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ESTUDIO MICROBIOTICO DE LAS BACTERIAS Y SISTEMAS DE COLORACIÓN
(INFORME)
2004
INTRODUCCIÓN
Las bacterias son seres generalmente unicelulares que pertenecen al grupo de los
protistos inferiores. Son células de tamaño variable cuyo límite inferior está en las 0,2 y
el superior en las 50 ; sus dimensiones medias oscilan entre 0,5 y 1 . Las bacterias
tienen una estructura menos compleja que la de las células de los organismos superiores:
son células procariotas. Igualmente son muy diferentes a los virus, que no pueden
desarrollarse m s dentro de las células y que s lo contienen un ácido nucleico.
Las bacterias juegan un papel fundamental en la naturaleza y en el hombre: la presencia
de una flora bacteriana normal es indispensable, aunque gérmenes son patógenos.
Análogamente tienen un papel importante en la industria y permiten desarrollar
importantes progresos en la investigaci n, concretamente en fisiolog a celular y en
genética. Para hacer un estudio de estos microorganismos, se suele recurrir a técnicas
especiales que van a permitir el acondicionamiento del material para dicho estudio. Los
colorantes y coloraciones se usan en estudios macro y microscópicos, por ejemplo: para
estudios de la actividad bioquímica de los microorganismos, clasificación de los
microorganismos, etc.
Para efectuar una observación del microorganismo, los métodos de coloración son
diversos y además, constituyen un ítem más que posibilita realizar una clasificación, es
decir, que hay técnicas que permiten hacer un diagnóstico informando cómo reacciona
una célula microbiana a ciertas manipulaciones físicas y químicas con los colorantes (ej:
métodos de Gram-Nicole, ácido-alcohol resistencia, etc.). El descubrimiento del
microscopio de contraste de fases y el uso del microscopio electrónico para exámenes de
microorganismos, han dejado de lado muchas de las técnicas de coloración. A pesar de
ello, los colorantes y las coloraciones se siguen usando en trabajo de diagnóstico y de
investigación por ser de un manipuleo sencillo y de fácil comprensión e interpretación. A
continuación realizaremos un estudio microbiótico aplicando algunas técnicas de
coloración.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
 Preparar frotis a partir de cultivos bacterianos en diferentes medios, y realizar una
determinada tinción para la identificación de la estructura, forma, disposición, etc.,
de las bacterias.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Clasificar las bacterias en grampositivas y gramnegativas.
 Identificar la importancia que tiene cada una de las coloraciones utilizadas en el
estudio de las bacterias.
 Identificar las formas básicas en que se puede visualizar la morfología bacteriana
en una tinción.
1. TEORÍA RELACIONADA
Las bacterias, junto con los protozoarios, algas microscópicas, hongos microscópicos
(incluyendo levaduras) y virus, constituyen los llamados microorganismos. El término
microorganismo no tiene un significado taxonómico preciso sino que agrupa a todos los
organismos de dimensiones microscópicas (< 0.1 mm) aunque presenten grandes
diferencias entre si. Así por ejemplo incluye organismos procariotas (bacterias), eucariotas
(hongos, protozoarios, algas) y virus. También difieren notablemente en el tamaño aunque
sean todos microscópicos; en una escala comparativa tenemos:
Protozoarios > levaduras > bacterias > virus
Bacterias
Aunque existen miles de especies de bacterias diferentes, los organismos individuales
presentan una de las tres formas generales siguientes:
- elipsoidal o esférica
- cilíndrica o en forma de bastón
- espiral o helicoidal.
Las bacterias esféricas o elipsoidales se denominan COCOS. Muchas bacterias con esta
forma presentan modelos de agrupación que derivan de los diversos planos de división
celular. Así tenemos:
* cocos en pares (diplococos)----------- Ej. Neisseria
* cocos en cadena ---------------------- Ej. Streptococcus
* cocos en racimo ---------------------- Ej. Staphylococcus
* cocos en tétradas -------------------- Ej. Pediococcus
* cocos en cubos ----------------------- Ej. Sarcina
* cocos sin distribución especial
Las células bacterianas cilíndricas se denominan BACILOS o BASTONES y presentan
otros modelos de agrupación. Así tenemos:
* bastones en cadena -------------------------------- Ej. Bacillus
* bastones en letras chinas o empalizadas ------------ Ej. Corynebacterium
* bastones sin distribución especial
Las bacterias helicoidales se presentan en general como células individuales,
independientes; pero las células de las distintas especies presentan notables diferencias
de longitud, número y amplitud de las espiras y rigidez de la pared.
