Download Vigilancia de Laboratorio de los Virus Dengue, Chikungunya y Zika

Virus Dengue, Chikungunya
y Zika
S I T UA C I Ó N E P I D E M I O LÓ G I C A A C T U A L .
CONO SUR
ARGENTINA
A C T UA L I Z A C I Ó N 2 0 1 6
BOLETÍN INTEGRADO DE VIGILANCIA | N ° 291 – SE 52- 2015
Bioq. Francisco García Campos
Prog. Vigilancia por Redes Laboratoriales
DGCE. MSP. Salta
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
1
Objetivos de la reunión
Conocer la Situación Epidemiológica actual de Dengue,
Chikungunya y Zika en Argentina y Cono Sur.
Socializar el Algoritmo propuesto para el Diagnóstico y
Notificación de Dengue, Chikungunya y Zika.
Revisar los conceptos básico para la elaboración de un Plan de
Contingencia para Enfermedades Transmitidas por Vectores
(Dengue, Chikungunya y Zika)
Realizar los ajustes necesarios en los Planes de Contingencia
locales enviados a la DGCE.
Dejar sentada las bases para la elaboración de un Plan de
Contingencia Regional y Provincial.
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Agenda de la Reunión
08.30 hs. Acreditación
08.45 hs. Presentación. Objetivos de la Reunión. Dr. Francisco García
Campos
08.45 a 10.30 hs. Criterios de Notificación del Síndrome Febril Agudo
sospechoso de Dengue, Chikungunya y Zika. Consideraciones sobre
Hantavirus y Leptospirosis.
Notificación al Sistema Nacional de Vigilancia de la Salud: Módulo C2 y
SI.VI.LA (Sistema de Vigilancia Laboratorial). Dra. Griselda Rangeon
10.30 a 10.45 hs.
Café
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10.45 a 11.30 hs.
Diagnóstico diferencial del Síndrome Febril Agudo. Actualización 2016.
Algoritmos Propuestos. Presentación de la modificación de la Red de Dengue y
Arbovirus. Dr. Francisco García Campos
11.30 a 13.00 hs.
Preparación y Respuesta de los equipos locales de salud ante la presencia de
brotes de Dengue, Chikungunya y Zika. Dr. Miguel Astudillo
13.00 a 14.00 hs.
Refrigerio
14.00 a 16.00 hs.
Presentaciones de las Áreas Operativas a cargo de los participantes de la
reunión.
Dr. Miguel Astudillo
16.00 hs.
Cierre de la Reunión. Entrega de Certificados.
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Vigilancia de Dengue y otros
Arbovirus en Argentina. Situación
Actual
Circulación de Virus Dengue en localidades de las provincias de Formosa y
Misiones.
Misiones: DEN1.
◦ Puerto Iguazú, Posadas, Puerto Esperanza, El Dorado y Oberá
◦ Inicio de Síntomas SE 47/2015 (22 al 28/11/2015)
Formosa:
◦ Aumento de febriles a partir de SE 23/2015 (7 al 13/06/2015)
◦ Clorinda
◦ DEN 1 (Confirmado en pacientes de Jujuy, Cordoba, Santa Fe y Salta, con
antecedentes de viaje o estadía en Clorinda)
Chaco:
◦ Presidencia Roque Saenz Peña, 1 caso de dengue probable sin antecedentes de
viaje en SE 46/2015.
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Boletín Integrado De Vigilancia N292 - SE1 (1)
En la provincia de Misiones, los casos más antiguos registrados correspondieron a la
SE44 (1 al 7 de noviembre) en la localidad de Puerto Iguazú. Hasta el momento se
notificaron al SNVS 138 casos.
Se notificaron casos confirmados y probables vinculados a este brote en: Santa Fe, CABA
Buenos Aires y Entre Ríos.
