Download PRÁCTICAS de EMBRIOLOGÍA

PRÁCTICAS de EMBRIOLOGÍA
PRÁCTICA 1.
Se abrirá un huevo embrionado de pollo, incubado durante aproximadamente 15 días (Estadio
41HH). Se procederá a su disección y evisceración. Se identificarán los diferentes órganos y
anejos embrionarios, para posteriormente, proceder a realizar la técnica de la tinción de su
esqueleto.
PRÁCTICA 2.
Se abrirán huevos embrionados de pollo, incubados durante diferentes periodos de tiempo,
para observar como va evolucionando la morfología de los diferentes órganos y membranas
extraembrionarias.
Para ello se utilizarán embriones de los siguientes estadios de desarrollo aproximadamente:
1. 14-15HH = 50-55 horas de incubación.
2. 18 HH = 3 días de incubación.
3. 30 HH = 6.5-7 días de incubación.
4. 35 HH = 8.5-9 días de incubación.
HH= Estadios de desarrollo del embrión de pollo según los criterios de Hamburger y Hamilton
(1951).
14-15 HH
Somitas: Entre 22 (14HH) y 24-27 (15HH).
Flexuras y rotación: La flexura craneal, el eje del cerebro anterior y posterior forma un ángulo
90º o algo inferior. La flexura cervical forma una curva abierta. La rotación del tronco se
extiende hasta las somitas 7-9 (14HH) o 11-13 (15HH).
Amnios: Se extiende hasta las somitas 7-10 (14HH) o 7-14 (15HH).
Arcos viscerales (o branquiales o faríngeos): Se distinguen los arcos viscerales y las bolsas
faríngeas (o bolsas viscerales) 1 y 2 (14HH) y 3 (15HH).
Ojo: Empiezan a invaginarse las vesículas ópticas. En el estadio 15 HH se distingue un doble
contorno en la región del iris.
Embrión de pollo de 25 somitas (Freeman and Bracegirdle, 1975)
18 HH
Miembros: Se pueden observar los esbozos de los miembros, siendo los posteriores ligeramente
mayores que los de las alas.
Somitas: 30-36.
Flexuras y rotación: La flexura del tronco se encuentra en la región lumbar. La rotación se
extiende hasta la parte posterior del cuerpo. Existe un brote que es el esbozo de la cola, que ha
girado hacia la derecha formando un ángulo aproximado de 90º.
Arcos viscerales: Los procesos maxilares ausentes o casi imperceptibles. La 4ª bolsa faríngea
ausente.
Alantoides: Forman un bolsillo espeso y cerrado, todavía sin formar vesícula.
Embrión de pollo de 35 somitas (Freeman and Bracegirdle, 1975)
30 HH
Miembros: Están claramente marcados los tres segmentos de los miembros, tanto superiores
como inferiores. Las alas se incurvan en la articulación del codo y las piernas en la articulación
de la rodilla. Se observan surcos entre los dedos 1º y 2º del ala y entre todos los dedos de los
pies.
Arcos viscerales: El proceso mandibular se aproxima al pico, aunque la separación entre los dos
es todavía visible. El alargamiento del cuello es muy marcado.
Esbozos de las plumas: Se observan dos hileras dorsales a cada lado de la médula espinal en la
región braquial y, tres hileras en la región de los miembros inferiores. En la región torácica son
prácticamente indistinguibles.
Diamante: Se distingue como una ligera protuberancia. El pico es más prominente que en
estadios anteriores.
Embrión de pollo 30HH (Hamburger and Hamilton, 1951)
Estos embriones serán disecados para observar la evolución del aparato urogenital:
- En este estadio el mesonefros está creciendo y es el único riñon funcional.
- Las gónadas (ovarios y testículos) están totalmente desarrolladas.
35HH
Miembros: Las membranas interdigitales en manos y pies apenas son visibles. Se distinguen las
falanges en los dedos de los pies.
Arcos viscerales: El alargamiento del pico continua (Distancia entre ojo y diamante mayor).
Esbozos de las plumas: Línea medio-dorsal elevada. Cuatro hileras en el lado interno de cada
ojo. Aparición de esbozos al lado del esternón y extendiéndose a ambos lados del cordón
umbilical.
Ojo: La membrana nictitante ha crecido mucho, aproximándose a la papila esclerótica externa.
Los párpados se han extendido hacia el pico y empiezan a sobresalir del globo ocular. La
abertura palpebral se hace elipsoidal.
