Download Desarrollo metrológico en microbiología

Departamento Salud Ambiental:
“Desarrollo Metrológico en Microbiología de Alimentos”
Sección Metrología Ambiental y de Alimentos
Instituto de Salud Pública de Chile
Al Instituto le corresponde servir de laboratorio nacional de referencia
en microbiología, inmunología, bromatología, farmacología,
laboratorio clínico, contaminación ambiental y salud ocupacional y
desempeñar las demás funciones que le asigne la ley.
Departamento Salud Ambiental
• Entre, algunas de sus funciones se
encuentra el ser Laboratorio Nacional y de
Referencia, normalizador y supervisor de los
laboratorios de salud pública en el área de
los alimentos.
• Realizar análisis químicos, microbiológicos,
parasitológicos, toxicológicos y otros
exámenes en muestras de alimentos.
Ministerio de Salud
Subdepartamento
de Alimentos
y Nutrición
Subdepartamento
Del Ambiente
Sección
Metrología
MR- EA
CAPACITACIÓN – TRANSFERENCIA TECNOLOGICA
METODOS DE ENSAYO
Necesidades
Subdepartamento
de Biotecnología
y Metrología
Necesidades Laboratorios
Departamento de Salud Ambiental
Funciones Sección Metrología
•
Elaboración de Material de Referencia en Matrices
Ambientales (Aguas, Aire y Suelos)
•
Elaboración de Material de Referencia en Matrices de
Alimentos
•
Coordinar los Ensayos de Aptitud en el área de
microbiología y química de alimentos y ambiente.
•
Capacitar en temas metrológicos a los laboratorios de
ensayos de alimentos y ambientales de los SEREMIS de
salud y privados.
•
Generar un apoyo técnico en el área de validación de
métodos y determinación de incertidumbre en ensayos
de alimentos y ambientales de los SEREMIS de salud y
privados
•
Apoyar a la Unidad de Coordinación de Red de laboratorios
Ambientales privados y públicos, aportando herramientas
de seguimiento continuo del Reconocimiento de
Laboratorios y Transferencias Tecnológicas.
Normativa/ RSA/ Codex
Reconocimiento/Acreditación
Analito
Matriz
Material de Referencia
Calibración
Cartas Control
Ensayos
Equipos
De Calidad
Aptitud
Evaluar
Calidad de
Ensayo
Evaluar
Reconocimiento
/ Acreditación
Calculo de
incertidumbre
Evaluar
Transferencia
Tecnológica
Validación
Evaluar Situación
Laboratorio País
Control de Calidad de los Alimentos
•
•
•
•
•
•
•
HACCP.
Laboratorio de Control de Calidad Interno.
Laboratorios de Ensayos de Alimentos.
Laboratorios del Ambiente SEREMI de Salud.
Laboratorio de Referencia Instituto de Salud Pública de Chile (ISP).
ISP
Laboratorio del Servicio Agrícola Ganadero (SAG).
SAG
Laboratorios Reconocidos por SERNAPESCA.
Inocuos
Calidad
Microbiológica
Alimentos
Saludables
Seguros
Controles Microbiológicos
Patógenos
Indicadores de calidad
Agentes no infecciosos
Resultados Analíticos
Los resultados analíticos obtenidos deben ser
debidamente monitoreados durante
su generación y antes de ser reportados.
De manera de entregar confiabilidad al cliente en su uso.
RESULTADO
LABORATORIO
CONSUMIDOR
ENSAYO
NORMALIZACIÓN
ASEGURAMIENTO CALIDAD
TRAZABILIDAD METROLOGICA
Evitar- Controlar- Detectar- Corregir
ERRORES EN ENSAYOS
Dependiendo del sector de la industria de alimentos,
mediciones analíticas erróneas puede significar un gasto
que tenga un impacto en el presupuesto anual
o en pérdidas de producciones de alimentos.
Un resultado erróneo en un laboratorio
de control de alimentos,
puede derivar en una incorrecta
toma de decisiones, respecto a el producto como
a la debida atención del consumidor afectado.