La observación y examen de las bacterias se puede realizar de dos maneras
fundamentales:
 observando los microorganismos vivos sin teñir.
 observando las células fijadas, teñidas con colorantes.
Las bacterias vivas, en suspensión acuosa tienen propiedades ópticas similares a las del
agua y, por lo tanto, son difíciles de observar con el microscopio de campo claro debido a
la falta de contraste con el medio que las rodea.
Aunque las bacterias no difieren en sus propiedades ópticas del medio externo, si son
muy diferentes desde el punto de vista químico; esto es lo que permite distinguir las
bacterias por tinción, pues generalmente el colorante reacciona con la célula bacteriana
pero no lo hace con el medio.
La coloración de las bacterias tiene como fines:
* aumentar el contraste de las células con el medio que las rodea. Esto implica mejorar la
visualización de las bacterias y permitir la distinción de formas y tamaño.
* diferenciar grupos bacterianos por su reacción frente a determinados colorantes.
* revelar la presencia de distintas estructuras internas.
Colorantes
Son compuestos químicos que poseen un grupo cromóforo que otorga color a la molécula
y un grupo auxocromo que otorga al colorante la capacidad de disociarse
electrolíticamente y por lo tanto, formar sales. El grupo auxocromo es el que facilita la
unión del colorante a otras sustancias con carga eléctrica.
Los colorantes se clasifican como colorantes naturales y sintéticos. Los colorantes
naturales son utilizados principalmente con fines histológicos. La mayoría de las tinciones
bacterianas son realizadas con colorantes sintéticos, en su mayoría anilinas, las cuales
derivan del benzeno.
Colorantes ácidos, básicos y neutros. Los colorantes más usados son sales, las cuales
están constituidas por un ión cargado positivamente y un ión cargado negativamente. Por
ejemplo, azul de metileno es actualmente la sal cloruro azul de metileno.
a) Tinción básica es aquella en que el color está dado por el ion cargado positivamente.
b) Tinción ácida es aquella en que el color está dado por el ion cargado negativamente.
c) Tinción neutra es aquella resultante de mezclas entre soluciones acuosas de ciertos
colorantes ácidos y básicos.
Una reacción de tinción se debería a una combinación de reacciones físicas y químicas.
El pH del medio tiene gran influencia en la tinción ya que permite una mayor o menor
disociación electrolítica del grupo auxocromo, permitiendo de esta manera una mayor o
menor afinidad por los grupos químicos sobre los cuales se une.
Si se aumenta el pH del medio existe una mayor afinidad del colorante por la bacteria,
sucediendo lo contrario si el pH se hace más ácido.
La fijación de colorantes a la célula bacteriana se facilita con el uso de mordientes, con los
que forman compuestos insolubles (yodo, fenol, ácido tánico, oxalato de amonio, etc.).
Algunos de los colorantes más empleados en microbiología son: azul de metileno, violeta
de genciana, fucsina básica, safranina, verde de malaquita, etc.
Tinciones
Las tinciones pueden clasificarse en: tinciones simples, diferenciales y especiales.
a) Tinciones simples. Son aquellas en que se utiliza un solo colorante. Las bacterias se
tiñen en forma homogénea de la misma coloración.
