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Ref: R-0202-01
Taq DNA polymerase
(DNA clean up) 1000U
INDICACIONES:
CONTENIDO DEL PRODUCTO:
Producto distribuido por UVAT Bio.
Uso único en investigación. No debe
emplearse con fines diagnósticos, en
alimentos, cosméticos, ni en ningún
otro medio no especificado en estas
instrucciones.
Este producto contiene los siguientes componentes:
Si desea contactar con el servicio
técnico póngase en contacto con
nosotros en el número de teléfono o en
la página web que aparecen en la parte
inferior de este documento.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO:
Taq DNA polymerase (DNA clean up)……………………..……….……… 1000U
Tampón de reacción (con MgCl2) 10x ……………………….……….…..… 2 ml
Concentración enzimática: 5U/ µl
Tampón de reacción 10x: 500mM KCl, 100mM Tris-Cl (pH 8.5 a 25oC), 1% Tritón
X-100, 15mM MgCl2.
CONTROL DE CALIDAD:
Pureza: No se ha detectado actividad
endonucleasa en presencia de DNA de
doble cadena y DNA monocatenario.
La homogeneidad del enzima es
mayor del 90% resuelto en una
electroforesis en gel SDS-PAGE.
Ensayo funcional: Cada lote de Taq
DNA polymerase ha sido ensayado en
una reacción de amplificación a partir
de 10ng de DNA genómico humano.
Inhibidores: Detergentes iónicos
como el SDS. La reacción es inhibida
por la presencia de etanol o cloroformo.
Tampón de la enzima: 20mM Tris-HCl (pH 8.0), 0.1 mM EDTA, 1mM DTT, 100
mM KCl, estabilizadores, 50% glicerol.
Fuente: La Taq DNA polymerase ha sido aislada a partir de la clonación del gen
de la DNA polimerasa de la especie Thermus aquaticus en Escherichia coli.
Definición unidad enzimática: Una unidad de Taq DNA polymerase incorpora
10nmol de desoxirribonucleótidos en 30 minutos a 74oC.
Almacenamiento: -20oC.
La Taq DNA polymerase es una enzima termoestable procedente de la bacteria
termófila Thermus aquaticus que cataliza la síntesis de DNA 5’ à 3’, tiene la
actividad exonucleasa 5’ à 3’ pero no presenta actividad exonucleasa 3’ à 5’.
Además posee actividad desoxinucleotidil transferasa para la adición de adeninas
extra en el extremo 3’ del producto de PCR, lo que permite que el producto de
PCR pueda ser clonado en el vector TA. La enzima Taq DNA polymerase
recombinante es la herramienta ideal para realizar PCR estándar. Presenta una
alta sensibilidad y alta eficiencia de amplificación. La velocidad de extensión es de
1-2 Kb/min.
● UVAT Bio C.B.
● Web: www.uvat-bio.com
● Dirección: Av. Al Vedat Nº143 - P5
● E-mail: [email protected]
46900, Torrent, Valencia (España)
● Teléfono: 603 44 25 04
Fabricado por Mebep BioScience ©
REACCIÓN ESTÁNDAR PCR:
PROGRAMA ESTÁNDAR PCR:
(VOLUMEN TOTAL 50µl)
Taq polimerasa (5U/µl)…………..........…. 0.5 µl (2.5 U)
Tampón 10X ……………………..........….. 5 µl (1X)
dNTP mix (2.5mM cada dNTP)..…........... 4 µl (0.2mM)
Paso
Tª
Tiempo
Nº ciclos
Desnaturalización
94ºC
2' - 5'
1
Desnaturalización
94º
30''
50 - 60º
30''
72º
1-2Kb/min
Fin extensión
72ºC
5-10'
Reposo
4ºC
Indefinido
Alineamiento
DNA ……………………………..........…… 500ng
Extensión
30 - 35
Cebador 1 (10µM) …………...........……. 1µl (0.2-0.4µM)
1
Cebador 2 (10µM)……………..........…… 1µl (0.2-0.4µM)
Agua desionizada …………….….........… Hasta 50 µl
DATOS DE INTERÉS:
Diseño de cebadores (primers): Los cebadores generalmente presentan un tamaño entorno 15-30 bases y están
diseñados para las regiones flanqueantes de la región de interés. En el diseño de los cebadores estos deben
contener entre 40-60% (G+C) y que en su secuencia interna no presente secuencias homólogas para evitar la
formación de estructuras secundarias. Para la reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en inglés)
los dos cebadores usados deben presentar la misma temperatura de fusión (Tm [melting temperature]), de esta
forma, estos pueden hibridar a la muestra de ADN a la misma temperatura sin afectar a la eficiencia de reacción.
La temperatura de alineamiento (annealing) de la reacción dependerá de la Tm de los cebadores usados. Existen
aplicaciones web que permiten el diseño de los cebadores en función de las secuencias diana que se quiera
amplificar.
Características del tampón y condiciones de reacción: En la reacción en cadena de la polimerasa es muy
importante la concentración de MgCl2. Nuestro producto ya esta ensayado con la concentración adecuada a la
cual debe encontrarse en la reacción. Sin embargo es muy importante la puesta a punto de las condiciones de la
reacción como son la concentración del cloruro de magnesio, la concentración final de los cebadores, de los
desoxirribonucleótidos (dNTPs) así como también cada uno de los pasos del programa de PCR (número de ciclos,
tiempo de extensión, temperatura de alineamiento [en función de la Tm de los cebadores]).
● UVAT Bio C.B.
● Web: www.uvat-bio.com
● Dirección: Av. Al Vedat Nº143 - P5
● E-mail: [email protected]
46900, Torrent, Valencia (España)
● Teléfono: 603 44 25 04
Fabricado por Mebep BioScience ©