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Manual de Prácticas de Biología de Procariotas
Licenciatura en Biología
Marzo/2010
M. C. Ruíz Ruíz Francisco
P R Á C T I C A
Pruebas Bioquímicas: Producción de H2S
INTRODUCCIÓN
Algunas especies bacterianas heterotróficas son capaces
de liberar azufre enzimáticamente de los diferentes
aminoácidos que lo contienen, produciendo gas, ácido
sulfhídrico.
La peptona, la cisteína y el tiosulfato son fuentes de
azufre, la enzima responsable de esta actividad es la
cisteinasa
Existen medios de cultivo que contienen peptona y
hierro, que sirven para detectar la producción de ácido
sulfhídrico entre las enterobacteriaceae, los indicadores
del ácido sulfhídrico varían entre estos medios , hierro,
sulfato ferroso, sulfato de amonio ferroso o férrico ,
tiosulfato de sodio o sulfito de bismuto, sin embargo el
principio es el mismo
OBJETIVO
Determinar si ha liberado ácido sulfhídrico por acción
enzimática, de los aminoácidos que contienen azufre
produciendo una reacción visible de color negro
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MATERIALES
2
1
1
1
Cajas de petri
Matraz Erlenmeyer de 250mL
Probeta graduada 100mL
Asa Bacteriológica
Mechero Bunsen
Espatula
MEDIO DE CULTIVO
Agar con sulfito de Bismuto
METODOLOGÍA
Actividad 1 Preparación del medio de cultivo
Agar con sulfito de Bismuto
I Pesar lo siguiente
5g
10 g
20 g
5g
1000 mL
5g
4g
0.3 g
INGREDIENTES
Extracto de carne
Peptona
Agar bacteriológico
Cloruro de sodio
Agua destilada
Dextrosa (glucosa)
Fosfato de sodio
Sulfato ferroso
8g
0.025 g
Sulfito de Bismuto
Verde brillante
II Rehidratar con agua destilada
III Calentar suavemente hasta disolución
IV Esterilizar durante 15 minutos, 15 lb a 121°C
V Una vez estéril el medio de cultivo verter en placas de
petri
Actividad 2 Inoculación
I Del crecimiento de un cultivo puro de 18 a 24 h;tomar
una colonia aislada y sembrar el microorganismo con
estría completa (en toda la placa)
Actividad 3 Incubación
I Incubar las cajas de petri a 35 °C de 24h a 48
Actividad 4 Interpretación
I Medio en placa ASB
POSITIVO: Se observan colonias negras rodeadas de
una zona negro-parduzca en el medio
a) El diámetro de la zona puede ser varias veces
el tamaño de la colonia
b) La superficie de la zona puede mostrar un
reflejo metálico
NEGATIVO: No se desarrolla ennegrecimiento ni reflejo
metálico