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Método Inmunocromatográfico rápido Método El Virus Sincicial Respiratorio (RSV) es la causa mas importante de de pneumonias y bronquiolitis en niños y Recien Nacidos. Así como otros virus respiratorios, el RSV causa un rango de enfermedades respiratorias, siendo la mas común el resfrío con abundante rinorrea. Entre el 1-2% de los niños infectados requieren hospitalización, ocurriendo la enfermedad mas severa en el primer año de vida y en aquellos con enfermedad cardiopulmonar adyacente.. En niños y pequeños normales el virus permanece por 2-3 semanas a lo mas o 1-2 semanas después que el niño llegó al hospital. Debido a su alto poder de contagio y a la permanencia de niños susceptibles en el hospital, el RSV ha emergido como la causa mas frecuente de infección nosocomial en las guarderías pediátricas. Los estudios de Hall y Taber y sus colegas establecieron de que la bronquiolitis y la pneumonía podían ser tratadas con éxito con la administración de ribavirina en aerosol. Este descubrimiento ha hecho que la identificación rápida y exacta de los casos por técnicas de laboratorio sean una parte importante del cuidado de los niños en el hospital. Contrario a los métodos clásicos (Inmunofluorescencia y ELISA) que son laboriosos y consumidores de tiempo, el presente test es rápido, simple y altamente sensible para una detección rápida y confiable del RSV en el tracto respiratorio. La muestra se recolecta en un tubo, se le agrega la solución de extracción, en donde se disuelve. Y unas pocas gotas de este extracto se colocan en la celda de muestra del sistema de reacción. A medida que la muestra fluye a través del adsorbente, el conjugado anticuerpo marcado con colorante se une al antígeno del RSV de la muestra, formando un complejo antígeno-anticuerpo, en la ventana de Reacción Positiva (T) y produciendo una banda de color rosado. El conjugado remanente migra hacia el área Control (C) de la tira, formando una línea rosada En ausencia de RSV, no se produce línea en la zona (T), continuando el flujo de la mezcla a través del absorbente hasta alcanzar la ventana Control (C) en donde el conjugado no unido se une al reactivo produciendo una banda rosada (lo cual indica un correcto funcionamiento de los reactivos). Composición del Kit - 20 bolsas metalizadas selladas que contienen un sistema de reacción( con anti-RSV). Estabilidad : El test es estable hasta la fecha de expiración a (4 - 30) ºC. Si la temperatura excede los 37 ºC, se recomienda refrigerar. ¡¡ NO CONGELAR!! - Gotarios plásticos 20 U - Tórulas 20 U - Solución para la extracción 2 fcos. X 11 ml Recolección y Preparación de la Muestra • Notas Preliminares: - RSV se recolecta casi exclusivamente del Tracto Respiratorio. Lo ideal son las secreciones obtenidas ya sea por aspiración a través de un catéter o por succión dentro de un bulbo de goma suave. También se pueden usar tórulas con secreción nasofaríngea o de garganta. - Si el análisis no se realiza de inmediato, se pueden almacenar las tórulas en un envase limpio y seco a 2-8 °C y analizar hasta las 24 hrs. Siguientes. • Catálogo Presentación 704010 20 det. Interpretación de los resultados Positivo: se observan dos bandas de color Rosado en las ventanas C y en la T. Negativo: aparece una sola banda de color Rosado en la ventanilla C. Además, esto significa una correcta ejecución de la técnica. Error: Si no aparece ninguna banda de color, el test debe considerarse nulo; ya sea por error o por deterioro del mismo. En este caso el ensayo debe repetir. Procedimiento A.-Muestras de aspirado Nasofaríngeo: -Después de la recolección diluir el aspirado con S.Fisiológico esteril, hasta 3 ml. -Colocar 1 ml de esta dilución en un tubo ,plástico y centrifugfar por 10’ a 3.500 rpm. - Descartar el sobrenadante y resuspender el pellet en 0,5 ml de sol. Extractante, agitando con una pipeta. - Dejar que ocurra la extracción por 15’ y luego, realizar el test. B.- Muestras en tórula: - Recolectar la muestra nasofaríngea o garganta con una tórula apropiada -Sumergir la tórula en un tubo plástico que contiene 1 ml de sol. Extractante, girando vigorosamente por 10’’ para que se mezcle totalmente. - Dejar que ocurra la extracción por 15’. Sacar la tórula presionandola contra las paredes del tubo y descartarla adecuadamente. Realizar el test. Realización del Test - Llevar las muestras y reactivos a temperatura ambiente. Sacar el sistema test de la bolsa metalizada. Abrir el tubo plástico que contiene la muestra. - Usando la pipeta plástica, transferir 6 gotas (200 µl) del extracto a la celda de muestra. - Leer el resultado a los 15’ después de adicionar la muestra a la celda. C C C T T T POSITIVO NEGATIVO ERROR Sensibilidad y Especificidad 100% de correlación con otros tests ELISA Reacciones Cruzadas Se analizaron muestras de aspirados nasofaríngeos que contenían: Virus para-influencia (4 muestras), Rinovirus (7 muestras) y Adenovirus (2 muestras) y entregaron resultados negativos repetidamente. Bibliografía • • Chanock, R.M. et al: 1957. Am. J. Hyg. 66: 291-300 Chanock, R.M. et al: 1961. J. Am. Med Assoc. 176: 647653. Inmunodiagnóstico