Intoxicaciones alimentarias – Salud pública
IMPORTANCIA SGC DEL LABORATORIO
¿Cómo puede asegurar la
trazabilidad metrológica un
laboratorio de ensayo de
microbiología?
Condiciones
Ambientales
Calibració
Calibración o
Verificació
Verificación
Trazable
de
equipamiento
Uso de
Material de
Referencia y/o
cepas
certificadas
Control de
Calidad
de MC y
Reactivos
Método
Normalizado
Validado
Participación
en
ensayos
de aptitud.
Condiciones Ambientales
• Calidad Ambiental microbiológico de Aire de salas y CBS.
• Control Ambiental microbiológico de superficies de
mesones de trabajo y equipos.
• Control de esterilidad de material de laboratorio.
• Control de inhibidores.
• Control de potencia germicida luz UV.
• Cabinas de seguridad y/o flujos laminares certificadas (
Filtros de calidad adecuada, controles de velocidad de
aíre).
• Control fisicoquímico y microbiológico de agua grado
reactivo.
• Control de temperatura y humedad, según se requiera.
• Certificación del ciclo de esterilización.
Calibración o Verificación Trazable
de equipamiento
• Calibración de equipamiento en Laboratorio de calibración
acreditado ISO 17.025.
• Calibración de patrones (masa, temperatura, humedad,
presión) en Laboratorio de calibración acreditado ISO 17.025
para la magnitud y el nivel correspondiente.
• Verificación de aparatos con temperatura controlada (
Incubadoras, refrigeradores, baños, etc.) con termómetros
contrastado y trazables.
• Verificación de exactitud y precisión de aparatos
volumétricos de acuerdo a la tolerancia a través de
gravimetría trazable o calibración, según se requiera.
• Programa de Mantención y calibración de equipos.
Uso de Material de Referencia y/o
cepas certificadas
• Uso de cepas certificadas- Registro, manipulación y
controles del cepario.
– Cepas de microorganismos de interés analítico.
– Cepas de microorganismos para el control de medios de
cultivo . NCh 3162/ 1 y 2 (Anexo B parte II).
• Uso de material de referencia trazable.
– Microorganismo de interés o trazador.
– Matriz de alimento de interés o adecuada para los fines del
ensayo.
Control de Medios de Cultivo
•
•
•
•
•
•
•
Establecer debidamente las especificaciones técnicas.
Condiciones de almacenamiento adecuado.
Control por cada lote.
Test de selectividad
Test de Productividad
Control de esterilidad y pH
Establecer tiempo de caducidad adecuado de acuerdo
al tipo de MC y análisis.
• Inventario de Medio de Cultivo y control de stock.
Test
Selectividad
Frecuencia
Cepas de control + y –
Productividad
Selectividad
Para cada nuevo lote.
Semestral si el frasco abierto
no se ha agotado.
Para cada nuevo lote.
Semestral si el frasco abierto
no se ha agotado.
Cepas de control + y –
Para cada nuevo lote de
sustrato enzimático.
pH
Para cada producción si
corresponde.
Esterilidad
Para cada producción
Material
Control
Membranas Filtrantes
Ficha técnica, registrar lote utilizado, RG %
de recuperación de los filtros de membrana,
no difusión de la tinta de la red, buena
difusión MC.
Material de vidrio y contenedores de
muestras
Instrucciones de Lavado material.
Preferentemente detergente Neutro y libre
PO4=.
RG control de lavado: pH 6.5-7.3 o ABT
neutro.
Test de Inhibidores. Libre de inhibidores.
Capacidad adecuada de volumen.
Esterilizables en caso de no ser
desechables.
RG Control del 2% de los lotes de envases
esterilizados.
Fecha de caducidad de 120 días de
esterilidad. Sello de esterilidad.
Identificación de lote esterilizado.
