Download Resumen coprocultivo 4101C

Instituto Politécnico Nacional
Centro de Estudios Científicos y Tecnológicos No. 6
“Miguel Othón de Mendizábal”
BACTERIOLOGIA
COPROCULTIVO
Profesor: Miguel Ángel Morales Gil
Integrantes:
• Álvarez Bonifacio Yeredid
•
Bello Reyes Saúl Joshafat
•
García Salinas Karen
•
Martínez Hernández Daniel
•
Mayen Bernal Viridiana
•
Quintero Andrés Fabiola Janet
•
Rosales Hernández Diana Carolina
•
Sandoval Rosas Eduardo
Equipos: 4-A y 4-B
Fecha: 09 – Mayo – 2012
G: 4101C
COPROCULTIVO
Importancia clínica
El médico, frente a un paciente que acude por presentar un cuadro diarreico, debe decidir
cuál es la posible etiología y qué tipo de tratamiento debe dar, por lo que recurre al
laboratorio a fin de obtener un diagnóstico microbiológico que permita realizar un abordaje
racional de la enfermedad.
Infecciones gastrointestinales [Coprocultivo]
[Anexo 1]
[Anexo 2]
[Anexo 3]
Afecciones gastrointestinales
La ingestión de patógenos causa muchas afecciones, que pueden quedar delimitadas al
tracto gastrointestinal o comenzar en el intestino para diseminarse después hacia otras
partes del organismo. Los términos utilizados más comúnmente para describir las
enfermedades del tracto gastrointestinal son:

Diarrea: eliminación fecal anormal caracterizada por heces frecuentes y/o liquidas,
habitualmente se debe a enfermedad del intestino delgado, e implica un aumento de la
perdida de líquidos y electrolitos.

Disentería: Trastorno inflamatorio del tracto gastrointestinal asociado frecuentemente a
presencia de sangre y pus en las heces y acompañado por síntomas de dolor, fiebre y
calambres; de modo habitual se debe a enfermedad del intestino grueso.
AGENTES ETIOLOGICOS DE DIVERSOS SINDROMES DIARREICOS
SINDROMES
CARACTERISTICAS
AGENTES ETIOLOGICOS.
Diarrea aguda
liquida
Mecanismo no
inflamatorio, medido por
enterotoxinas.
Rotavirus
Escherichia coli enterotoxigenica
(ETEC)
E. coli enteropatogénica (EPEC)
Salmonella spp.
Cryptosporidium.
Vibrio cholerae.
Clostridium perfringens.
Bacillus cereus.
Staphylococcus aureus.
Vibrio parahemoyiticus.
Giardia lamlbia
Virus Norkwalk.
Adenovirus 40, 41.
Campylobacter jejuni.
Acampylobacter coli.
Diarrea con
sangre
Mecanismo inflamatorio
por invasión del epitelio
intestinal, denominado
usualmente como
disentería. También hay
presencia de moco y
leucocitos en las heces.
Diarrea crónica/
Mal absorción.
Interferencia del agente
infeccioso con la
actividad normal del
tracto gastrointestinal,
pero sin un daño
aparente en pacientes no
inmunodeficientes.
Fiebre enterica.
Mecanismo invasivo con
penetración a través de
la mucosa intestinal y
diseminación
hematógena a todo el
organismo.
Colonización del epitelio
gástrico con ulceración.
Gastritis o atrofia
gástrica.
Adaptado de: Valdespino JL y Col., 1994 (36)
¿Qué es coprocultivo?
•
El coprocultivo o cultivo de heces
Shigella spp.
Entamoeba histolytica.
E. coli enterohemorragica (EHEC)
E. coli neteroinvasiva (EIEC)
Campylobacter jejuni ±
Salmonella (S. enteritidis, S.
choleraesuis,
S. parathypi)
Vibrio parahemolyticus.
Yersinia enterocolitica.
Trichinellaspiralis.
Schistosoma japonicum
Balantidium coli.
Clostridium difficile ±
Giardia lamblia.
Ascaris lumbricoides.
Necatos americanus
Strongyloides stercoralis
Trichuris trichura.
Cryptosporidium
Isopora belli
Enterocytozoon bieneusi
Salmonella typhi
Yersinia enterocolitica
Campylobavter fetus subsp. Fetus
Salmonella paratyphi A y B
Salmonella choleraesuis.
Yersinia pseudotuberculosis
Helicobacter Pylory
Es un estudio cuyo propósito es buscar bacterias patógenas que causan afecciones
gastrointestinales.
Mecanismos que causan diarrea o disentería
La fisiopatología de los síndromes diarreicos o disentéricos afecta 3 mecanismos diferentes:
1.
Toxinas (Entero toxinas)
Algunas baterías como el Vibrio cholerae y ciertas cepas de Escherichia coli después de
adherirse a las epiteliales mucosas del intestino delgado producen entero toxinas que activan
la adenilsiclasa (AMP cíclico). El AMP cíclico es un nucleótido cíclico presente en las
membranas celulares que amplifica la acción de las hormonas y otros compuestos
biológicamente activos en diversas células blanco. La actividad por entero toxinas del AMP
cíclico en las células epiteliales mucosas del intestino delgado causa un bloqueo de la
absorción de sodio lo que lleva a una diarrea acuosa hipertónica profusa. No existe
inflamación mucosa y no se observan leucocitos en la materia fecal.
2.
Invasión
Causado por invasión bacteriana directa de la mucosa intestinal que produce inflamación y
leucocitosis. Especies de Shigella algunas cepas de E. coli muchas cepas no S. typhi de
Salmonella, Campylobacter jejuni invaden directamente la mucosa y submucosa por
producción de entero toxinas que poseen mecanismos diferentes a los del V. cholerae. Se
halla gran número de neutrofilos segmentados, mucina y algunas veces sangre en la materia
fecal.
3.
Penetración de la pared celular
Comprende la penetración profunda de la pared intestinal por parte de los microorganismos
como Salmonella typhi , Yersina enferilitica y Campylobacter fetusi. Habitualmente esto da
como resultado una leve inflamación mucosa intestinal. Sin embargo un aspecto puede ser
una intensa inflamación necrotizante en ganglios linfáticos mesentéricos regionales.
Sintomatología de las enfermedades gastrointestinales
Algunos síntomas que los pacientes con enfermedades infecciosas a menudo experimentan
son:
Fiebre: Es el aumento temporal en la temperatura del cuerpo en respuesta a alguna
enfermedad o padecimiento.
•
Un niño tiene fiebre cuando su temperatura está en o por encima de 37.2° C.
• Un adulto probablemente tiene fiebre cuando la temperatura está por encima de 37.2 37.5° C, dependiendo de la hora del día.
Deshidratación: Significa que el cuerpo no tiene tanta agua y líquidos como debiera.






