Download virus de la influenza aviar métodos diagnósticos

VIRUS DE LA INFLUENZA AVIAR
MÉTODOS DIAGNÓSTICOS
INTRODUCCION
La Influenza Aviar o gripe aviar (IA) esta causada por un virus de la familia
Orthomyxoviridae y del género influenza A. Actualmente se conocen tres géneros
(A, B y C) pero sólo el primero se sabe que afecte a los pájaros. La infección
puede ocasionar una amplia variedad de síntomas clínicos, dependiendo del
hospedador, cepa del virus, estado inmunitario del hospedador, condiciones
medioambientales y presencia o ausencia de otros patógenos oportunistas en el
hospedador.
RESISTENCIA A LAS ACCIONES FÍSICAS Y/O QUÍMICAS.
o
Temperatura: Inactivación a 56° C durante 3 horas ó 60° C durante 30
min.
o
pH: Inactivado por pH ácido.
o
Agentes químicos: Inactivado por agentes oxidantes, SDS, solventes
lipídicos, ß-propiolactona.
o
Desinfectantes: Inactivado con formalina y compuestos yodados.
o
Supervivencia: Permanece viable durante largos periodos de tiempo en
tejidos, heces y en el agua.
TRANSMISIÓN.
o
Contacto directo con secreciones (especialmente heces) de pájaros
infectados.
o
Comida, agua, equipamiento o ropa contaminada.
o
Los huevos contaminados rotos pueden infectar los polluelos en los
incubadores.
o
Las aves migratorias pueden introducir el virus en las granjas de
gallinas.
IDENTIFICACIÓN DEL AGENTE CAUSAL.
Se toman heces o muestras cloacales/traqueales de animales vivos o muestras de
órganos o heces de animales muertos y se suspenden en una solución de
antibióticos [penicilina (2000 uds/mL), estreptomicina (2 mg/mL), gentamicina
(50 µg/mL) y micostatina (1000 uds/mL) para tejidos y torundas traqueales y
cinco veces más concentrados para heces y torundas cloacales]; posteriormente,
dichas suspensiones se inoculan en huevos a 35-37° C durante 4-7 días. De todos
los embriones muertos o todos los huevos al final del periodo de incubación se
testa la presencia de actividad hemaglutinante en el fluido alantoideo.
Se puede confirmar la presencia del virus de la influenza A (AIV) mediante una prueba
de inmunodifusión entre el virus concentrado y un antisuero contra la nucleocápsida
que es genérica de todos los virus de la influenza A. En los últimos años, el cultivo de
virus ha sido reemplazado por la RT-PCR como técnica confirmatoria y para hacer la
identificación del mismo. Para el tipado del virus, el laboratorio debe tener antisueros
específicos contra los antígenos aislados de cada uno de los 16 subtipos de
hemaglutinina (H1 a H16) y 9 subtipos de neuraminidasa (N1 a N9) del virus de la
influenza A.
Como alternativa, el virus recién aislado puede testarse mediante las técnicas de
inhibición de la hemaglutinación y de la neuraminidasa frente a una batería de
antisueros policlonales.
Debido a que el término "virus de la influenza aviar altamente patogénico" hace
referencia a la infección con cepas virulentas del AIV, es necesario asegurarse de la
virulencia de todos los aislados del virus; cualquier aislado del virus altamente
patogénico se clasifica como "Influenza Aviar Notificable Altamente Patogénico
(HPNAI)" y, aunque todos las cepas virulentas aisladas hasta la fecha han sido del
subtipo H5 ó H7, la mayoría de los aislados de dichos subtipos han sido de baja
virulencia. No obstante, debido al enorme riesgo de que un aislado de estos dos
subtipos de baja virulencia se transforme en uno altamente virulento por una
mutación en el propio hospedador, se ha decidido clasificar todos los aislados H5 y H7
como HPNAI. El método para determinar la patogenicidad o no consiste en la
inoculación de un mínimo de 8 pollos de 4-8 semanas de edad con el virus; si el virus
causa una mortalidad de más del 75% al cabo de los 10 días se considera como
HPNAI. La caracterización de la virulencia de las cepas de los virus debe llevarse a
cabo únicamente en laboratorios de alta seguridad biológica.
TESTS SEROLÓGICOS.
Debido a que todos los virus de la influenza A poseen una nucleocápide
antigénicamente muy similar, se utilizan los tests de inmunodifusión en gel y los
ELISAs para detectar anticuerpos contra estos antígenos. No obstante, hay que
destacar que no todos los animales desarrollan dichos anticuerpos por lo que a veces
estas técnicas pueden dar falsos negativos.
También se utilizan los tests de inhibición de la hemaglutinación para detección de
anticuerpos en los laboratorios serológicos pero también es posible que ésta técnica
de falsos negativos ya que la hemaglutinina es específica del subtipo.
Últimamente se han desarrollado kits comerciales de detección de los antígenos del
virus basados en técnicas de inmunocromatografía en papel; dichos kits utilizan
anticuerpos monoclonales contra las nucleoproteínas de la cápsida, por lo que son
capaces de detectar la presencia del propio virus de la influenza A. Las principales
ventajas de estos kits son:
1.
Tarda 20 minutos en realizarse desde la recogida de la muestra hasta la
lectura
2.
No requiere personal especializado, ni equipamiento.
3.
Se puede realizar en el campo, granjas, etc.
MAS INFORMACIÓN
Técnicas de Diagnostico de AIV (Pdf. 4MB)