patogenicidad Inoculación mediante infiltración Prueba de patogenicidad • Patógenos vasculares: inoculación al tallo – axila - pinchar a través de gota – inyección al tallo Características Taxonomía taxonómicas – Morfológicas, – Culturales (forma, bordes, color de las colonias) – Fisiológicas – Bioquímicas – Patológicas (capacidad para atacar a determinado huésped) Morfología de colonia en medio sólido Diagnóstico de enfermedades bacterianas • • • • • • • • • Observación de síntomas y signos Aislamiento en medios de cultivo Prueba de hipersensibilidad en no huésped Pruebas de patogenicidad Prueba de Gram Características culturales Pruebas bioquímicas y fisiológicas Pruebas serológicos (ELISA) Técnicas moleculares Morfología de colonia en medio sólido Forma Elevación Borde Pared celular Prueba de gram indirecta GRAM (+) Principales géneros de Bacterias fitopatógenas Coloración de la colonia en medio YDC Crema GRAM (+) – Clavibacter – Curtobacterium – Streptomyces GRAM (-) Amarilla GRAM (-) – Erwinia – Pseudomonas – Xanthomonas – Xylella – Agrobacterium Características fisiológicas Pseudomonas Agrobacterium Burkholderia Ralstonia Erwinia Xanthomonas Erwinia Reacción de o/f Reacción de oxidación/fermentación o de Hugh & Leifson La mayoría de las bacterias fitopatógenas tienen metabolismo oxidativo • Metabolismo oxidativo – Pseudomonas – Xanthomonas – Xylella – Agrobacterium – Clavibacter • Metabolismo fermentativo – Erwinia Características fisiológicas Producción de pigmentos fluorescentes Diagnóstico de enfermedades bacterianas • • • • • • • • • Observación de síntomas y signos Aislamiento en medios de cultivo Prueba de hipersensibilidad en no huésped Pruebas de patogenicidad Prueba de Gram Características culturales Pruebas bioquímicas y fisiológicas Pruebas serológicos (ELISA) Técnicas moleculares Pseudomonas fluorescens se caracteriza por producir pigmentos fluorescentes (izq) Otras Técnicas Otras Técnicas • Técnicas moleculares – PCR – PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism) – Real time PCR – Secuenciación • Serología: ELISA Técnicas moleculares PCR PCR-RFLP Técnicas moleculares Real time PCR Técnicas moleculares Secuenciación Bibliografía consultada • AGRIOS, G. 2005. Plant pathology. 5nd. ed. London, Elsevier Academic Press. 922 p. • KADO, C. 2010.Plant bacteriology. Minessota, APS Press. 336 p. • TRIGIANO, R.; WINDHAM, M.; WINDHAM, A. 2008. Plant pathology, concepts and laboratory exercises. 2nd. ed. Florida, RC Press. 558 p. Diagnóstico de enfermedades bacterianas
