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Trabajo Práctico 2
Caracterı́sticas macro y
microscópicas del desarrollo
bacteriano
Fabián Shalóm ([email protected])
Ramiro Olivera ([email protected])
Martin Pitkowsky (martin− [email protected])
Ayelen Rapoport ([email protected])
Setiembre de 2005
Cátedra de Microbiologı́a - Escuela de Ciencia y Tecnologı́a
Universidad Nacional de San Martı́n
Objetivos
El objetivo de este trabajo fue el entrenamiento en la preparación de extendidos y en distintas técnicas de coloración (tinción de gram y de esporas); y
también la observación de distintas morfologı́as y agrupamientos bacterianos.
Desarrollo
Tinción de Gram
Se tomó un cultivo fresco de Proteus spp., este cultivo fue resuspendido en
5µL de agua destilada sobre un portaobjetos, se lo dejo secar y luego fue fijado
sobre un mechero, a fin de conservar las estructuras celulares. Luego de fijar la
muestra, se le aplicó el colorante cristal violeta durante 20 segundos, se lavó con
agua destilada y se aplicó el mordiente lugol durante 30 segundos. Se aplicó una
solución de alcohol y acetona como decolorante y se dejo reposar durante 10
segundos, se lavó con agua y se aplico el segundo colorante, o colorante de
contraste, safranina, luego se lavó con agua y se dejo secar. Luego se observó al
microscopio óptico para determinar, a partir de la coloración adquirida, si las
bacterias utilizadas eran gram positivas o gram negativas.
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Tinción de Esporas
Se utilizó la técnica de Schaeffer-Fulton de coloración de esporas bacterianas, para la cual utilizamos un cultivo de Bacillus cereus. El mismo era un
cultivo viejo, ya que de esta manera nos aseguramos la presencia de endoesporas bacterianas. La muestra fue fijada por calor en el mechero Bunsen, luego se
agregó una solución de verde de Malquita al 5 %, cubriendo todas las bacterias
del portaobjetos. Se calentó la muestra durante 3 minutos, evitando que se seque
el colorante, se lavó con agua corriente y luego se aplicó el colorante de contraste safranina durante 30 segundos aproximadamente. Se lavó y se observó al
microscopio óptico.
Figura 1: Fotografı́a digital de Proteus spp. en microscopio óptico a 100x. Esta muestra fue
coloreada con tinción de Gram.
Resultados
Se observaron diferentes las muestras, y con sus respectivas tinciones en
microscopio electrónico a 40x y 100x.
En la Figura 1, fotografı́a digital de bacterias del género Proteus spp coloreadas por tinción de Gram. En la misma podemos observar que su coloración es
rosada. Este color correspondiente a la safranina, indica que estas bacterias son
Gram negativas, ya que no conservaron la coloración violácea del cristal violeta
luego de la decoloracion con alcohol y acetona. La morfologı́a de las mismas es
bacilar y el tipo de agrupación es aislada.
En la figura 2, podemos observar la tinción de Gram sobre Staphylococcus
aureus su coloración es violeta correspondiente al colorante cristal violeta, indicando que las bacterias son Gram positivas, aunque la coloración es defectuosa,
debido a la composición del mordiente. Su morfologı́a es de cocos y su agrupación
es en racimos.
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Figura 2: Fotografı́a de Staphylococcus aureus en microscopio óptico a 100x. Esta muestra
fue coloreada con tinción de Gram.
En la Figura 3, observamos la tinción de esporas en Bacillus spp, podemos
ver claramente que la coloración de las esporas es verde del colorante verde
malaquita y en el citoplasma se fijo la safranina, puede observarse que la formación de endoesporas es deformante. En la Figura 4, fotografı́a digital de Bacillus
cereus con tinción de esporas; podemos observar la coloración de las endoesporas en verde. La ubicación intracelular de las mismas es central, rodeando la
espora se encuentra el citoplasma en rosado de la safranina.
Figura 3:
Fotografı́a de Bacillus spp. Coloreadas por tinción de esporas, observadas en microscopio óptico 100x.
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Conclusiones
En el desarrollo de la actividad de laboratorio se realizaron tinciones de
esporas y de Gram. Los resultados observados fueron, las bacterias del género
Proteus spp. se describieron como gramnegativas de morfologı́a bacilar, lo cual
condice con la caracterización bibliográfica de las mismas (Prescott, 2003)[1].
Por otro lado las Bacillus cereus teñidas por la técnica de Shaeffer-Fulton se
describieron como bacilares y con endoesporas centrales, de manera analoga a
la descripbion bibliográfica (Prescott, 2003)[1].
Las bacterias Staphylococcus aureus fueron descriptas como Gram positivas,
morfológicamente como estafilococus. Por otro lado las Bacillus cereus teñidas
por la técnica de Shaeffer-Fulton se describieron como bacilares y con endoesporas centrales, de manera análoga a la descripción bibliográfica.
Desde el punto de vista de formación profesional, se continuó con los objetivos planteados en el primer trabajo de laboratorio, y se adquirió conocimiento
teórico y práctico sobre tinción de bacterias en general.
Figura 4:
Fotografı́a digital de Bacillus cereus en microscopio óptico a 100x. Esta muestra
fue coloreada con tinción de esporas (Schaeffer-Fulton).
Referencias
[1]
Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003) Microbiologı́a 4ta Edición - ISBN:84 − 486 − 0261 − 7
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