En la provincia de Formosa, los casos más antiguos ocurrieron en la SE21 (24 al 30 de
mayo) en la localidad de Clorinda. Hasta el momento se notificaron 250 casos. Se
notificaron casos confirmados y probables vinculados a este brote en: CABA, Santa Fe,
Córdoba, Jujuy, Buenos Aires, Corrientes, Chaco, Salta y Catamarca.
Además, en la provincia del Chaco se notificaron 2 casos de dengue probable sin registro
de antecedente de viaje en Presidencia Roque Sáenz Peña (SE 46) y Resistencia (SE48).
Por último, entre las SE 27 a 52 se registraron 48 casos importados con antecedente de
viaje a otros países con circulación viral, predominantemente de Paraguay y Brasil, en
Buenos Aires, CABA, Chaco, Córdoba, Entre Ríos, Formosa, Misiones, Neuquén, Río
Negro, Santa Fe y Tucumán. En los últimos 15 días se registraron casos importados en
CABA, Buenos Aires y Santa Fe.
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Vigilancia de otros Flavivirus y Arbovirus
2007, 2008, 2009: Reemergencia de
Fiebre Amarilla Selvática
2014: EPIZOOTIAS POR YFV
CONFIRMADAS EN EL CENTRO DE
BRASIL EN AGOSTO
Las epizootias de
Alouatta antecedieron a
la aparición de los casos
humanos
2014-2015: IMPORTANTE ACTIVAR
VIGILANCIA DE EPIZOOTIAS
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Vigilancia de Laboratorio de los
Virus Dengue, Chikungunya y Zika
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Arbovirus. Un problema de Salud Pública
Arbovirus: nombre genérico (Mnemotécnico) que se la ha dado a un
conjunto
de
virus
transmitidos
todos
por
artrópodos(
del inglés arthropod-borneviruses: virus llevados por artrópodos). CDC2007
Catálogo internacional de arbovirus (1982):
◦ Registra cerca de 500 virus que cumplen con esta característica.
◦ 100 virus causan infecciones clínicas y subclínicas en el hombre.
◦ 36 de éstos virus abundan en más de una de las grandes regiones
geográficas.
◦ 31 de ellos pueden asociarse con síndromes clínicos tales como fiebre,
encefalítis o fiebre hemorrágica.
◦ Solo algunos de los virus tienen importancia para la Salud Pública mundial
o regional (Morbilidad o Mortalidad)
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Concepto Epidemiológico
El término «transmitido por artrópodos» se refiere a fenómenos
biológicos esenciales relacionados con los ciclos de transmisión de
ciertos virus, y no corresponde a la clasificación taxonómica de los
mismos.
La mayoría son Zoonosis (se perpetúan en la naturaleza, intervienen
invertebrados y /o vertebrados distintos del hombre).
Criterios para definir sus funciones como vectores biológicos:
◦ El artrópodo se alimenta de la sangre de un vertebrado con viremia.
◦ Se infecta, y luego de un periodo variable de incubación, puede transmitir
el virus a otro vertebrado cuando succiona nuevamente sangre.
◦ El concepto implica una trasmisión biológica y no mecánica.
◦ Transmisión transovárica (artrópodo).
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Fiebre
Amarilla. Bs.
As. ( 1852,
1858, 1870 y
1871)
Dengue.
Argentina.
Salta 1996
(Rangeon et.al)
Chikunguña.
2014.
Circulación en
América del Sur
Zika. 15/05/2015.
Confirman
Circulación en el
Nordeste de Brasil
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Sistema universal de clasificación de los virus. ICTV (International Committee on Taxonomy of Viruses , 2011)
Familia
Género
Características Características
del género
del Virus
Virus de
importancia
en Salud
Pública
Togaviridae
Alfavirus
Constituido por 28
virus agrupados en
6 complejos
Cápside con una
proteína no
glicosilada
asociada con el
ARN y al menos 2
glucoporteinas en
la envoltura
Sindbis
Encefalitis equina
venezolana, del
este, del oeste.
CHIKV
(Chikunguña)
Flaviviridae
Flavivirus
Constituido por 65
virus agrupados en
22 complejos.
