1
Download PCR a tiempo real, una alternativa en el
Transcript
PCR a tiempo real, una alternativa en el diagnóstico de Dientamoeba fragilis Patricia Marquina, Inés Valledor, Laura Llobet, Lucía Gracia, Cristina Seral, Francisco Javier Castillo Presentado por: Patricia Marquina Yus Málaga, 12 mayo 2017 Dientamoeba fragilis • Protozoo que parasita principalmente el colon humano • Prevalencia muy variable Diagnóstico de referencia Examen microscópico de muestras fecales con tinción permanente Alternativa Métodos moleculares basados en PCR a tiempo real Objetivo • Evaluar dos kits comerciales basados en PCR a tiempo real • Estudio de prevalencia de Dientamoeba fragilis en Aragón Materiales y métodos 616 muestras fecales Servicio de Microbiología Hospital Clínico Lozano Blesa · Octubre-Diciembre 2016 Extracción de ácidos nucleicos VIASURE RNA-DNA Extraction Kit Estudio comparativo de dos kits comerciales Estudio de prevalencia 616 muestras analizadas 82 muestras analizadas RIDA®GENE VIASURE VIASURE Kits comerciales basados en PCR a tiempo real VIASURE (Certest Biotec) • • • Sonda de hidrólisis Gen diana: 5,8S (ribosomal) Formato estabilizado RIDA®GENE (R-Biopharm) • • • Sonda de hidrólisis Gen diana: 18S-ITS (ribosomal) Formato líquido Resultados Clinical sensitivity and specificity Tabla 1: Tabla resumen para el estudio de prevalencia Prevalencia Pacientes Total Sexo Grupos de edad Sospecha clínica Negativo 570 (92.5%) Positivo 46 (7.4%) Masculino 241 (42.3%) 23 (50%) Femenino 318 (55.8%) 23 (50%) ≤12 años 239 (42%) 34 (74.0%) 13-25 años 30 (5.3%) 3 (6.5%) >25 años 294 (51.5%) 9 (19.5%) Infección parasitaria 255 (44.7%) 29 (63%) No infección parasitaria 312 (54.7%) 17 (37%) Resultados Tabla 2: Comparativa de resultados para Dientamoeba fragilis RIDA®GENE Dientamoeba fragilis (r-Biopharm) VIASURE Dientamoeba fragilis Real Time PCR Detection Kit + - Total + 46 6* 52 - 0 30 30 Total 46 36 82 Sensibilidad Especificidad VPP VPN >99% >83% >88% >99% * Ct≈34 Estudio de sensibilidad Muestra positiva para Dientamoeba fragilis · Diluciones seriadas 1/10 Figura 1: Amplificación mediante el kit VIASURE Figura 2: Amplificación mediante el kit RIDA®GENE Conclusión • El estudio revela una prevalencia alta para Dientamoeba fragilis, indicando que su prevalencia está infravalorada. • El formato estabilizado y listo para usar de “VIASURE Dientamoeba fragilis Real Time PCR Detection Kit”, junto con su elevada sensibilidad le hace idóneo como test de rutina para el diagnóstico de Dientamoeba fragilis.