Boca pegajosa o reseca.
Letargo o coma (con deshidratación severa)
Ausencia o disminución del gasto urinario; la orina aparece de color amarillo oscuro.
Ausencia de lágrimas.
Ojos hundidos.
Fontanelas hundidas (el punto blando en la parte superior de la cabeza) en el bebé
Se clasifica en leve, moderada o severa sobre la base del porcentaje de líquido corporal que
se ha perdido o que no se ha repuesto. La deshidratación severa es una situación de
emergencia potencialmente mortal.
Letargo: Es una sensación de falta de energía, de agotamiento o de cansancio. Que se
caracteriza por un estado de somnolencia profunda y prolongada. Torpeza, insensibilidad,
enajenamiento del ánimo relacionado a dicho estado como comportamientos asociados ya
que nuestro organismo relaja todo nuestro cuerpo.
Toma de muestra
Para efectuar un coprocultivo pueden utilizarse las siguientes muestras:

Heces frescas

Hisopo rectal
Indicaciones para el paciente:

No es necesario el ayuno.

No se requiere dieta especial.

No estar bajo tratamiento con antibióticos o tener más de 72 hrs de haber concluido el
tratamiento. En caso de no ser posible ninguna de estas dos opciones, eespecificar en la
solicitud del estudio que antibiótico se están tomando y cuantos días lleva haciéndolo.
Indicaciones para la toma y condiciones de la muestra

La toma de muestra se deberá realizar lo antes posible luego del comienzo de la
enfermedad (preferiblemente dentro de los cuatro primeros días).

La recolección se efectúa en un recipiente de boca ancha estéril y con tapa de rosca.

Las muestras de consistencia formada deberán ser de 4-6 gramos (tamaño de una
nuez), en caso de ser liquidas entre 5 y 1O ml.

Debe evitarse la contaminación con orina.

Si no se pueden enviar las muestras de manera inmediata se pueden refrigerar sin
exceder 4 hrs. ya que a medida que la muestra fecal se enfría, la caída de pH llega a ser
suficiente para inhibir el crecimiento de muchas especies Shigella y algunas de Salmonella.

Las muestras deben examinarse y cultivarse lo antes posible después de la recolección,
si el cultivo se hace dentro de las dos horas después de tomada la muestra, no se requiere
medio de transporte, pasado este periodo se recomienda usar el medio de transporte Cary &
Blair, caldo selenito o Tioglicolato.