ARN de una sola
hebra. Proteina no
glicoliada en la
cápside, un
polipéptido
pequeño y una
glucoproteina en la
envoltura (lípidos)
Zika
Nilo Occidental
Encefalitis
transmitida por
garrapatas, de San
Luis, Japonesa
Dengue
Fiebre Amarilla
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Serotipos de Dengue en Argentina, 19972015
Circulación autóctona
•
•
•
•
1997: Emergencia del DENV2, Genotipo Asiático
2000-2001: Introducción
DENV-1, Genotipo Americano
2003: Introducción de DENV3, Genotipo Sri-Lanka.
2010: Introducción de DEN-4,
Genotipo II
AÑO
SEROTIPO
Provincia
1997-1998
DEN-2
Salta
2000-2001
DEN-1
Misiones, Formosa y Jujuy
2002
DEN-1
Salta
2003
DEN-1, DEN-2, DEN-3
Salta y Jujuy
2004
DEN-3
Salta, Jujuy y Formosa
2006
DEN-2, DEN-3
Salta, Misiones
2007
DEN-2, DEN-3
Misiones, Corrientes, Salta
2008
DEN-1
Salta
2009
DEN-1
NOA, NEA, CENTRO: 14 prov.
2010
DEN-1, DEN-2, DEN-4
Salta, Misiones, Chaco,
Santiago del Estero, Santa Fé
2011
DEN-1, DEN-2
Santa Fé, Misiones, Chaco,
Salta
2012
DEN-2, DEN-3
Salta, La Rioja, CABA
2013
DEN-1, DEN-4, DEN.2
Salta, Córdoba, Misiones,
Chaco,Formosa, Buenos
Aires , Corrientes, Jujuy
2014
DEN-4, DEN-1
Salta, Córdoba ( CABA
2015 DEN-1, DEN-4 Córdoba, Bs.As. Chaco,
Formosa, Misiones?
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Algoritmo vigente de diagnóstico y notificación de
DENGUE al SIVILA EN PERÍODO INTEREPIDÉMICO
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COMBINACIÓN DE TÉCNICAS DIRECTAS E INDIRECTAS PARA
DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES POR DENGUE EN
MUESTRAS TOMADAS ENTRE 4-6 DIAS DE EVOLUCION
Ns1 / RT-PCR
+
IgM
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Planteamos la utilización de un Algoritmo Seccionado para aumentar
la Sensibilidad del Diagnóstico de DENV para la temporada 20142015
0-3 días
evolución
• NS1
• RT-PCR
• Aislamiento
4-6 días
evolución
• NS1
• RT-PCR /Aislamiento
• IgM
˃ 6 días
evolución
• IgM
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Combinación de pruebas para DENV.
Interpretación de resultados (I)
Muestras tomadas a los 4 días de evolución
A- Combinación AG NS1 + IgM
AG NS1
IgM
Clasificación
Positivo
Negativo
Caso Probable
Positivo
Positivo
Caso Probable
Negativo
Negativo
Caso sospechoso, no conclusivo
Negativo
Positivo
Caso Probable
B- Combinación RT-PCR + IgM
RT-PCR
IgM
Clasificación
Positivo
Negativo
Caso Confirmado
Positivo
Positivo
Caso Confirmado
Negativo
Negativo
Caso sospechoso, no conclusivo
Negativo
Positivo
Caso Probable
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Combinación de pruebas para DENV.
Interpretación de resultados ( II)
Muestras tomadas a los 5-6 dias de evolución
A- Combinación AG NS1 + IgM
AG NS1
IgM
Clasificación
Positivo
Negativo
Caso Probable
Positivo
Positivo
Caso Probable
Negativo
Negativo
Caso Negativo ( se puede estudiar 2°muestra)
Negativo
Positivo
Caso Probable
B- Combinación RT- PCR + IgM
RT-PCR
IgM
Clasificación
Positivo
Negativo
Caso Confirmado
Positivo
Positivo
Caso Confirmado
Negativo
Negativo
Caso Negativo ( IgM 2°muestra/ IgG/
Neutralización en par serológico)
Negativo
PositivoPROG. VIG. Caso
Probable
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ALGORITMO DIAGNÓSTICO LABORATORIAL PARA
DENGUE QUE DESEAMOS ALCANZAR !!!!!