La utilidad de esta tinción es relativa, ya que sólo es factible observar forma y agrupación
celular.
b) Tinciones diferenciales. Permiten establecer diferencias tintoriales entre grupos de
bacterias, debido a ello son las más utilizadas en la identificación de bacterias. Estas
tinciones se basan en la aplicación de dos colorantes en etapas sucesivas entre las que
se aplican mordientes y compuestos químicos decolorantes; de esta forma las bacterias
de diferente afinidad tintorial se observan teñidas de distinto color.
c) Tinciones especiales. Permiten poner de manifiesto alguna estructura especial de la
célula bacteriana, ej.: material nuclear, membrana citoplasmática, flagelos, cápsulas,
esporas, etc.
d) tinciones negativas: Los colorantes no tiñen el microorganismo, sino el entorno,
aumentando de este modo su contraste. La muestra se extiende sobre una gota del
colorante (nigrosina)
En general, el proceso seguido en todas las tinciones conlleva las siguientes etapas:
extensión, fijación, tratamiento con colorantes y observación.
2. FLUJOGRAM AS
Frotis.
A partir de un cultivo en medio líquido.
Esterilizar asa redonda
Tomar una gota del cultivo líquido
Colocarla en el portaobjetos
Extender la gota uniformemente
Secar al aire
Fijar por calor
Dejar enfriar
Teñir
A partir de un cultivo en medio sólido.
Colocar gota de solución salina en el portaobjetos
Esterilizar asa en punta
Tomar una colonia de cultivo sólido
Colocarla sobre la gota de solución salina
Mezclar y extender en el portaobjetos
Secar al aire
Fijar por calor
Enfriar
Teñir
Frotis de secreción faringea.
Visualizar el área de las amígdalas
con el bajalengua
Tomar una muestra de secreción faringea
con el escobillón
Extender uniformemente la muestra sobre
el portaobjetos
Frotar y hacer
presión
sobre la zona
Secar al aire
Fijar con calor
Colorear
Coloraciones o tinciones.
Coloración con azul de metileno.
Realizar frotis de secreción faringea
Fijar con calor
Cubrir la lamina con azul de metileno
Lavar
por 2 min.
con agua destilada
Secar al aire
Observar al microscopio
con objetivo de inmersión
Reportar la morfología y
disposición de las bacterias
Coloración de Gram.
Muestra
(medio sólido o líquido)
Secar al aire
Fijar con calor
Cubrir el portaobjeto con cristal de violeta
1 min.
Lavar
con agua destilada
Adicionar lugol
1 min.
Lavar
con agua destilada
Decolorar con alcohol acetona
Lavar
con agua destilada
Cubrir la lamina con fucsina básica
Lavar
1 min.
30 seg.
con agua destilada
Secar
Observar al microscopio
con objetivo de inmersión
Reportar la morfología y
disposición de las bacterias
Coloración de Zielh-Neelsen (ácidos alcohol resistentes)
Realizar frotis
muestra de tierra
Secar al aire
Fijar con calor
Cubrir portaobjetos con fucsina básica
Calentar
10 min.
Enfriar
Lavar
con agua destilada
Adicionar ácido metileno
Lavar
2min
con agua destilada
Secar
Observar al microscopio
con objetivo de inmersión
Reportar la morfología y
disposición de las bacterias
Coloración de Schaeffer-Fulton (esporas)
Realizar frotis
cultivo Bacillus sp. 18-24h.
Secar
Fijar con calor
Cubrir portaobjeto con verde de malequita
Calentar
30seg
Enfriar
Lavar
Adicionar safranina al 5%
Lavar
con agua destilada
1 min.
con agua destilada
Secar
Observar al microscopio
con objetivo de inmersión
Reportar lo observado
Coloración de Hiss (cápsula)
Realizar frotis
cultivo de
Klebsiella
pneumonie de
36-48h.
Secar
Cubrir portaobjetos
Lavar
con colorante de Hiss
o solución acuosa de
1% de cristal violeta
Solución acuosa al
20% de sulfato de
Cu.
Secar
Observar al microscopio
con objetivo de inmersión
Reportar lo observado
3. RESULTADOS
Coloración con azul de metileno
Las bacterias se observaron de color azul, en forma de una mezcla de bastones y esferas.
Coloración de Gram
Las bacterias para los dos frotis (cultivo en medio sólido y líquido) se observaron de color
rojo-fucsia, tenían forma de esferas en racimos.
Coloración De Zielh-Neelsen (Ácido Alcohol Resistentes)
Los bacilos ácido alcohol resistente se ven rojos o fucsias, los demás se ven azules.