En general no se recomienda el uso de hisopados rectales pero pueden ser necesarios
para obtener muestras fecales de neonatos o adultos mayores.

El hisopo rectal debe insertarse exactamente más allá del esfínter rectal, evitando el
contacto directo con materia fecal en el recto. Estos hisopados deben inocularse de
inmediato en medios de cultivo o colocarse en un sistema de transporte adecuado para
impedir el desecamiento.

En pacientes en edad pediátrica que usan pañales las muestras deben ser tomadas
preferentemente de sus glúteos y no del pañal seleccionando las partes mucosas, purulentas
y/o sanguinolentas y colocarlas en frasco estéril.
Examen macroscópico
Una vez llegadas las heces al laboratorio, es primordial efectuar un examen macroscópico de
las mismas, ya que esta puede proporcionarnos una orientación. En este se observa:

Consistencia (solidas, diarreicas, liquidas); este puede indicar los estados de
protozoarios presentes. Normalmente la deposición debe de ser solida

Color; indica la abundancia y la calidad del flujo biliar. Normalmente y con dieta mixta la
deposición es de color pardo o marrón, oscureciéndose a medida que pasa el tiempo
expuesto al aire, las heces de las personas que sufren estreñimiento son más oscuras y
duras.

Presencia de sangre, pus, moco; puede envolver a todo o una parte del bolo fecal, o
bien, estar íntimamente mezclado con esta masa. La aparición del moco suele ser
reconocible macroscópicamente.

Fragmentos de tejidos o restos alimenticios sin digerir

Olor
Bacterias causantes de diarrea
ESCHERICHIA
E. coli es la especie de bacteria recuperada con mayor frecuencia en los laboratorios clínicos
y ha sido incriminada en enfermedades infecciosas que afectan casi cualquier tejido y
sistema orgánico humano.
Ciertas cepas de E. coli pueden producir enteritis o gastroenteritis por 6 mecanismos
distintos que conducen a 6 síndromes clínicos diferentes.
Estas cepas incluyen E. coli enterotoxigenica (ETEC), E. coli enteropatogena (EPEC), E. coli
enteroinvasiva (EIEC), E. coli enterohemorragica (EHEC), E. coli enteroagregante(EAEC) y
E. coli difusamente adherente (DAEC).
Los aislados de EPEC, EAEC y DAEC, se caracterizan por sus distintos patrones de
adherencia a las células epiteliales in vitro.
Las cepas EPEC se unen a las células huésped en un patrón denominado adherencia local,
en el cual se forman microcolonias sobre las superficies de las células.
Las cepas DAEC están definidas por un patrón de adherencia difusa en el cual las bacterias
cubren difusamente la totalidad de la superficie celular.
En la mayoría de los casos no es necesario identificar un patógeno especifico de E. coli en
un paciente particular. En casi todos los pacientes con gastroenteritis debido a E. coli la
diarrea se resuelve antes de buscar atención médica o luego del tratamiento con antibióticos
empíricos administrados para otras diarreas bacterianas.
La Identificación de especies patógenas de E. coli se realiza con antisueros.
CARACTERÍSTICAS CLAVES DE E. COLI DIARREICOGÉNICA
termino
E. coli enterotoxigenica
abreviatura Fenotipo patógeno
ETEC
Elaboración de
enterotoxinas
termolábiles y/o
termoestables
secretoras que no
dañan el epitelio
mucoso
e. coli enteropatógena
EPEC
E. coli enteroinvasiva
EIEC
E. coli
enterohemorrágica
EHEC
Se adhieren a las
células epiteliales
intestinales en
microcolonias
localizadas que
producen lesiones
histopatológicas
características
conocidas como
“lesiones de fijación y
desprendimiento”
La mayoría de las cepas
son inmóviles,
fermentadoras tardias o
no fermentadoras de la
lactosa y anaerogenas.
Elaboración de toxinas
shiga
Signos y síntomas
Asociado con los
sindromas clínicos
“diarrea del destete” y
“diarrea del viajero”.
Tienen inicio brusco
típico, casi siempre sin
sangre, moco ni pus. La
deshidratación y vómitos
ocurren en algunos
casos.
Habitualmente ocurre en
lactantes, se caracteriza
por fiebre, vómitos,
diarrea acuosa con gran
cantidad de moco y en
algunas ocasiones se
observan leucocitos en
las heces.
Se presenta
principalmente como
diarrea acuosa, se tiene
necesidad imperiosa de
defecar, presencia de
moco, sangre y muchos
leucocitos en las heces.
Diarrea sanguinolenta sin
leucocitos, dolor
E.coli enteroagregante
EAEC
E.coli difusamente
adherente
DAEC