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Algoritmo de laboratorio integrado para los
virus DENV, CHIKV, ZIKAV y otros arbovirus
Propuesta de trabajo de la Red Nacional de
Laboratorios para Diagnóstico de Dengue y
otros Arbovirus .
MODULO VIRTUAL DE ACTUALIZACIÓN Y COORDINACIÓN DE
ACTIVIDADES
Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas “Dr. Julio I.
Maiztegui”, INEVH, ANLIS
Centro Nacional de Referencia, Centro Colaborador en FHV y
arbovirus OPS/OMS
Pergamino , 21 de diciembre de 2015
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Caso sospechoso de acuerdo a sintomatología y epidemiología.
Escenario epidemiológico actual (Argentina, Diciembre de 2015)
Muestra ≥ 4 días de
evolución
Muestra fase aguda
(≤ a 6 días de evolución)
qRT- PCR DENV// ELISA NS1
ELISA IgM DENV
Positivo
Negativo
Positivo
Confirmado
DENGUE
Estudiar par
serológico por
PRNT para DEN y
otros Flavivirus
qRT-PCR CHIKV
Positivo
Negativo
ELISA IgM CHIKV
Positivo
Negativo
Estudiar par
serológico por
para CHIK
y otros
PRNT
Alphavirus
ZIKA y otros Arbovirus (en caso de tener resultados positivos se
Confirmado Virus CHIK
Positivo
Secuenciación del
fragmento para
identificación
RT-PCR genérica
Flavivirus (ZIKA) y
Alphavirus
Negativo
procesa par serológico por neutralización frente a panel de
virus)
 Este es un algoritmo seccionado en el cual se combinan técnicas
directas e indirectas en muestras que tienen 4-6 días de
evolución para mejorar la Sensibilidad
 Dependiendo de las condiciones epidemiológicas y la
disponibilidad de reactivos/ personal se pautará investigación
de infecciones duales
Pedir 2° muestra
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paraPROG.
serología
31
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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL
DE INFECCIONES POR CHIKV
33
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
Selección, recolección y envío de muestras
Selección de muestras a procesar:
Muestras de pacientes con artralgia grave o artritis no explicada por otra
condición médica (negativa para DEN por ej.) , que reside o haya visitado
áreas con circulación de CHIKV
Tipo de muestra:
Suero de Fase aguda: hasta 8 días tras el inicio de síntomas
Suero de Fase convalesciente: 10-15 días tras el inicio de síntomas
LCR: casos de meningoencefalitis.
Conservación de la muestra:
-Refrigerada si se procesa dentro de las 48 hs
-Congelada si se procesa después de las 48 hs
Envío de la muestra
-Con hielo seco (en lo posible), o con geles refrigerantes para asegurar la
cadena de frío
-Siempre con la ficha clínico-epidemiológica completa (fecha de inicio de los
síntomas, Fecha toma de muestra, Historia de viajes, antecedentes de
vacunación, etc)
-Triple envase
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PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
Viremia y respuesta inmune en la infección
por Chikungunya
Métodos directos
Métodos serológicos
Días
35
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
Pruebas de laboratorio para diagnosticar CHIKV
MÉTODOS DIRECTOS:
◦ Aislamiento viral
◦ Gold estándar
◦ Muestra indicada: suero de fase aguda (< de 8 días de evolución y perfectamente
conservada).
◦ Inoculación en líneas celulares suceptibles: BHK-21, HeLa, Vero y C6/36. Efecto
citopático al 3er día.
◦ Confirmación por técnica de IF , RT-PCR o PCR real time del sobrenadante celular.