Embrión de pollo 35HH (Hamburger and Hamilton, 1951)
Estos embriones serán disecados para observar la evolución del aparato urogenital:
- En este estadio el mesonefros está en su máximo desarrollo.
El metanefros empieza a ser funcional.
- El ovario derecho ya está bastante degenerado.
41HH (1ª práctica. Se utilizarán para realizar la técnica de tinción del esqueleto).
Miembros: Las escamas se solapan en la superficie inferior y superior de la pierna. La superficie
plantar de las falanges está cubierta por papilas totalmente desarrolladas.
Alargamiento del tercer dedo del pie = 14.9 ± 0.8 mm.
Arcos viscerales: Alargamiento del pico desde el borde anterior de la nariz hasta la punta del
pico = 4.0 mm.
Embrión de pollo 41HH (Hamburger and Hamilton, 1951).
Estos embriones serán disecados para observar la evolución del aparato urogenital:
- En este estadio el mesonefros está degenerando.
El metanefros está totalmente desarrollado.
-
El ovario derecho prácticamente ha desaparecido.
PROTOCOL PRÀCTICA 1: TÈCNICA DE TINCIÓ DE L'ESQUELET D'EMBRIO DE
POLLASTRE
INTRODUCCIÓ
Aquesta tècnica consisteix en la coloració del teixit ossi d'embrió de pollastre. Per poder
visualitzar-lo un cop tenyit sense la necessitat d'aparells especials, es du a terme la
transparentació dels teixits tous.
Aquest tipus de tècniques s'utilitzen de manera rutinària en els laboratoris farmacèutics, ja que
és obligatori estudiar l'efecte dels nous fàrmacs sobre el desenvolupament embrionari.
Nosaltres usem embrions de pollastre de 14-15 dies d'incubació (estadi 40-41 HamburgerHamilton). Els embrions es mantindran en un recipient de plàstic de 250 ml durant tot el procés
de tinció.
MÈTODE
1- Per extreure l'embrió, obrirem l'ou buidant el seu contingut sobre una placa de petri.
Retirarem les membranes que l'envolten identificant-les prèviament i el netejarem en una
solució de PBS (Phosphate Buffer Solution).
Composició del PBS:
- Na2HPO4.2H2O --------------- 40 g
- NaH2PO4.H2O ----------------- 7.1 g
- NaCl --------------------------- 202.5 g
- H2O destil·lada ---------------- 26 l
2- Treballant sempre sota una lupa binocular, retirarem la pell de l'embrió procurant no danyar
la resta d'estructures. Un cop extreta la pell, tornarem a aclarir-lo en una solució de PBS.
3- Obrirem l'abdomen introduint les estisores pel forat umbilical en direcció cranial. Arribarem
fins a l'entrada del tòrax, vigilant de no tallar costelles ni estèrnum. En direcció caudal,
arribarem fins a la cloaca.
Seguidament eviscerarem l'embrió buidant el contingut d'ambdues cavitats corporals, la
toràcica i l'abdominal. Després d'aclarir un cop més l'embrió en PBS, el posarem en una solució
d'alcohol etílic al 70%, on s'hi estarà com a mínim 10 dies.
4- Els embrions s'extreuen de la solució d'alcohol etílic al 70%, es renten breument amb aigua
corrent a molt poca pressió i es deixen en una solució d'hidròxid potàssic a l'1% durant un dia.
Composició per a 100 ml de solució de KOH 1%:
- H2O destil·lada ------------- 100 ml
- KOH --------------------------
1g
5- S'extreuen els embrions de la solució de KOH a l'1%, es renten breument amb aigua corrent
sota l'aixeta i es deixen en una solució vermell d'alizarina al 0.006 per mil, en solució d'hidròxid
potàssic a l'1% durant dos dies.
Composició per a 1000 ml de solució:
- Vermell alizarina ------------ 0,006 g
- KOH 1% ---------------------- 1000 ml
6- Es treuen els embrions de la solució d'alizarina, es renten breument sota l'aixeta i es posen en
una solució de glicerol / alcohol etílic al 70% / alcohol benzílic, en una proporció de 2:2:1 fins
que transparentin.
Composició per a 100 ml de solució:
- Glicerol ----------------- 40 ml
- Alcohol etílic 70% ----- 40 ml
- Alcohol benzílic -------- 20 ml
7- Els embrions es guarden en una solució de glicerol / alcohol etílic al 70%, en una proporció
1:1.