Se adhieren a las
células epiteliales y
producen una toxina
(EASTI)
Se adhieren a las
células epiteliales en un
patrón difuso
abdominal frecuente.
Diarrea con moco, fiebre
leve y poco o nada de
vomito.
Diarrea en la mayoría de
las veces sin presencia
de sangre ni leucocitos
Agar EMB [Eosina Azul de Metileno]
Fundamento
Por la combinación de estos dos colorantes y los dos hidratos de carbono se pueden
distinguir algunos géneros.
Las bacterias lactosa-negativas y sacarosa negativas (Salmonella y Shigella) dan colonias
incoloras, mientras que las lactosa y/o sacarosa-positivas dan colonias púrpura-violeta
negruzco con/sin un centro oscuro y quedan rodeadas de una zona incolora.
Por el efecto de estos mismos colorantes también queda inhibido el crecimiento de la
microflora acompañante, sobre todo la Gram-positiva.

Este medio se siembra en la superficie del medio. Incubar entre 35º y 37ºC de 18 a 24
horas.
En la siguiente imagen se muestra el desarrollo se Escherichia coli
(Colonias Púrpura-violeta con brillo verde metálico)

Agar MacConkey:
Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las
bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces de
fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias rojas
o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar.
Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras.

Para aislar las colonias Sembrar la muestra por estría en la superficie de la placa
preenriquecida en MacConkey, Caldo. Incubar a 35-37 ºC de
18 a 72 horas.
En la siguiente imagen se muestra el desarrollo de E. coli
[Color Rosa-rojo (precip. biliar)]
SHIGELLA
Características microbiológicas. Taxonomía.
Shigella es un bacilo Gram negativo perteneciente a la familia Enterobacteriaceae,
que se encuentra estrechamente relacionada con el género Escherichia, por sus
propiedades bioquímicas, serológicas y por similitudes genéticas.
Se caracteriza por no fermentar la lactosa, ser inmóvil, no produce lisina
decarboxilasa y raramente produce gas a partir de hidratos de carbono. Su
identificación se basa en características bioquímicas y antigénicas. En base a ello
se describen cuatro especies (cuadro 1), todas ellas pueden causar disentería,
aunque con diferente gravedad.

AGAR SS
Fundamento
Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citrato se consigue la
inhibición de las bacterias Gram-positivas. Por el mismo citrato conjuntamente
con el tiosulfato se frena notablemente el desarrollo de Coliformes y Proteus que
podrían acabar cubriendo todo el cultivo. Las bacterias que no fermentan la
lactosa dan colonias incoloras, mientras que las que la fermentan hacen virar el
rojo neutro por la producción de ácido y quedan claramente diferenciadas.
También se diferencian los microorganismos productores de Hidrógeno Sulfuro
que da un precipitado negro de Hierro(II) Sulfuro, que se observa en el centro de
la colonia. La peptona y el extracto de carne son aportes nutritivos suficientes para
estas especies patógenas, aunque algunas Shigellas muy exigentes se
desarrollen lentamente.
Las colonias sospechosas de Shigella crecidas en AgarSalmonella-Shigella son
transparentes, translúcidas u opacas y suelen ser lisas. En este medio las colonias
de otros microorganismos que fermentan la lactosa (coliformes) son colonias
rojizas y en muchos casos mucoides.

AGAR SULFITO BISMUTO
Fundamento
El Bismuto Sulfito y el Verde Brillante inhiben conjuntamente a las bacterias Grampositivas y Coliformes, no restringiendo en absoluto el crecimiento de las
Salmonellas. A su vez por la presencia de azufre en el medio, los
microorganismos capaces de producir Hidrógeno Sulfuro precipitan Hierro(II)
Sulfuro, que da lugar a tonalidades marrones más o menos oscuras e incluso
negras. También se puede reducir el bismuto a metal dando un brillo metálico
alrededor de las colonias correspondientes. Es recomendable hacer un
enriquecimiento previo en caldo.
Sembrar por estría el material objeto de estudio o el procedente del caldo de
enriquecimiento en este caso con caldo tetrationato. Incubar a 35±2ºC de 24 a 48
horas.
Shigella flexneri ATCC 12022 Crecimiento (Nulo-escaso) Color ( Marrón)
SALMONELLA
Nos enfocaremos a la identificación de Salmonella y Shigella en los siguientes medios:




Agar McDonnell
Agar SS
Agar Vede Brillante
Agar EMB
Estos dos últimos enriquecidos con caldo tetrationato para favorecer su crecimiento...
Casi todas las especies de Salmonella crecen bien en presencia de sales biliares. Las
especies de Salmonella y Shigella son mucho menos inhibidas, entran en una fase de
crecimiento logarítmico y son más fáciles de aislar en las muestras fecales.