◦ Aislamiento en laboratorio BSL-3 (INEVH – Pergamino)
◦ RT-PCR convencional
◦ Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR del
inglés Reverse transcription polymerase chain reaction) es una variante de PCR.
Por un proceso de amplificación, genera gran cantidad de copias del material
genético a estudiar.
◦ RT-PCR en tiempo real
◦ PCR cuantitativa (quantitative polymerase chain reaction; qPCR o Q-PCR) o PCR
en tiempo real (en inglés real time PCR). Variante de la PCR utilizada para
amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la
amplificación del material genético a estudiar.
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PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
Pruebas de laboratorio para diagnosticar CHIKV
MÉTODOS INDIRECTOS:
◦ ELISA (Ig M)
◦ ELISA de captura de Ac IgM.
◦ Permite detectar infección actual o reciente.
◦ Presenta cruce serológico con otros alfavirus del mismo grupo ej: virus
Mayaro, Ross River, Onyong nyong)
◦ Neutralización por reducción de placas (PRNT)
◦ Se requiere 2 muestras serológicas para confirmar el diagnóstico. La primera
en la fase aguda, y la segunda en la fase convaleciente (15 a 20 días de la
primera).
◦ Aumento en 4 veces el título entre muestra aguda/convaleciente.
◦ Validar especificidad: estudiar panel de alfavirus
◦ IHA (Inhibición de la Hemoaglutinación)
◦ Se requiere 2 muestras serológicas para confirmar el diagnóstico. La primera en la fase
aguda, y la segunda en la fase convaleciente (15 a 20 días de la primera).
◦ Aumento en 4 veces el título entre muestra aguda/convaleciente.
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PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
Vigilancia de Zika en Argentina
A través de la Red Nacional de Laboratorios de Dengue y Otros
Arbovirus.
Que vigilar?:
◦ Casos de Síndrome febril agudo inespecífico con menos de 7 días de
evolución desde el inicio de la fiebre, en los que se haya descartado dengue.
◦ Pacientes Ig M + para dengue y NT (neutralización de anticuerpos Ig G)
Negativa para DEN-1, DEN-2, DEN-3, DEN-4, YF, SLE, WN.
Que Pruebas de Laboratorio se realizan para confirmar la infección?
◦ Aislamiento viral (INEVH)
◦ RT-PCR tiempo real.
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PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
Integrando
algoritmos…
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
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DENGUE
PERIODO DE VIREMIA ANTES DEL INICIO DE SÍNTOMAS
-14 -13 -12 -11 -10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3 -2
-1
FIEBRE
1
FASE AGUDA
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
FASE DE CONVALESCENCIA
12 13 14 15 16 17
18
19
20
21
VIREMIA
Muestras Tempranas
Positivo: Caso Probable.
Confirmo con rt-PCR
Negativo: No conclusivo.
NS 1 Solicito muestra con mas
de 5 días de evolución y
realizo Ig M
Positivo: Caso
Confirmado. Determina
Serotipo
Negativo: No conclusivo.
rt-PCR
Solicito muestra con mas
de 5 días de evolución y
realizo Ig M
Muestras Tardías
Ig M
Ig M Positiva (*)(**). Caso Probable.
Ig M Negativa. Caso Negativo (Descarto Dengue)
Ig G (1º)
I g G (2º)
(*) En Áreas sin circulación autóctona de Dengue: Ig M POSITIVA (Dengue Probable), solicitar nueva muestra obtenida entre los 10 y 15 días de la
primera para realizar Ig G - Neutralización.
(**) En Áreas con circulación autóctona de Dengue: Ig M POSITIVA Confirmo Dengue por Nexo Epidemiológico
Ig G (Neutralización)
Negativa: Dengue Descartado
Constante: Dengue Anterior
Positiva: Dengue Confirmado
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
40
CHIKUNGUNYA
PERIODO DE VIREMIA ANTES DEL INICIO DE SÍNTOMAS
-14 -13 -12 -11 -10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3 -2
-1
FIEBRE
1
FASE AGUDA
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
FASE DE CONVALESCENCIA
12 13 14 15 16 17
18
19
20
21
VIREMIA
Muestras con menos de 8 días desde la F.I.S.
