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Sociedad Venezolana de Microbiología. Capítulo Sucre
XXIX Jornadas Venezolanas de Microbiología
"Dr. Vidal Rodríguez Lemoine"
Cumaná del 9 al 11 de Noviembre de 2005
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE CEPAS DE Trypanosoma cruzi
AISLADAS DE HUMANOS. I. TIPIFICACIÓN POR GEN DE MINI EXON.
1,2
R Devera, 1 R Mangia, 1 J R Coura, 1,3O Fernandes.
1
Departamento de Parasitología y Microbiología, Escuela de Ciencias de la Salud,
UDO-Bolívar. Ciudad Bolívar, Venezuela. Av. José Méndez. CEP 8001A.
2
Departamento de Medicina Tropical y 3Departamento de Bioquímica y Biología
Molecular, IOC-FIOCRUZ.
Rio de Janeiro, Brasil. E-mail: [email protected]
Introducción. En los protozoarios kinetoplastidios el gen de mini-exon está
presente en el genoma nuclear en aproximadamente 200 copias arregladas en
secuencias repetitivas de tipo tandem. En Trypanosoma cruzi, la región intergénica
del gen de mini-exon puede ser amplificada por una Reacción de Polimerasa en
Cadena (PCR), permitiendo un agrupamiento de diferentes aislados en dos grupos
principales –T. cruzi I y T. cruzi II. Objetivo. Caracterizar molecularmente cepas de
T. cruzi recién aisladas de pacientes y después de su pasaje en ratones y medio de
cultivo LIT (Liver Infusión Triptose), empleado como herramienta la tipificación por
gen de mini-exon. Materiales y métodos. Las cepas de T. cruzi (13 en total) fueron
aisladas mediante xenodiagnóstico de pacientes chagásicos procedentes de 3
áreas endémicas de Brasil en el estado de Minas Gerais. Primero se caracterizó la
cepa recién aislada (cepas originales) y después de su mantenimiento por 1 año en
ratón albino suizo y en medio de cultivo. Después de la extracción del ADN
genómico se procedió a la amplificación de una parte de la región intergénica
del gen de mini-exon empleando un conjunto de tres oligonucleotídios (Souto et
al., 1996; Fernández et al., 1998). La PCR y el resto de la metodología se realizó
según Souto et al. (1996) y Fernandes et al. (1998). Resultados. En todas las
cepas se obtuvo un producto de amplificación de 300 pb (T. cruzi II) tanto en las
originales como después de mantenimiento. Conclusiones. La tipificación por el
gen de mini-exon fue homogénea en sus resultados (T. cruzi II), hecho que era
esperado por tratarse de aislados humanos del ciclo domestico. Estos datos
también corroboran la especificidad y estabilidad de este marcador.
Palabras clave: Trypanosoma cruzi, caracterización molecular, mini exon.
Apoyo Financiero: CNPq y FIOCRUZ