AGAR McCONKEY:
-Sembrar la muestra por estría cruzada.
-Incubar a 37º 24 horas.
- Este agar contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores de organismos Gram
positivos.
-Las colonias aisladas de bacterias que fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar
rodeadas de una zona de precipitado de sales biliares el cual es debido a una caída en el pH
por la fermentación de la Lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa (como las de S.
tipi, S. paratyphi y S. disentería) permanecen incoloras. (Lado derecho)

AGAR SS:
- Medio altamente selectivo, la lactosa es el único hidrato de carbono y el rojo neutro es el
indicador para la detección de acido.
- Siembra por el método de estría cruzada para obtener colonias aisladas.
- Incubar las placas a 35-37 °C durante 24 a 48 horas y examinar el crecimiento.
- Las enteras bacterias pueden ser diferenciadas en base a su capacidad de fermentar la
lactosa. Las especies de Salmonella y Shigella son no fermentadoras de la lactosa y
forman colonias incoloras. Las especies de Salmonella que son productoras de sulfuro de
hidrógeno desarrollan colonias con centro obscuro.

AGAR VERDE BRILLANTE:
- Sembrar por el método de estría cruzada.
- Incubar las placas a 35°C durante un lapso de 18 – 24 horas
- En este medias las peptonas y el extracto de levadura proporcionan la fuente de nitrógeno,
vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los carbohidratos fermentables. El rojo de
fenol es un indicador de las variaciones de pH y cambia el color del medio a amarillo en
presencia del ácido derivado de la fermentación de los carbohidratos. El verde brillante actúa
como inhibidor de bacterias Gram positivas y de la mayoría de bacterias Gram negativas.
- Las colonias típicas de Salmonella aparecen como colonias de color rosa a blanco,
opacas rodeadas por el rojo brillante del medio. Los pocos microrganismos que crecen en
este medio que son fermentadores de lactosa o sacarosa, son fácilmente identificables
debido a la formación de colonias amarillas- verdes rodeadas de una intensa zona de color
amarilla-verdosa.
- Este medio no es adecuado para el aislamiento de S. Tipi ni de Shigella, sin embargo
algunas cepas de S. Tipi pueden desarrollar dando colonias rojas.

AGAR EMB:
- Sembrar por el método de estría cruzada.
- Incubar las placas 35- 37°C durante 18 a 24 horas.
- El uso de la eosina y del azul de metileno permite la diferenciación de las colonias
fermentadoras de lactosa.
- Además de diferenciar a Salmonella nos permitirá identificar otros organismos lactosa
negativos de organismos doliformes.
- Las peptonas proveen la fuente de nitrógeno, la eosina y el azul de metileno son colorantes
que se combinan para formar un precipitado a pH ácido. Los colorantes actúan como
inhibidores e indicadores. Los carbohidratos proporcionan la fuente de energía, los fosfatos
actúan como buffer.
- Las colonias de Salmonella y Shigella son translúcidas, de color ámbar o incoloras.
VIBRIO

Vibrio Cholerae
Es un bacilo Gram (-) curvo que posee un flagelo polar produce oxidasa y
fermenta glucosa.
Las cepas de esta bacteria a su vez se pueden clasificar de diversas maneras:
Método de
clasificación
Características de Vibrio cholerae
Asociados con
No asociados con epidemias
epidemias
Serogrupos
Biotipos
1
Clásico, El Tor
Serotipos
Inaba, ogawa,Hikojima
Toxina
Producen la toxina del
Cólera
No 01 (serogrupos 02-0138)
Biotipos no aplicables a cepas no
01
Estos 3 serotipos no son
aplicables a cepas No 01
Habitualmente no producen la
toxina de cólera; a veces
producen otras toxinas
Aislamiento en el Laboratorio Clinico
Ya que V. Cholerae necesita tener un medio específico para poder crecer, es
necesario que antes de sembrar nuestros medios de cultivo se enriquezca nuestra
muestra.
Enriquecimiento de la muestra:
 Agua peptonada Alcalina, pH 9.0, de 6-8 horas a 37° C

AGUA PEPTONADA ALCALINA
Uso: Para el enriquecimiento de Vibrio cholerae y otros Vibrios a partir de
diversas muestras.
Fundamento: El medio contiene peptona de gelatina, proporciona los nutrientes
para la supervivencia y crecimiento abundante. El cloruro de sodio mantiene el
equilibrio osmótico del medio. El pH elevado, favorece el desarrollo de
microorganismos que tienen la capacidad de crecer en este medio, inhibiendo a la
flora acompañante.
Sembrado:
 Medio de cultivo TCBS, mantener a 37°C y revisar entre las 18-24 horas.
Seleccionar colonias de color amarillo para Vibrio Cholerae.