Control de Agua Grado Reactivo
Parámetro
Frecuencia
Requerimiento
CONDUCTIVIDAD
SEMANAL
< 2 µS/m 25ºC
PH
SEMANAL
5.5- 7.5
CLORO LIBRE
RESIDUAL
MENSUAL
< 0.1 mg/L
TOC
SEMESTRAL
< 1 mg/L
METALES (Cr, Ni, Pb, Cd, ANUAL
Zn, Cu)
<0.05 mg/L c/u
METALES TOTALES
ANUAL
< 0.1 mg/L
N- AMONIACAL
SEMESTRAL
< 0.1 mg/L
BACTERIAS
HETEROTROFOS
AEROBIAS Y
ANAEROBIAS
MENSUAL
< 1000 UFC/mL
Validación de Métodos
•
•
•
•
Precisión- Repetibilidad y Reproducibilidad.
Recuperación.
Incertidumbre
Selectividad:
» Morfología m.o.
» Morfología colonia
» Perfil Bioquímico.
– Control positivo
– Control negativo
Participación en
ensayos de aptitud
• Evaluación del desempeño del laboratorio.
• Retroalimentar el SAC.
• Establecer tendencias de los analistas y el
laboratorio respecto a la participación de los
ensayos.
• Comparabilidad con otros laboratorios.
• Herramientas para la determinación de la
incertidumbre de la medición.
¿Qué esta desarrollando el ISP
para colaborar en la diseminación
de la metrología?
Microbiología- Metrología
• Validación de Métodos
---- Guía HPA/UK QSOP 22
ISO 11133-2
• Preparación de Material
de Referencia
---- Guía ISO 34
ISO 17.025
G ILAC 12
• Ensayos de Aptitud
----- ISO 17043
• Incertidumbre
---- Codex Alimentarius
Validación Método-Parte I
Método de Referencia Internacional
Condiciones Ambientales
Calibración de Instrumentos
Microorganismo-matriz-cepa
Aire- Temperatura- Humedad- UV- SuperficieBarreras de Seguridad-Filtros
CBS-Balanzas-Termómetros-Incubadoras-Pipetas
Automáticas-BW-Autoclave-Microscopios
Masa-temperatura-volumen-tiempopresión
Trazabilidad de los paramétros asociados
Productividad - Selectividad-EspecificidadpH- Esterilidad- Físicas
Trazabilidad de Medios de Cultivo
Validación Método- Parte II
Método de Referencia Internacional
Microorganismo-matriz-cepa
Selectividad-Precisión-Recuperación
Validación del Método
Determinación Incertidumbre
Fuentes de incertidumbre
Elaboración de Material de Referencia
Microorganismo
Matriz
Pureza-Homogeneidad-Esterilidad
Liofilización-Homogeneidad
Stock Inicial
Stock de Trabajo
Material de Referencia
Homogeneidad
Homogeneidad-Estabilidad
Material de Referencia en Microbiología
Cepa
Material de Referencia Matriz Alimento
Estudio colaborativo- Ensayo de Aptitud
Internacional
Nacional
Laboratorios de Ensayo
Ensayos de Aptitud
El Programa de Evaluación Externa de la Calidad
(PEEC) consiste en rondas de ensayos de
aptitud desarrolladas por el ISP, con el fin de
entregar una herramienta de evaluación de
calidad a los laboratorios.
En dichas rondas participan diferentes laboratorios
a nivel nacional y también internacional.
La distribución de participación en el PEEC de los
laboratorios es:
un 30% en subprograma del área química ambiental y de
alimentos (QAA)
un 27% en el subprograma de microbiología de alimentos (MA), y
un 43% de los laboratorios adscritos participaron en ambas
rondas.
Anualmente se realizar alrededor de 400 envíos de ensayos de aptitud,
teniendo una cobertura de todo el territorio nacional
Participando además, laboratorios nacionales y extranjeros ( Perú, Bolivia,
Argentina, Brasil, Ecuador, Uruguay)
Importancia de los Ensayos de
Aptitud
Como Laboratorio Nacional y de Referencia, los
resultados obtenidos en el PEEC permiten
detectar el comportamiento de los laboratorios
año a año, y establecer las necesidades de
fortalecimiento en cuanto a transferencias de
metodologías analíticas y capacitaciones
requeridas a nivel país, con el fin de apoyar en
el mejoramiento del desempeño de los
laboratorios nacionales de alimentos