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Assisted Hatching (Eclosión Asistida)
Fátima Olaso
Assisted Hatching (Eclosión Asistida)
1. Desarrollo embrionario temprano. Hatching
2. Factores que influyen en el Hatching
3. Assisted Hatching
4. Métodos
5. Indicaciones
6. Riesgos
7. Conclusiones
1. Desarrollo embrionario temprano. Hatching
 El desarrollo embrionario temprano se caracteriza por una
secuencia de eventos que culminan con la implantación
 La eclosión del blastocisto es un paso crítico en este proceso
1. Desarrollo embrionario temprano. Etapas
Día +1
Zigoto
Día +2
Embrión 2-4 células
Día +4
Mórula
Mórula compacta
Día +3
Embrión 6-8 células
Día +5
Blastocisto
1. Desarrollo embrionario temprano. Día +5
Estadío de Blastocisto
Tras la compactación celular el embrión adquiere una nueva
morfología que recibe el nombre de blastocisto

Formación del blastocele

Diferenciación celular en dos tipos celulares
- masa celular interna
- trofoectodermo

Todo ello rodeado por la zona pelúcida
1. Desarrollo embrionario temprano. Hatching
Blastocisto expandido
Blastocisto “hatching”
Blastocisto “hatched”
Dos mecanismos para explicar la eclosión:
1. Mecánico
- Contracción rápida y expansión lenta
- Presión del embrión sobre la ZP, debilitándola
2. Químico: Secreción de proteasas que digerirían la ZP
1. Desarrollo embrionario temprano. Hatching
Zona pelúcida (ZP)
Capa gelatinosa glicoproteica de 15-20 micras que limita el
espacio perivitelino entre ella y el ovocito
Funciones:
 Mantiene la cohesión entre blastómeras
 Preserva el correcto desarrollo del embrión
confinándolo en un volumen pequeño
 Protección frente a factores externos
Es una estructura esencial durante el crecimiento y maduración
del ovocito, en la fecundación y en las etapas iniciales del DE
1. Desarrollo embrionario temprano. Hatching
El embrión de día 5/6 de desarrollo está preparado para implantar,
para ello deberá eclosionar o desprenderse de la zona pelúcida
La pérdida de la ZP resulta de una intervención conjunta:
- Endometrio (enzimática: proteasa)
- Blastocisto (mecánica: contracción y reexpansión)
2. Factores que influyen en el Hatching
El grosor de la ZP varia durante el DE y va adelgazándose desde
zigoto hasta hacerse una fina capa durante el estadío de blastocisto
El fallo de este proceso de adelgazamiento puede impedir la
eclosión y por tanto la implantación del embrión
La imposibilidad de eclosionar, debido a anormalidades intrínsecas
en el embrión o en la ZP, sería uno de los muchos factores que
limitan la eficiencia reproductiva en humanos
2. Factores que influyen en el Hatching
 Calidad embrionaria
 Anormalidades en zona pelúcida
- Grosor
- Crioconservación y posterior descongelación de los embriones
- Alteraciones en la estructura o función de las glicoproteínas
- ROS generadas por espermatozoides muertos en el medio de
incubación entre gametos al hacer FIV
(Dirnfeld et al. 1999 y 2003, Quinn et al. 1998)
3. Assisted Hatching (AH)
Implica la creación de un orificio o el adelgazamiento artificial de
la ZP para favorecer la eclosión sufrida por todos los embriones
antes de su implantación en el endometrio
La finalidad es mejorar las tasas de implantación
y gestación en un ciclo de FIV
3. Assisted Hatching (AH)
El orificio permitiría a moléculas del endometrio atravesar la ZP
y aumentar la comunicación y el contacto temprano entre el
embrión y el endometrio
 Factores q influyen sobre la implantación:
- Grosor endometrial
- Calidad ovocitaria y embrionaria (edad de la receptora)
- Contractilidad uterina
- No eclosión del blastocisto
- Diversas moléculas como interleukina 8, leptina, mucina 1….
3. Assisted Hatching (AH)