AGAR TCBS
Uso: Medio selectivo para el crecimiento de Vibrio cholerae, Vibrio
parahaemolitycus y otras especies patógenas a partir de diversas muestras.
Fundamento: El contenido de peptonas y extracto de levadura proporcionan al
medio la fuente de nutrientes necesarios para el desarrollo de los
microorganismos; el contenido de sales biliares y el colato de sodio inhiben el
desarrollo de Gram positivos sobre todo a los enterococos. La alta concentración
de tiosulfato de sodio y citrato, así como el elevado pH, inhiben notablemente a las
enterobacterias. La sacarosa es el carbohidrato fermentable, utilizando como
indicador de la variación de pH, el azul de bromotimol y el azul de timol, se
presenta un vire amarillo por la producción de ácido incluso en un medio altamente
alcalino como el Agar TCBS.

Vibrios no colericos:
o
o
o
o
o
o
V. Parahemolyticus
V. Mimicus
V. Metschnikovil
V. Hollisae
V. Furnisae
V. Fluviales
YERSINIA
La especie Yersinia corresponde a la familia Enterobacteriaceae, las bacterias se
ven pequeñas y con forma cocobacilar.
Las colonias pueden ser pequeñas y puntiformes en agar MacConkey, en
particular con ciertas cepas de Y. pestis y Y. pseudotuberculosis. Las colonias
tienden a ser puntiformes después de 24 horas de incubación en agar-sangre.
El crecimiento óptimo ocurre en temperaturas entre los 25 a 32º C. Esta familia de
bacterias son las responsables de gastroenteritis, diarrea y linfadenitis
mesentérica.
En la familia Yersinia se encuentran dos principales bacterias, la principal es la Y.
enterocolitica, y la segunda y no tan frecuente es la Y. pseudotuberculosis.