Coloración De Shaeffer-Fulton (Esporas)
Solo se pudo apreciar esferas de color rojo.
Coloración de Hiss (Cápsula )
La cápsula se observa como un halo alrededor de la bacteria de color violeta pálido, la
bacteria se ve violeta intensa o morado.
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Coloración con azul de metileno
Los microorganismos adquirieron un color azul, por su forma los podemos clasificar en
staphilococos, streptococos y cocobacilos.(ver anexo 1)
Es especialmente útil para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales,
puesto que la mayor parte del material no celular no se tiñe.
Coloración de Gram
Los microorganismos adquirieron un color rojo lo que indica que son gramnegativos, estos
adquieren esta coloración debido a que contienen una pared celular estructuralmente muy
diferente a la de los microorganismos Gram positivos, que adquieren un color violeta.
En cuanto a la forma, se puede decir que eran Staphilococos.(ver anexo 2)
En todas las tinciones ordinarias se sabe que la pared celular no se tiñe, sino solo el
protoplasma fuertemente reducido por el proceso de fijación.
Nota: Al realizar la tinción de Gram, se debe tener la precaución de no utilizar cultivos
bacterianos muy viejos, ya que los resultados obtenidos pueden inducir a error; así en
cultivos bacterianos relativamente viejos de bacterias Gram(+), algunas se observan como
Gram(-), ello se debe a la acidificación paulatina del cultivo, disminuyendo la afinidad
tintorial.
Coloración De Zielh-Neelsen (Ácido Alcohol Resistentes)
La diferencia en la coloración no se debe a reacciones químicas con ciertos componentes
de la pared sino a la estructura física de la misma.
La ácido-alcohol resistencia es conferida por la presencia de grandes cantidades de esas
sustancias céreas sobre la pared celular, a la que se unen estrechamente las moléculas
del primer colorante que se hace actuar y resisten los lavados con ácidos inorgánicos
diluídos (HCl, H2SO4, HNO3) y alcohol, pues los lípidos residuales están unidos
fuertemente a la pared y no toman el segundo colorante de contraste.(ver anexo 3)
Coloración De Shaeffer-Fulton (Esporas)
Debido a la coloración roja se puede decir que presentaban células vegetativas, además
debido a su forma clasificamos a la bacteria como Staphilococos. (ver anexo 4)
Los datos importantes que se obtienen como resultado de esta coloración son:
presencia o ausencia de esporas
deformación o no del cuerpo celular
posición dentro del cuerpo celular
En base a la posición de la espora dentro de la célula se las clasifica en:
terminales (espora en el extremo del cuerpo celular)
centrales (espora en el centro del cuerpo celular)
centrales a terminales o subterminales (posición intermedia)
Coloración de Hiss (Cápsula ) (ver anexo 5)
5. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
Fundamento químico celular de la coloración de Gram
Tinción de Gram. Se considera hasta el momento como la tinción bacterias más
importante. Permite una primera clasificación de las bacterias en gram-positivas, teñidas
en azul-violeta, y gram-negativas, organismos rojos. Se encuentra en el principio de toda
investigación bacteriológica puesto que de su resultado depende la marcha ulterior para el
aislamiento e identificación del germen.
El mecanismo de la tinción de gram aun no se entiende del todo. Se supone que se basa
en una diferencia de permeabilidad entre las paredes celulares de los organismos
grampositivos y gramnegativos: el yodo forma con el cristal violeta un barniz que se une al
protoplasto. Este barniz no es soluble en agua, pero si lo es en alcohol-acetona. En la
decoloración la pared celular de las bacterias grampositivas no permite la salida del
colorante, mientras que esto es lo que sucede en las gramnegativas. Los gérmenes
gramnegativos quedan sin teñir después del lavar con alcohol y se tiñen de rojo con el
colorante de contraste, fucsina, mientras los grampositivos mantienen el color violeta.
