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Las enzimas de restricción reciben su nombre de la bacteria de la que fueron
aisladas por ejemplo: EcoRI de Escherichia coli, BamHI de Bacillus
amyloliquefaciens. Las
tres primeras letras en el nombre de la enzima, corresponden la primera al
genero (E) y las
otras dos a la especie (co). Éstas pueden ir seguidas por la designación de una
cepa ( R) y un
número romano (I) para indicar el orden del descubrimiento.
El tipo más común de enzimas de restricción (tipo II) usado en la tecnología del
DNA recombinante proviene de bacterias y no requiere fuente de energía para
el clivaje del
puente. Requiere en cambio iones Mg++ para la unión específica al DNA y
posterior clivaje.
Otras enzimas de restricción clivan palíndromos de DNA de 4 o 6 pb.
Algunas otras enzimas de restricción clivan una secuencia única. Estas enzimas
que
reconocen la misma secuencia se llaman ISOCHIZOMERS.
Las enzimas de restricción cortan dejando extremos cohesivos o romos. Los
extremos cohesivos o adherentes son generados cuando la enzima corta las
dos hebras
asimétricamente, dejando los extremos de cada hebra de simple cadena
complementarias
entre sí. Los extremos cohesivos o adherentes son particularmente útiles en la
construcción de
moléculas de ADN híbridas o quiméricas. Por otro lado, los extremos romos son
generados
DEFINICION:
Las enzimas de restricción o endonucleasas de restricción son enzimas que cortan los enlaces
fosfodiéster de la doble hebra de DNA a partir de una secuencia especifica que reconocen, y ese
punto donde la enzima encuentra la secuencia de nucleótidos se conoce como sitio de restricción.
Las enzimas (ó endonucleasas) de restricción son unas proteínas con acción catalítica
que tienen la propiedad de reconocer secuencias cortas, de unos cuatro ó seis pares de
bases en el ADN de doble hebra, y cortar en todos los puntos donde se encuentre dicha
secuencia. Este lugar de corte se denomina diana de restricción. Cada enzima de
restricción tiene una diana particular en el ADN. sobre como actúa una enzima de
restricción para clonar un fragmento de ADN
La rotura del DNA
produce una serie
de características de
fragmentos y estos
se pueden ligar a
otros DNA, como el
vector de clonación
Cada enzima de
restricción reconoce
una secuencia
nucleotídica
específica en donde
corta el DNA.
Según el ataque, la
enzima puede hacer
un corte que genere
extremos romos ó
bien cohesivos.
Las enzimas de restricción cortan dejando extremos cohesivos o romos. Los extremos cohesivos son
generados cuando la enzima corta las dos hebras asimétricamente, dejando los extremos de cada
hebra de simple cadena complementaria entre sí. Por otro lado, los extremos romos son generados
cuando la enzima corta las dos hebras por el mismo lugar, generando dos extremos doble cadena.
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1. Tipo I y Tipo III:
a. Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación
(metilan).
b. Cortan a cierta distancia de la secuencia de
reconocimiento, las Tipo I cortan lejos de la secuencia de
reconocimiento, ya sea río arriba o río abajo. Las Tipo III cortan
de 5-8 bases antes o despúes de la secuencia que reconocen.
c. Necesitan ATP para moverse a través de la molécula de
DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio del corte.
2. Tipo II:
a. Sólo tienen actividad de restricción.
b. Cortan de manera consistente y predecible dentro de la
secuencia que reconocen.
c. Sólo requieren Mg++ como cofactor.
d. No necesitan ATP.