Composició per a 100 ml de solució:
- Glicerol ----------------- 50 ml
- Alcohol etílic 70% ----- 50 ml
2ª PRÀCTICA EMBRIOLOGIA
ETAPA FETAL → té tots els òrgans formats i només han de creixer.
Les estructures a destacar són;
· Fetge: creix molt i surt la paret abdominal encara que després es tanca
la paret i va entrant.
· Fetus : té ossificat els seus ossos.
Les etapes que formen el desenvolupament de l’individu són :
· ETAPA FETAL I (on inclouriem la etapa fetal introductoria) → Formació dels esbossos de
les parpelles que creixen de fora cap a dins fins trobar la linia mitja.
· ETAPA FETAL II → fusió dels esbossos de les parpelles.
· ETAPA FETAL III → separació de les parpelles.
L’úter pot augmentar més de 100 vegades per albergar un fetus en etapes avançades.
· Nutrició embrió → Histiotròfica → es nudreix de secrecions de les cèl·lules → trompes
uterines.
→ úter.
· Nutrició fetus → hemotròfica → s’alimenta (nudreix) de sang de la mare.
DETECCIÓ GESTACIÓ EN ECOGRAFIES:
· Ecogènic o ecoico: embrió (es veu blanc – gris); cos luti → gris.
· Anecogènic: líquid alantoideo; líquid / gas (es veu negre).
- Si veiem líquid en l’ecografia, es tracta del líquid que prové de la vesícula alantoidea, es a
dir, és líquid alantoideo.
- Negre → net = gestació.
- Part blanquinosa → embrió.
CLASSIFICACIÓ PLACENTES (segons forma i distribució del contacte materno – fetal):
El còrion del fill interacciona amb l’endometri matern → sac coriònic només contacta amb el
sac mater en una zona depenent del tipus de placenta segons cada espècie.
· Placenta difusa: unió poc profunda però molt estessa i es dóna en cavall, porc, camèl·lids I
· Placenta zonal: en carnívors com el gos, gat... II
· Placenta cotiledonària: vaca, remugant...III
· Placenta discoidal: rossegadors, primats... IV
* El cotiledó (poden haver més de 100) del fetus s’uneix amb la carúncula de l’úter.
GAT:
Úter:
- Paret uterina externa.
- Sac coriònic → té un engrosimente central i contacta el corion amb l’endometri matern.
- Alantoides.
- Corion → externament.
- Amnios → envolta fetus.
PORC / CAVALL:
Úter:
- Quasi tota la superfície del corion contacta amb la mare → difusa = no hi ha superfície
concreta d’unió.
- Contacte superficial, però molt extensa.
REMUGANT:
Úter:
- Placenta cotiledonària.
- L’Alantoides va creixent tant que contacta amb corion.
- La unió és molt estreta en molts punts.
- La superfície externa del corion té zones específiques de contacte → cotiledons (poden
arribar a 100) que s’ajunten amb la carúncula (part del endometri de la mare) de la
mare.
* Detecció sexe → detecció zona genital; a prop del cordó umbilical en el mascle i lluny del
cordó umbilical en la femella.
CORDÓ UMBILICAL:
Conté vasos que es dirigeixen al sac coriònic i està format per:
· 2 artèries → potser sang no oxigenada a la mare.
· 2 venes → porta sang oxigenada al fetus.
· tub cap a l’alantoides → URACO (tub que porta les substàncies de rebuig a l’alantoides).
CONTACTE (unió teixit fetal i matern):
3 capes cel·lulars del fill i 3 de la mare. (6).
· Fetus: - Vasos (han de rebre oxigen i nutrients).
- Vasos del teixit conjuntiu → intermig.
- Corion → extern.
· Mare: - Teixit conjuntiu → intermig.
- Vasos.
- Endometri (epiteli) → extern.
· En el cavall, porc, vaca, camèl·lids existeixen sis capes i els nutrients passen per difusió.
· Vaca → zones on el contacte és més directe.
↓
· Carnívor → 1 zona de contacte i el corion penetra directament en els vasos es a dir, el
corion del fill a entra tant al teixit de la mare que es salta l’epiteli i el teixit conjuntiu →
corion contacta directament amb l’endometri.
· Primats, rossegadors → corion penetra i trenca vasos de la mare (conctacte directe amb la
sang materna → sang en el part.
· Conill → la sang materna banya els vasos del fill (més profunda).