Se ha deducido que la pared celular desempeña un papel importante para la tinción de
gram por las siguientes observaciones: si se tratan células grampositivas con lisocima
estas se transforman en protoplastos. Los protoplastos se tiñen con el violeta de
genciana, pero pierden el color al lavar con alcohol, puesto que no ha y pared celular que
lo impida. De este modo los gérmenes grampositivos cuya estructura de pared celular ha
llegado a desintegrar se hacen gramnegativos; finalmente es de importancia para el
diagnóstico saber que los clostridios grampositivos que tienden a la autolisis, es decir a la
alteración de la pared celular, se vuelven gramnegativos en los cultivos viejos.
¿Cuál es la finalidad de fijar con calor los frotis bacterianos?
Cualquier tinción precisa una fijación previa de la preparación que en la m ayoria de los
casos se hace en la llama. Con la fijación se pretende adherir fuertemente la preparación
al portaobjetos, matar al germen, conservar las estructuras visibles de la célula y mejorar
su capacidad de tinción.
Importancia del lugol en la técnica de Gram
El lugol es importante debido a que se utiliza como mordiente, para fijar el colorante sobre
el sustrato. Este refuerza la acción de un colorante.
¿Qué son los colorantes ácidos y básicos?¿Cómo actúan?
COLORANTES BÁSICOS
Son sales, que están en relación con el componente básico de su molécula. Su grupo
aminado forma una sal con un ácido, el cual es soluble en agua; tiñe estructuras ácidas
(lacas de hematoxilina, fucsina básica, azul de metileno, verde de metileno). Existen
sustancias tales como las Basofilas, que muestran afinidad por colorantes básicos
alcalinos.
COLORANTES ÁCIDOS (colorante aniónico)
Son sales que están con relación con el componente ácido de su molécula; tiñe
estructuras básicas, contenidas en el citoplasma celular (eosina, fucsina ácida), son
colorantes citoplasmáticos. Además, se dan sustancias tales como las ácido filas, las
cuales logran la afinidad por medio de este tipo de colorantes.
Dependiendo de la fracción cromógena (generadora de color) el colorante será ácido
(cuando posee carga negativa) o básico (cuando posee carga positiva)
Durante la coloración las fracciones cromógenas se ligan a componentes tisulares de
carga contraria.
¿Qué otras técnicas de coloración se conocen para observar estructuras o
tipos de microorganismos?
RODAMINA-AURAMINA
Los ácidos micólicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad para
los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que
aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso. El permanganato
de potasio, empleado como contraste, evita la fluorescencia inespecífica. Todos los
microorganismos ácido-alcohol resistentes, incluyendo los esporozoarios parásitos, se
tiñen con estos colorantes.
Un aspecto importante de la coloración rodamina-auramiria es que luego los frotis pueden
ser reteñidos con la coloración de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre la tinción
con el fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersión. De esta forma, los
resultados positivos pueden ser confirmados con las coloraciones tradicionales, que
además permiten la diferenciación morfológica.
NARANJA DE ACRIDINA
El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido nucleico ya sea en su forma nativa o
desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el color de la
fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la concentración. El naranja de
acridina ha sido empleado como colorante vital, que da una fluorescencia verde si el
microorganismo está vivo y roja si está muerto. De todos modos, como el colorante se
intercala en el ácido nucleico, el germen viable se inactivará poco tiempo después de la
tinción.
El uso de naranja de acridina para detectar la presencia de bacterias en los hemocultivos
ha sido ampliamente aceptado. De hecho, una gran cantidad de estudios ha demostrado
que la tinción de hemocultivos con naranja de acridina es tan sensible como el subcultivo
ciego para la detección inicial de hemocultivos positivos.
BLANCO DE CALCOFLÚOR
Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de calcoflúor aumentando
considerablemente su visibilidad en los tejidos y otras muestras. Según fue descrito por
Hageage y Harrington, este colorante se emplea en lugar de KOH al 10% para el examen
inicial de los materiales clínicos. También se emplea para aumentar la visualización de los
elementos morfológicos de los cultivos puros de los hongos. En algunos laboratorios ha
suplantado al azul de lactofenol en muchas aplicaciones. Los organismos fluorescen con
luz blanco-azulada o verde manzana, según la fuente luminosa que se utilice.