Y. enterocolitica:
Se siembra en MacConkey Agar.
Esta presenta síndromes característicos como la diarrea con sangre.
La mayoría de las cepas de Y. enterocolitica creccen en agares entéricos
selectivos y se presentan como pequeñas colonias lactosa negativas en agar
McConkey y agar SS en 48 horas.
La Y. enterocolitica en particular puede recuperarse de muestras fecales que se
incuban a 25ºC. Ya que lo que se busca es obtener colonias aisladas, su método
de siembra es por estría cruzada.
No se recomienda el uso de EMB porque Y. enterocolítica es sacarosa positiva y
aparase como un coliforme en este medio.
Y. enterocolitica en Agar MacConkey
CAMPILOBACTER
Morfología y características fisiológicas:
Se trata de bacterias gram negativas, pequeñas (0.3-0.6 μm de diámetro, 0.5-5 μm
de ancho), no esporuladas, con una forma distintiva curva o en espiral, con
aspecto de vibrio, cuando se observan a partir de cultivos jóvenes; con más de 48
horas de incubación o tras prolongada exposición al aire adoptan una forma
cocoide.
Casi todas las especies son sensibles al oxígeno y sólo pueden desarrollar en
condiciones de reducción de oxígeno, habitualmente en atmósfera microaerófila(510% de oxígeno).
Todas las especies son capaces de desarrollar a 37ºC, pero C.jejuni tiene una
temperatura óptima de crecimiento de 42ºC, por lo que es práctica habitual en el
laboratorio la incubación a esta temperatura con el fin de facilitar el aislamiento
selectivo del principal patógeno humano del género.
Su velocidad de desarrollo es más lenta que la de las bacterias de la flora normal
entérica, por lo que para su aislamiento a partir de materias fecales se requieren
medios de cultivo selectivos que inhiban esta flora.
Aislamiento e identificación:
Para el aislamiento a partir de materias fecales, los medios de cultivo selectivos
más comunes se basan en agar sangre y antibióticos; los más usados son
Skirrow, Butzler y Campy-BAP.
Las colonias pueden apreciarse en las placas en 24-48 horas, aunque a veces
pueden ser necesarias 72-96 horas.
En este medio la bacteria Campylobacter jejuni crece presentando colonias grises
con posible propagación.
Campylobacter jejuni en Medio Butzler
IDENTIFICACION HASTA ESPECIE
La identificación hasta especie se realiza a partir de pruebas bioquímicas.
Para las bacterias que se encuentran en el coprocultivo normalmente estas pruebas se
realizan con los siguientes medios de cultivo:
 TSI
 LIA
 MIO
 Citrato de sodio
 Urea
 Agar Hierro de Kligler
(La lectura e interpretación de las mismas se explican en los anexos correspondientes.)
Anexo [4]
Anexo [5]
IDENTIFICACION FINAL
[La detección directa de antígenos de rotavirus en materia fecal es particularmente útil
porque el virus no puede recuperarse en cultivo].
En un laboratorio diagnostico, la combinación de la historia clínica y el efecto citopático
(CPE) produce información suficiente para identificar algunos virus o bacterias.
La identificación completa de los aislamientos, incluyendo la serotipificación, requiere la
caracterización inmunológica de los antígenos virales o bacterianos.
El método tradicional para preparar antisueros ah sido inyectar el antígeno en un animal
(cordero, conejo, caballo, cuyo, cabras, etc…). El animal genera entonces anticuerpos
policlonales a una variedad de determinantes (epítopes) del antígeno.
Aunque los epítopes con los que reaccionan los reactivos monoclonales están
estrechamente definidos, puede haber reacciones cruzadas si el epítope es compartido por
otros antígenos. Si los reactivos monoclonales están estrechamente definidos, pueden no
detectar todos los aislamientos.
La identificación de un aislamiento viral o bacteriano desconocido se lleva a cabo mediante el
análisis del grado en el cual los antisueros de reactividad conocida previenen la infección
viral o bacteriana de las células de cultivos celulares, huevos o animales.
Para caracterizar un aislamiento viral o bacteriano se utiliza un suero de referencia conocida.
Tipos de reacciones inmunológicas:
PRIMARIAS: Interacción directa entre antígeno y anticuerpo.
SECUNDARIAS: Hay reacciones observables, como precipitación, aglutinación o fijación del
complemento.
TERCIARIAS: se refieren a ciertos efectos biológicos como opsonizacion, fagositosis y
quimiotaxis.
Se dispone de varias técnicas de laboratorio para medir cada uno de los 3 tipos de
interacciones inmunológicas.
 Los antisueros se inyectan a los animales para que estos se pongan en contacto con
las bacterias y se generen anticuerpos (específicos para las bacterias que se
inocularon en los animales). Posteriormente estos anticuerpos se extraen de la sangre
de los animales para ser utilizadas en la identificación de bacterias aisladas de
muestras biologías. Cuando hay formación de precipitados da positivo a la bacteria en
particular.