 En 1989, Cohen et al. observaron q los embriones a los que se había
practicado AH tenían una tasa de implantación más alta
 Concluyó q la apertura de un orificio en la ZP favorece el proceso de
eclosión sufrido por todos los embriones antes de su implantación en
el endometrio
 Desde entonces muchos centros de RA y unidades de reproducción
han incorporado la técnica de AH con el fin de mejorar las tasas
de implantación
3. Assisted Hatching (AH)
 Sin embargo el estudio pormenorizado de los trabajos sobre
esta técnica es extremadamente complejo
- Diferencias metodológicas
- Diversos diseños de los trabajos de investigación
- Distintos criterios de selección de las mujeres y los embriones
- Reducido número de casos incluídos en los estudios
Todo ello dificulta la comparación entre grupos
La utilidad del AH es aún controvertida
4. Métodos
El procedimiento técnico de AH se realiza habitualmente en DÍA+3
 Técnicas invasivas (orificio de 30 micras)
- Digestión química con solución ácida de TYRODE’S (pH=2,5)
- Disección mecánica con LÁSER
- Disección mecánica parcial de la ZP
 Técnicas no invasivas (adelgazamiento de la ZP sin romperla)
- Exposición del embrión a una solución ácida débil PRONASA
4. Métodos. Técnicas invasivas
4.1 Laser AH
- Se realiza con microscopio invertido en una microgota (10-15 μL)
- Sistema óptico ZILOS-tk Zona Infrared Laser
- Disección de la zona con 2 o 3 pulsos de 0.5 milisegundos
(dependiendo del grosor de la ZP)
- Tamaño del orificio 5 -10 micras
4. Métodos. Técnicas invasivas
4.2 Digestión con Solución de Tyrode’s (pH = 2.1-2.5)
- Microscopio invertido acoplado a un sistema de micromanipulación
- Micropipeta Holding para sujetar el embrión
- Micropipeta Assisted Hatching para crear el orificio en la ZP
- Se genera un orificio de 30 micras
4. Métodos. Supuestas ventajas e inconvenientes
 Métodos mecánicos y químicos
- Ventajas: económico, asequible (?)
- Inconvenientes: lesiones locales en el embrión
 Láser
- Ventajas
Ausencia de lesiones derivadas del contacto mecánico/químico
Control y precisión
Rapidez: embriones menos tiempo fuera del incubador
- Inconvenientes:
posible efecto mutagénico
pérdida de elasticidad de la ZP
4. Métodos. Revisión de la literatura científica
Selección de las pacientes:
- fallo previo de FIV
- mala calidad embrionaria o ZP anormal
- N = 196 ciclos FIV / ICSI
4. Métodos. Revisión de la literatura científica
4. Métodos. Revisión de la literatura científica
CONCLUSIONES
 Los 3 métodos de AH aumentaron las tasas de gestación clínica e
implantación respecto al grupo control
 Láser AH y el método químico serían más efectivos para aumentar
la tasa de gestación clínica que el método PZD
4. Métodos. Revisión de la literatura científica
- Estudio prospectivo, randomizado
- N = 316 mujeres; edad >39 años
4. Métodos. Revisión de la literatura científica
Láser AH en mujeres de edad avanzada ofrecería mejores resultados
(tasas de implantación más elevadas) en relación al método mecánico
4. Métodos. Revisión de la literatura científica
- Estudio prospectivo
- N = 141 ciclos ; edad >38 años
4. Métodos. Revisión de la literatura científica
4. Métodos. Revisión de la literatura científica
CONCLUSIÓN
El método de Láser AH es más efectivo que el método químico
ya que aumenta la IR, PR en mujeres de edad avanzada
 En estos tres estudios se prefiere utilizar el Láser
 Otro estudio (Balaban, B et al. ; Human Reproduction Vol 17,
No.5 pp. 1239-1243, 2002) no encuentra diferencias
significativas entre los métodos
5. Indicaciones
Desde 1990 se han ido definiendo progresivamente nuevas indicaciones

Edad de la mujer

Aumento de FSH basal sérica

Esterilidad de origen desconocido

Ritmo de división embrionaria lento (<6 células en Día +3)