TINCIÓN DE ESPORAS (WIRTZ-CONKLIN)
Algunos géneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en
su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando las
condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas
extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, etc.) formándose una espora por cada forma
vegetativa. Al finalizar el proceso de esporogénesis, la célula vegetativa se lisa y libera la
espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una
nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante años. Algunas de las
bacterias productoras de endosporas son patógenas para el hombre, por lo que su
estudio y observación son de enorme interés.
TINCIÓN DE KÖSTER PARA LA DIFERENCIACIÓN DE BRUCELAS.
La preparación fijada se tiñe con safranina alcalina, se decolora con ácido sulfúrico diluido
y finalmente se tiñe en contraste con azul de metileno. Las brucelas y las rickettsias
también se presentan como pequeñas estructuras cocoides rojas, en grupos porque se
encuentran localizadas intracelularmente, ante un fondo azul claro.
Esta tinción tiene un valor extraordinario para el diagnóstico diferencial, puesto que
permite la detección de brucelas en la placenta de una vaca que ha abortado, aún
cuando exista una contaminación masiva con bacterias de la putrefacción. Es unas de las
pocas tinciones que proporciona un diagnóstico puramente microscópico. Un aborto por
brucela puede ser diagnosticado microscópicamente en tanto el investigador aplique las
precauciones necesarias, teniendo en cuenta la eliminación de Coxiella burnetti.
Otra tinción que permite un diagnostico (casi) válido en la tinción capsular de
Romanowski-Giemsa para el B. Anthracis, en la que el cuerpo del bacilo aparece azul y la
cápsula rosa. Con esta técnica el diagnóstico, en que se requiere gran rapidez, se
establece en minutos. Otras tinciones que no se utilizan de modo rutinario pero si para
precisar un diagnóstico son la empleadas par la observación de cápsulas, esporas y
flagelos.
COLORACIÓN DE HONGOS
Una de las técnicas más empleadas para observar estos microorganismos, es la de
Gueguén, por lo que con ella se pueden observar distintas estructuras presentes.
La solución colorante empleada es:
Acido láctico
Sudán III
Azul de algodón
Sol. de I2 alcohólica.
....................... 100 g
.............................. 0,1
.................. 0,1
g
...... 10 a 30 gotas
g
Algunos de los elementos del hongo aparecen así diferenciados:
grasas: color rosa o rojo debido al Sudán III (colorante liposoluble). Esto se debe a que el
colorante es más soluble en los lípidos que en el solvente que lo contiene (alcohol) y
tiende a abandonar la solución para ser incorporado en el interior de las gotas de lípidos
presentes en la preparación (proceso de difusión y solubilidad).
glicógeno: aparece de color caoba debido a la presencia del iodo.
almidón: aparece de color azul debido al iodo.
CONCLUSIÓN
Por medio del anterior laboratorio realizado y con la ayuda de la bibliografía citada
podemos concluir los siguientes aspectos:
 El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de
ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la
célula y el medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es
la utilización de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos
diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de
actividad respiratoria, etc.
 La observación y examen de las bacterias se puede realizar de dos maneras
fundamentales:
Observando los microorganismos vivos sin teñir.
Observando las células fijadas, teñidas con colorantes
 La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna
afinidad específica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con
frecuencia son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con
intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, otros
colorantes son moléculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con
los constituyentes celulares cargados positivamente. A los primeros se les
denomina básicos, mientras a os segundos como básicos.
 Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada
con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia
se denomina mordiente; un mordiente habitual es el ácido tánìco. El mordiente se
combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá
atacar el colorante.
BIBLIOGRAFÍA
FEY, Hans. Compendio de bacteriología general médica. Ed Acribia. España. 1978.
p 35-37.
Disponible en página web:
 http://coli.usal.es/web/educativo/micro2/tema02.html
 http://www.danival.org/notasmicro/tincion/_madre_tincion.html
 http://bilbo.edu.uy/~microbio/morfologia.html
 http://www.microbiologia.com.ar/bacteriologia/general.php?Mostrar=introduccio
n
 http://www.manant.unt.edu.ar/Departamentos/Ecologia/microbiologia/examen_
coloracion.htm
 http://agronomia.uchile.cl/webcursos/microbiologiagral/pagina%20microbiologia
1/word/Guia_Lab_07_(1).doc