En el caso de E.coli hay 6 antisueros diferentes.
En el caso de Shigella son 4 (A,B,C y D).
Para Salmonella hay 6 (A, B, C1,C2,D y E).
Para Vibrio cholerae hay 1 (01)
ANTIBIOGRAMA
El antibiograma es aquel estudio que se le realiza a una cepa, siempre y cuando
sea identificada como patógena, para saber su sensibilidad a diversos antibióticos,
y así conocer con cual y que dosis se va a combatir a dicho patógeno.
En coprocultivo ocuparemos el siguiente método:
Método de Bauer-Kirby
Consiste en realizar el antibiograma en una placa de medio Mueller Hinton, el cual es
un medio enriquecido, es decir en él crecen tanto Gram (-) como Gram(+) donde por
medio de estría masiva se sembrara la colonia o cepa a la cual se le hará el análisis.
Una vez realizada la siembra se deja secar el medio e inmediatamente se colocan
sobre el medio, los Multidisco, los cuales son una serie de papeles filtro
impregnados con diferentes antibióticos.
Los medios se incuban a 37 °C durante 24 horas de pues de ello es hora de leer
los resultados del antibiograma, lo cual se hace midiendo el diámetro del alo que
se forme alrededor de los papeles filtro con antibiótico.
Dependiendo del tamaño del alo se podrá decir que la bacteria tal es resistente
para “equis” antibióticos.
Se hace el reporte correspondiente y se desechan los medios ocupados.
El antibiograma en coprocultivo, solo se realizara a los géneros de:
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Escherichia
Salmonella
Shigella
Yersinia
GLOSARIO
Antisueros: Suero que contiene anticuerpos (inmunoglobulinas) específicos frente
a un determinado antígeno o a varios o Suero animal o humano que contiene
anticuerpos contra una enfermedad específica, que se utilizan para proporcionar
inmunidad pasiva frente a dicha enfermedad. Los antisueros no dan lugar a la
producción de anticuerpos.
Anticuerpo: Molécula de inmunoglobulina específica de antígeno, producida por
un clon de linfocitos B en respuesta a su estimulación por dicho antígeno concreto.
Antígeno:
1. Es una sustancia que se combinará con un anticuerpo a raves de sitios de
unión específicos.
2. Sustancia capaz de reaccionar con las moléculas específicas propias de
una respuesta inmunitaria, es decir, anticuerpos y receptores de linfocitos T.
Agente Etiológico: Entidad biológica, física o química capaz de causar
enfermedad.
Afección - Enfermedad o dolencia de determinada parte del organismo.
Constipación - Es la retención exagerada de materia fecal o el retardo mas allá
del tiempo fisiológico de evacuación de hasta 48 hs. También demostrada por la
retención de forma tal de evacuar menos de tres veces por semana.
Determinante antigénico: porción de la molecula de antígeno responsable de la
interaccion con moléculas de anticuerpo tipo-especificas.
Efecto citopático (CPE): Daño celular causado por la infección de un virus o
Daño inducido por los virus en las monocapas.
Epitope: porción molécular mas pequeña de un determinante antigénico que
reaccionará con un anticuerpo monoclonal.
Etiología: Causa de una enfermedad.
Fontanelas: son las separaciones existentes entre los huecos del cráneo del
bebé, son importantes ya que facilitan que la cabecita pueda amoldarse y
atravesar el canal del parto.
Fisiopatología: Estudio de los cambios funcionales que se asocian con la
enfermedad o lesión.
Inmunología: Ciencia biológica que estudia todos los mecanismos fisiológicos de
defensa de la integridad biológica del organismo. Dichos mecanismos consisten
esencialmente en la identificación de lo extraño y su destrucción. La inmunología
también estudia los factores inespecíficos que coadyuvan a los anteriores en sus
efectos finales.
Infección – Penetración y desarrollo en el organismo de gérmenes patógenos.
Síndrome: Es el conjunto de síntomas que caracterizan una enfermedad o el
conjunto de fenómenos característicos de una situación determinada.
Serotipo: Es la clasificación de un determinado agente infeccioso basada en
métodos inmunológicos, empleando generalmente suero de animales vacunados o
naturalmente infectados, para hacerlos reaccionar con cepas específicas de
campo o del laboratorio para su identificación.
Serotipificación: Determinaciones que constituyen una ayuda para comprobar la
virulencia potencial, la invasividad, la susceptibilidad antimicrobiana y la
constitución genética de varias cepas.
Suero: Algunos tipos de líquidos con características y usos específicos o
Sustancia acuosa rica en proteínas y sales que se separa de la parte coagulada
de algunos líquidos orgánicos, como la sangre, la linfa o la leche.
Tipificar: Representar una persona o cosa el tipo de la especie o clase a que
pertenece.
Tipificación: Ajuste o adaptación de varias cosas semejantes al patrón de un
modelo o norma común o Encarnación del modelo de una especie o clase en un
representante concreto.
REFERENCIAS:

Koneman W. Elmer, et.al, “Diagnostico microbiológico, Texto y Atlas Color”,
Editorial Panamericana, Tercera edición, México, D.F, 1998, pp: 129, 136-138,
180-182, 203-265, 807, 861-863.

García del Valle Araceli [et al]. Manual de microbiología medica. UNAM
1998. Pp 83.

Romero Cabello Raul, "Microbiologia y Parasitologia Humana Bases
etiologicas infecciosas y parasitarias" Editorial medica Panamerica, 3ra. Edicion,
Mexico 2007

http://www.ictsl.net/downloads/microbiologia.pdf

http://www.scielo.cl/pdf/rci/v21s1/art07.pdf

http://www.mcd.com.mx/pdfs/AGAR%20EOSINA%20Y%20AZUL%20DE%2
0METILENO.pdf

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003090.htm

http://www.umm.edu/esp_ency/article/000982.htm#ixzz1uEoVsQwc

http://www.carloshaya.net/laboratorio/media/tomademuestras.pdf

http://www.scielo.org.pe/pdf/rins/v28n1/a18v28n1.pdf

http://es.scribd.com/doc/6617222/Manual-de-Bacteriologia

http://www.seimc.org/documentos/protocolos/microbiologia/cap1.htm

http://www.chopo.com.mx/promociones/detalle/coprocultivo/distrito-federal