Multinucleación

Baja respuesta a la estimulación ovárica controlada

Anormalidades de la ZP

Crioconservación
5. Indicaciones. Revisión de la literatura científica
META-ANÁLISIS:
23 estudios (sobre 371 estudios revisados)
Criterios de selección:
>1 fallo previos de FIV
Randomizados, 3 de ellos doble ciego
19 estudios reportaron PR
15 mostraron IR
6 estudios con tasas RNV
5. Indicaciones. Revisión de la literatura científica
CONCLUSIONES
En pacientes con edad >37 años y fallos previos de FIV:
 Aumenta la tasa de Gestación clínica al realizar AH
 No aumenta la tasa de RNV
 Demasiada heterogeneidad para valorar la tasa implantación
así como el método más efectivo
 Datos insuficientes para hacer subgrupos basados en niveles
de FSH o grosor de ZP
5. Indicaciones. Revisión de la literatura científica.
EDAD y FALLOS PREVIOS DE FIV
 N = 172 mujeres-ciclos
 2 grupos: AH / No hatching ; Edad <35 y > 35 años
 >1 fallo de FIV
 Método AH: Solución ácida de Tyrode’s
5. Indicaciones. Revisión de la literatura científica.
EDAD y FALLOS PREVIOS DE FIV
 La IR en el grupo mujeres >35 años que fueron sometidas a AH
es significativamente mayor que en el grupo control
 Respecto a PR y tasa RNV no hubo diferencias significativas
(se necesitan mayores tamaños muestrales, puesto que la
tendencia apunta hacia un aumento en dichas tasas)
5. Indicaciones. Revisión de la literatura científica. EDAD
 N = 89 mujeres
 Edad > 36 años
 2 grupos AH / No Hatching
 Método: Solución ácida Tyrode’s
 Buena calidad embrionaria
5. Indicaciones. Revisión de la literatura científica. EDAD
CONCLUSIONES
 No hay diferencias significativas en IR, CPR ni OPR respecto
al grupo control
 Este estudio sugiere que la técnica de AH no tiene ningún impacto
en los resultados de un ciclo de FIV
 Estudian embriones de buena calidad!
5. Indicaciones. Revisión de la literatura científica.
CRIOCONSERVACIÓN y AH
(2001)




Estudio retrospectivo
N = 370 mujeres
Edad <39
2 grupos: AH / No hatching (control)
RESULTADOS: La PR en el grupo control fue del 22% frente al
37% del grupo AH (P<0.05)
CONCLUSIÓN: La PR es significativamente mayor al realizar AH
en embriones congelados
5. Indicaciones. Revisión de la literatura científica.
FSH basal sérica elevada (> 10 UI/L)
 Estudio retrospectivo
 1er ciclo de FIV
CONCLUSIÓN: Realizar AH basándose únicamente en niveles
elevados de FSH no presenta ningún beneficio
6. Riesgos. Revisión de la literatura científica.
GEMELOS MONOZIGÓTICOS






Estudio retrospectivo
Mala calidad embrionaria (ZP gruesa, fragmentación…)
Edad >38
FSH basal sérica elevada
Fallos previos FIV
Método mecánico de AH
6. Riesgos. Revisión de la literatura científica.
GEMELOS MONOZIGÓTICOS
CONCLUSIÓN
AH realizado con el método mecánico aumenta la PR
así como el riesgo de gemelos monozigóticos y gestación múltiple
7. Conclusiones
 La evidencia publicada hasta el momento no apoya la aplicación
universal o de forma rutinaria del AH en ciclos de FIV
 AH sería clínicamente útil en pacientes con mal pronóstico:
-
>2 fallos previos de FIV
Mala calidad embrionaria
Edad avanzada (>38 años)
En estos casos se han observado mayores tasas de implantación
y gestación clínica tras practicar AH
7. Conclusiones
 Las tasas de RNV no aumentan significativamente probablemente
debido a tamaños muestrales insuficientes
 Cada clínica de forma individualizada debería evaluar su
propia población de pacientes para determinar qué
subgrupos se beneficiarían del AH
 El AH es una técnica complicada y laboriosa que requiere mucha
práctica y experiencia por parte del biólogo que la realiza
 Realizadas por personal experto y en los casos en que esta técnica
está indicada es muy recomendable puesto que reestablece el
potencial implantatorio que el embrión había perdido