Download Virus del Oeste del Nilo.

Susceptibilidad de especies
silvestres al Virus del Oeste del
Nilo.
MC. Sandra Cuevas Romero
INIFAP-CENID-M
2011






: Zoológico Miguel Alvarez del Toro, Tuxtla Gutiérrez, Mexico (S.
Guerrero-Sánchez);
Center for Vectorborne Diseases, University of California, Davis (G.
Worwa);
Centers for Disease Control and Prevention, Fort Collins, Colorado,
USA (N.M. Nemeth, A.C. Brault, N. Komar);
New York State Department of Health, Slingerlands, New York, USA
(L.D. Kramer);
Universidad Autónoma de Chiapas, Tuxtla Gutiérrez, Mexico (M.T.
Jesus Trujillo-Olivera);
University of Texas Medical Branch, Galveston, Texas, USA (J.G.
Estrada-Franco)
Virus del Oeste del Nilo (WNV)
Aislado en 1937 en el distrito del Nilo Occidental

Es un virus de la familia Flaviviridae, genero
flavivirus (RNAs+), que taxonómicamente
pertenece al serocomplejo de la Encefalitis
Japonesa.
Núcleo
Glicoproteínas
de envoltura
Envoltura
A RNA viral
Transmisión (vector-borne)

Es una enfermedad transmitida por vector,
que se propaga a una amplia gama de
vertebrados.
Culex
Aedes
Anopheles
Vector dominante primario
Nasci et al, 2001Komar N. West Nile viral encephalitis. Rev. Sci. Technol 200, 19; 166-76.
Ciclo de Infección
Virus del
Oeste del
Nilo
Mosquito Vector
Virus del
Oeste del
Nilo
Virus del
Oeste del Nilo
Pájaro
Huésped
Reservorio
Infección
Incidental
Infección Incidental
Las aves silvestres son consideradas los principales huéspedes del VON
Sintomatología

La manifestación más grave de la infección
es la encefalitis con una evolución fatal en
el hombre y el caballo, ocasionando
también mortalidad de ciertas especies de
aves silvestres y domésticas.
Distribución Geográfica.
30´ -80´s

En 1999 fue identificado por
primera vez en los Estados
Unidos de América en la ciudad
de New York (Nash et al, 1999).
VIRUS DEL OESTE DEL NILO
Aislamientos e identificaciones virales
ESTADO
Tabasco
MUNICIPIO
Centro
NOMBRE COMUN
ORDEN / FAMILIA
Cuervo
Corvidae / Corvus
corax
Ungulata / Equidae
Tamaulipas
Aldama
Equino
Sonora
Hermosill
o
Zanate
Tamaulipas
Altamira
Pelicano
Cormorant
Garcita Verde
Baja
California
Mexicali
Garcita Azul
Zanate
Gallareta Americana
Tabasco
Centro
Tabasco
Centla
Sonora
Etchojoa
Baja
California
Tecate
Aguascalien Aguascal
tes
ientes
Pichón
Cocodrilo ó Lagarto
de Pantano
Cocodrilo ó Lagarto
de Pantano
Zanate
Cuervo
Zanate
PRUEBAS
FECHA
DE
RESULTA
DO
AV-RL, RT-PCR16Anidada *
May-03
AV-CC, RT-PCRAnidada,
12Inmunocromatog Nov-03
rafia
AV-CC, RT-PCR
27Anidada
Nov-03
Icteridae / Quiscalus
mexicanus
Pelicanidae /
AV-CC, RT-PCR
Pelecanuserythrorhyn
28Anidada
chos
Nov-03
Phalacrocoracidae /
Phalacrocorax auritus
Ardeidae / Butorides
virescens
Ardeidae / Egretta
AV-CC, RT-PCR 05-Diccaerulea
Anidada
03
Icteridae / Quiscalus
mexicanus
Rallidae / Fulica
americana
Columbidae /
Columba livia
Crocodylia /
24-DicRT-PCR Anidada
Crocodylus moreletii
03
Crocodylia /
24-DicRT-PCR Anidada
Crocodylus moreletii
03
Icteridae / Quiscalus AV-CC, RT-PCR
27mexicanus
Anidada
Ago-04
Corvidae / Corvus
AV-CC, RT-PCR
10corax
Anidada
Sep-04
Icteridae / Quiscalus
21-MarRT-PCR Anidada
mexicanus
07
Primer Aislamiento
Mexicano
del VON 2003
Subdirección Técnica
Departamento de Estadística
y Evaluación
Rutas hipotéticas de Introducción del VON a
México. (Deardorff et al., 2006). (Dos rutas
independientes)
TM03 ≠
NY99
4 aa
46 nt
¿Porqué en México no ha tenido
el mismo impacto que en USA?
1,021 casos humanos
n= 7
4 Chihuahua
2 Sonora
1 Nuevo León
1 Veracruz? 2010
Ramos & Falcon 2004
Hipótesis
La interacción entre el virus-huéspedes
• susceptibilidad del huésped
• competentes amplificadores del virus
• el tipo de cepa viral
combinado con factores externos ( clima, hábitat, circulación
de otros flavivirus podría influir en un bajo nivel de
transmisión del VON
Objetivo

Evaluar la susceptibilidad de diferentes
especies de aves silvestres a la infección
experimental de dos variantes del VON que
circulan en el país.