Positivo: Caso Confirmado
rt-PCR
Negativo: No conclusivo. Solicito muestra
con mas de 8 días de evolución y realizo Ig
M
Ig M
Positivo: Caso
Probable.
Solicitar nueva
Negativo: No
conclusivo.
Solicito muestra
Ig M
Muestras con más de 8 días desde la F.I.S.
Ig M
Positivo: Caso Probable. Solicitar nueva muestra entre los
10 a 15 días de evolución de los síntomas (Realizar Ig GNeutralización (*)
Negativo: Caso descartado de CHIKV
Selección de m uestras a procesar:
Muestras de pacientes con artralgia grave o artritis no explicada por otra condición médica (negativa para DEN por
ej.), que reside o haya visitado áreas con circulación de CHIKV.
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
41
ZIKA
PERIODO DE VIREMIA ANTES DEL INICIO DE SÍNTOMAS
-14 -13 -12 -11 -10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3 -2
-1
FIEBRE
1
FASE AGUDA
2 3 4
5
6
7
8
9
10
11
FASE DE CONVALESCENCIA
12 13 14 15 16 17
18
19
20
21
VIREMIA
Muestras Tempranas
Positivo: Caso
PCR Real Probable. Confirmo
time por secuenciación
Flavivirus
Negativo:
Ig M?
Que vigilar?:
Casos de Síndrome febril agudo inespecífico con menos de 7 días de evolución desde el inicio de la fiebre, en los que se haya
descartado dengue.
Pacientes Ig M + para dengue y NT (neutralización de anticuerpos Ig G) Negativa para DEN-1, DEN-2, DEN-3, DEN-4, YF,
SLE, WN.
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
42
-14
-13
PERIODO DE VIREMIA ANTES DEL INICIO DE SÍNTOMAS
-12 -11 -10
-9
-8
-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
FIEBRE
1
FASE AGUDA
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
FASE DE CONVALESCENCIA
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
DENGUE
VIREMIA
Mue s tras Te m pranas
Pos itivo: Caso Probable.
Conf irmo con rt-PCR
Ne gativo: No conclusivo.
Solicito muestra con mas
NS 1
de 5 días de evolución y
realizo Ig M
rt-PCR
Pos itivo: Caso
Conf irmado. Determina
Serotipo
Ne gativo: No conclusivo.
Solicito muestra con mas
de 5 días de evolución y
realizo Ig M
Mue s tras Tardías
Ig M
Ig M Pos itiva (*)(**). Caso Probable.
Ig M Ne gativa. Caso Negativo (Descarto Dengue)
Ig G (1º)
I g G (2º)
CHIKUNGUNYA
VIREMIA
Mue s tras con m e nos de 8 días de s de la F.I.S.
Pos itivo: Caso Conf irmado
rt-PCR
Ne gativo: No conclusivo. Solicito muestra
con mas de 8 días de evolución y realizo Ig
M
Ig M
Pos itivo: Caso
Probable.
Solicitar nueva
Ne gativo: No
conclusivo.
Solicito muestra
Ig M
Muestras con más de 8 días desde la F.I.S.
Ig M
Pos itivo: Caso Probable. Solicitar nueva muestra entre los
10 a 15 días de evolución de los síntomas (Realizar Ig GNeutralización (*)
Ne gativo: Caso descartado de CHIKV
ZIKA
VIREMIA
Mue s tras Te m pranas
Pos itivo: Caso
PCR Real Probable. Conf irmo
time
por secuenciación
Flavivirus
Ne gativo:
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
43
Red de Laboratorio de Dengue y otros
Arbovirus de la Provincia de Salta.
5 Red Dengue corregido 2015.pdf
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
44
Muchas
Gracias!
PROG. VIG. REDES LABORATORIALES. DGCE. MSP. SALTA
45