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Hallazgo de una enzima pectolítica putativa en bacteriófagos de Brucella sp.
Cuatepotzo Burgos Francisco Manuel; Madrigal Carbajal Vanesa; García Méndez
Karellen; Sánchez Jiménez Eduardo; Contreras Rodríguez Araceli; López Merino
Ahidé*
Laboratorio de Microbiología Especializada, Departamento de Microbiología, Escuela
Nacional de Ciencias Biologicas, IPN. Carpio y Plan de Ayala s/n, Col. Sto. Tomás,
Deleg. M. Hidalgo, CP 11340, México D.F. [email protected]
INTRODUCCION. La pectato liasa es una enzima pectolítica que rompe los enlaces
glicosídicos α-1-4 del ácido poligalacturónico, que es el componente principal de la
pectina de la pared celular de vegetales. Además ha sido reportada su presencia en
las espículas del bacteriófago P22. En fecha reciente, Flores y col. realizaron la
secuenciación del Brucellafago Tbilisi (B-fago Tb), que lisa bacterias del
genero Brucella y específicamente a B. abortus. Al analizar la secuencia, se
encontró que el B-fago Tb presenta una secuencia que codifica para una pectato
liasa putativa en el ORF 29, esta enzima generalmente está presente en bacterias
patógenas de plantas. Por ser una enzima poco reportada en bacteriófagos, se
buscó la presencia del gen en ocho B-fagos tanto de referencia como autóctonos
con la finalidad de determinar su presencia en todos ellos. Esta investigación inicial,
podrá aportar información acerca de otras enzimas líticas, además de las
endolisinas y holinas, que participan en la entrada y /o liberación de estos
bacteriófagos.
MATERIAL Y MÉTODOS. Cepas de Brucella (B. abortus 544, B. melitensis 16M, B.
suis 1330) pertenecientes la colección del laboratorio de Microbiología
Especializada, ENCB, se usaron para la replicación de los B-fagos BFC7, BFC8,
BFT4, BFIN, BFT3, Itzatnagar, Berkeley y Nepean en caldo ISO-SENSITEST con
una MOI de 0.1. Se realizó el diseño de iniciadores para amplificar la region del ORF
29; mediante PCR punto final se realizó la estandarización del método y se procedió
a demostrar el gene en todos los B-fagos, la unica amplificación que se tuvo fue la
del B-fago Nepean; se envió a secuenciar y la secuencia se analizó in silico con los
programas TraceEdit, DNABaser y ClustalX en comparación con la secuencia del Bfago Tb.
RESULTADOS. De los ocho B-fagos estudiados, solo se demostró el gene en el Bfago Np; el amplificado se secuencio y se realizó un análisis in-silico. La región de la
pectato liasa encontrada en el B-fagoTb se encontró también en el B-fago Nepean,
por lo que se puede suponer que el B-fago Nepean podría derivar del Tbilisi o que
podrían tener una relación filogenética muy estrecha. Al comparar las secuencias del
ORF29 del B-fago Tb y Np, ambos presentan algunos polmorfismos.
CONCLUSIONES El B-fago Tb y Np, presentan en el ORF 29 una region codificante
para una enzima pectolìtica poco común en bacteriófagos, que podría tener una
participación en el ingreso y/o salida de los bacteriófagos.