Adicionalmente se realizó la infección
experimental en Murciélagos hematófagos
como modelo de animal mamífero.
Aves adultas originarias de México
Dosis 100, 000 PFU 0.1 ml SC
Tabasco TM171-03( AY660002) Tecate (DQ 080060)
Muestras de sangre diariamente 6-7días (viremia)
Corazón, riñón, hígado, bazo, piel y cerebro
Análisis de Resultados







Titulo Viral: carga viral infección de Células Vero
Serología: prueba PRNT
Viremia: Comparación del log medias titulos virales
prueba t-Student
Índice de Competencia reservorios (Komar 1999)
Ci= S x I x D
Susceptibilidad a la infección 0.0-1.0
I constante 0.1349 (proporción prom. Infecciosa)
D no. de dias de la viremia con titulos ≥104.7 PFU
Titrations of Chicken Sera
Titration and Amplification of Virus stocks - Tecate WNV and Tabasco WNV
1. Each stock was titered at dilutions of 1:10 to 1:1000000 on vero cells. No plaques
were seen.
2. Each stock was amplified on vero cells for 6 days. No CPE was seen. Samples
were harvested, and
0.1ml of each undiluted harvest was assayed on vero cells, but no plaques were
seen.
Additonally, 0.1ml of each harvest was transferred to fresh vero cells and observed
for six days.
Each sample was diluted 1:10 and cultured on vero cells.
Table below gives titers for each sample in pfu/100μl
Bird #
Day 1
Day 2
Day 3
Day 4
Day 7
Chicken 1
<10
360
10
No sample
No sample
Chicken 2
10
270
10
<10
<10
Chicken 3
10
<10
80
<10
<10
Chicken 4
<10
540
<10
<10
No sample
Chicken 5
<10
<10
<10
<10
<10
Chicken 6
<10
<10
<10
<10
<10
Chicken 7
<10
200
1140
No sample
<10
Chicken 8
<10
100
130
<10
<10
Chicken 9
<10
<10
<10
<10
<10
Chicken 10
<10
No sample
370
<10
<10
Chicken 11
<10
<10
<10
10
<10
Esplenomegalia , riñon hemorrágico, ligera
hepatomegalia, congestión hígado
Resultados
•En relación a los Títulos de Viremia
•Se determinó niveles infecciosos bajos en gallos y palomas indicativo
•de ser huéspedes incompetentes
•Se determinó que los gorriones y cuervos presentaron niveles altos
de viremia indicativo de ser huéspedes competentes (67%)
No se encontró diferencia estadísticamente significativa entre
la cepa Tecate y Tabasco en las diferentes especies infectadas.
(un Mirlo infectado con Tecate mantuvo altos niveles de viremia)
Todos los animales presentaron anticuerpos entre 14 y 28 días.
Infección experimental en Murciélagos
hematófagos
Títulos de Viremia en
Desmodus rotundus
Dia post-inoculacion (PFU/ml suero)
Individuo
1 (50%)
2
3
4
5
6
7
1
2.0
<2.0
<2.5
<2.5
<2.0
<2.5
<1.7
2
2.3
NT
<2.1
<2.1
<1.7
<2.1
<2.0
3
<1.7
<2.0
NT
NT
NT
NT
NT
4
<1.7
<1.7
<1.7
<2.5
<1.7
<2.1
2.5
5
<1.7
<2.0
<1.7
<1.7
1.7
1.7
<2.1
6
1.7
<2.0
<2.1
<1.9
<2.0
<2.5
<1.7
7
<1.7
<1.7
<1.7
<2.0
<2.1
<1.7
<1.7
No. 5 aborta al 3er día
No. 4 muere con sintomatología nerviosa al día 17
No. 1 muere al día 20 sin sintomatología nerviosa
Sint. Nerv
12
Aislamiento del VON en tejidos
Tejida (PFU/ml homogenate)
Indi
u
o
Dia de
mortal
idad
Piel
conpelo
Higado
Cerebro
Vaso
Traquea
con
mus
culo
Pulm
Intestin
o
Rinon
Medula?
Testis
Salivary
gl
an
d?
?
Cora
z
o
n
2
28
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
NT
NT
<0.7
<0.7
<0.7
NT
NT
NT
3
17
<0.7
<0.7
<0.7
NT
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
NT
<0.7
<0.7
4
20
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
NT
NT
5
28
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
NT
NT
NT
6
28
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
NT
NT
NT
7
28
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
<0.7
NT
NT
NT
Los resultados obtenidos sugieren que el murciélago hematófago,
aparentemente tiene una limitada relación en el ciclo biológico del
VON y en su papel como posible reservorio.
Conclusión
Aún existen interrogantes difíciles de
explicar en el comportamiento del Virus del
Oeste del Nilo en México.
 Es importante continuar con estudios sobre
el comportamiento del virus en especies
susceptibles para poder elucidar aspectos de
la epizootiología del VON en los diferentes
ecosistemas del país.


Gracias por su atención