Download Expresión de las isoformas tipo I y II de la enzima 11β

XII Jornadas de Divulgación Técnico Científicas, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNR
Jornada Nacional de Divulgación Técnico Científica 2011
Facultad de Ciencias Veterinarias, UNR – UNL 250º Aniversario de la Enseñanza Veterinaria
Expresión de las isoformas tipo I y II de la enzima 11βHidroxiesteroide Deshidrogenasa en las estructuras
foliculares de bovinos con enfermedad quística ovárica
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Amweg, A.N. ; Salvetti, N.R. ; Paredes, A. ; Lara, H.E. ; Ortega, H.H.
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Laboratorio de Biología Celular y Molecular. Facultad de Ciencias
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Veterinarias, UNL. Laboratorio de Neurobioquímica. Facultad de Ciencias
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Química y Farmacéuticas, Universidad de Chile. CONICET
La Enfermedad Quística Ovárica ha sido definida como una endocrinopatía
progresiva, donde se produce un desequilibrio en el eje hipotálamohipofisario-ovárico, resultando en una falla en el mecanismo de ciclicidad
reproductiva. La asociación entre la incidencia de la Enfermedad Quística
Ovárica y las alteraciones endocrinas sugieren que el origen primario de este
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desorden podría estar a nivel hipotalámico y/o hipofisario . Los
glucocorticoides actúan directamente sobre las células ováricas inhibiendo la
acción de las gonadotrofinas y la síntesis de esteroides. Estas acciones son
reguladas por la enzima 11β-hidroxiesteroide dehidrogenasa (11βHSD). Dos
isoformas de esta enzima han sido clonadas: 11βHSD-1 actúa
predominantemente como una reductasa NADP(H) dependiente para generar
+
cortisol activo o corticosterona, y 11βHSD-2 es una enzima NAD
dependiente de alta afinidad que cataliza la inactivación enzimática de los
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glucocorticoides . En algunas especies se han determinado las bases
moleculares de la transición de 11βHSD-2
a 11βHSD-1 durante la
luteinización, concluyendo que la sobreexpresión de esta enzima en el
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momento de la ovulación es inducida por las gonadotrofinas . Nuestra
hipótesis se basa en que al ser la ovulación un evento inflamatorio
caracterizado por un incremento en la síntesis de interleuquinas y
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prostaglandinas , la generación incrementada de glucocorticoides
antiinflamatorios por la actividad de la 11βHSD-1 en el momento de la
ovulación, podría representar un mecanismo fisiológico para limitar el proceso
inflamatorio en el ovario que en algunos casos podría encontrarse
exacerbado y bloquear la degradación preovulatoria de la pared folicular. En
este sentido, se ha demostrado que los glucocorticoides inhiben la síntesis de
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prostaglandinas y citoquinas pro-inflamatorias en el ovario . El objetivo del
presente trabajo fue determinar los perfiles de expresión in situ de las
proteínas 11βHSD-1 y 11βHSD-2, relacionadas con el metabolismo de los
glucocorticoides, en folículos ováricos bovinos. Para ello se utilizaron
muestras de ovarios obtenidas en frigorífico, las que fueron fijadas en formol
al 10% bufferado durante 8hs, lavándose luego en buffer fosfato salino y
procesándose siguiendo protocolos de rutina para efectuar la inclusión en
parafina. Luego, se efectuaron cortes seriados, de 4 m de espesor, sobre
los que se realizó una técnica inmunohistoquímica indirecta para la
determinación de 11βHSD-1 y 11βHSD-2 utilizando anticuerpos específicos.
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Se realizó la recuperación antigénica y el bloqueo de la actividad de
peroxidasa endógena y de las uniones inespecíficas. Se utilizó un anticuerpo
secundario biotinilado. La reacción fue revelada utilizando 3,3'
diaminobencidina como cromógeno. Mediante análisis digital de imágenes, se
evaluó la inmunomarcación en las tres capas foliculares (Granulosa, Teca
Interna y Teca Externa) de folículos primarios, secundarios, terciarios,
atrésicos y quistes, observándose inmunomarcación positiva de 11βHSD-1 y
11βHSD-2. La expresión de 11βHSD-1 fue significativamente mayor en
folículos terciarios (14,858 ± 1,194) y quistes (13,236 ± 1,620) en células de
la granulosa, con respecto a las demás estructuras foliculares (p<0.05). No
se observaron diferencias significativas entre las distintas estructuras
foliculares en células de teca interna y externa. La expresión de 11βHSD-2
fue significativamente mayor en folículos atrésicos (12,401 ± 1,715) y quistes
(12,448 ± 0,984) en células de granulosa, como así también en folículos
atrésicos (12,676 ± 1,869) y quistes (11,948 ± 1,231) en células de teca
interna; mientras que en células de teca externa la expresión de 11βHSD-2
fue mayor en folículos atrésicos (13,352 ± 2,518) con respecto a las demás
estructuras foliculares (p<0.05). Basados en estos resultados podríamos
inferir que la activación local del cortisol influenciada por la enzima 11βHSD-1
en los folículos ováricos bovinos podría cumplir funciones importantes en la
regulación de la función ovárica. Considerando que la ovulación se trata de
un proceso inflamatorio mediado por interleuquinas y prostaglandinas,
alteraciones en este mecanismo, tanto por el exceso de cortisol de origen
adrenal o por el estímulo directo por ACTH en el ovario, podrían generar una
acción antiinflamatoria local de tal magnitud que inhibiera el proceso de
ovulación. Dado los intrincados mecanismos de regulación endócrina,
parácrina y autócrina existentes en el ovario, pequeños cambios o
alteraciones en los mecanismos de trascripción y/o traducción de esta enzima
podrían ser cruciales en la patogenia de enfermedades que cursan con
anovulación.
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