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Actualización del Cultivo Embrionario
Dr. Joaquín Moreno
Métodos y medios de cultivo
embrionario en FIV
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Objetivo: obtención del mejor embrión viable para conseguir el nacimiento de un
niño sano en casa.
Se han desarrollado medios y sistemas de cultivo que:
- favorezcan el desarrollo embrionario
- permitan la selección más precisa del embrión con mayor
potencial de implantación.
SISTEMAS DE CULTIVO
- Corto (+2 / +3 ) / Largo (+5 )
- embriones agrupados / cultivo individualizado
- en condiciones atmosféricas / en baja concentración de O2
- Embryoscope.
MEDIOS DE CULTIVO
- medios secuenciales / medio único
- medios comerciales /medios fabricados en el laboratorio
Desarrollo Embrionario “ in vitro “
Día 0
D +1
D +5
D +2
D +3
D +4
D +6
CULTIVO CORTO +2 /+3
CCCO
Día 0
Cigoto
+1
Embrión 2 - 4 b.
Embrión 6 - 8 b.
+2
TRANSFERENCIA
+3
Cultivo Corto +2 / +3
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Es el más generalizado en los laboratorios de FIV
Es un sistema más simple y fácil de realizar en el laboratorio.
Si se dispone de pocos incubadores
Se minimizan los efectos adversos de los VOCs y otras sustancias presentes en
los medios, aceite y aire ambiental.
La mayor parte del desarrollo embrionario en el UTERO (mejor incubador)
Menos cancelaciones que en el cultivo largo
Realizando transferencias en +2/+3 ya estamos realizando selección embrionaria
(patrones pronucleares, DT, nº blastómeras, simetría, multinucleación) (Rienzi,
2002; Scott, 2007).
Efecto deletéreo del cultivo “in vitro” de los embriones.
Algunos embriones con capacidad implantatoria no llegan a blastocisto (cultivo
largo) pero, si dan lugar a embarazos si se transfieren +2/+3 (Racowsky, 2000).
No debe aconsejarse el cultivo Largo de manera sistemática.
CULTIVO LARGO
Objetivo: simplificar la obtención de Blastocistos
MICROGOTA
Día 0
Día +1
Día +2
1er. Medio Secuencial
IVF-20
Día +3
+4
Día
Día +5
+6
2º Medio Secuencial
G1.1
G2.1 / CCM
GLOBAL
GLOBAL
Día
Ventajas de la transferencia de blastocistos en
los procedimientos de FIV
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Activación completa del genoma embrionario.
Selección embriones con > potencial Implantación.
Sincronización estadio embrionario / endometrio.
Reducción nº embriones a transferir.
Reducción de la incidencia de embarazos múltiples.
Esencial en los procedimientos de DGP.
La transferencia de blastocistos en los
procedimientos de FIV
Desventajas :
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Mayor nº de pérdidas embrionarias.
Aumento de las cancelaciones de transferencias.
mayor tiempo los embriones en el laboratorio
mayor coste de material y tiempo.
CULTIVO EMBRIONARIO:
Volúmenes pequeños
microgota
Embryo-corral GPD dishwere IVF online
volúmenes grandes ( 4 pocillos )
Cultivo individual
Cultivo agrupados
CULTIVO EMBRIONARIO
Baja concentración O2 (5 %)
Concentración O2 atmosférica (20 %)
7 estudios prospectivos y randomizados
3 - Dumoulin (1995,1999), Bahceci (2005), Gonzalez – Utor (2005)
No encuentran diferencias significativas entre tasas embarazo / impl.
2 – Catt (2000), Waldenstrom (2008). Incremento tasas embarazo.
2 – Kovacic (2008,2010) Fertil-Steryl.
Solo en grupos seleccionado de pacientes. Bajas respondedoras.
Inconvenientes:
- Gran consumo de nitrógeno .
Medios Secuenciales / Medio único
Medios secuenciales:
-Imitan a la naturaleza proporcionando al embrión, en
cada momento de su desarrollo, el aporte de
nutrientes adecuado.
-Basados en la concentración de nutrientes del tracto
reproductivo femenino.
Gardner,(1996,1998,2002)
Menézo, (1998)
Desarrollaron los medios secuenciales
.
3.2 – Metabolismo Embrionario
( Gardner y cola., 1996 )
Concentración Fluidos
Trompas
Glucosa
Piruvato
Lactato
BAJA
ALTO
ALTO
AA no Esenciales ALTA
Cavidad uterina
Glucosa
Piruvato
Lactato
ALTO
BAJO
BAJO
AA no Esenciales
AA Esenciales
Glutamina
1ªs Divisiones: Pyr / Lac como fuente de E. ( poca Glucosa)
Activación Genoma Embrionario: Principalmente la Glucosa.
Medios Secuenciales
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Medio 1
Desde la fecundación hasta día +3
Baja concentración de Glucosa
AA no esenciales
EDTA que favorece la proliferación celular
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Medio 2
Desde día +3 (activación genoma embrionario) hasta +5/+6 (blastocisto)
Mayor concentración de glucosa
Menor concentración Lactato
Pyr =
AA esenciales y no esenciales
No llevan EDTA porque inhibe la formación y desarrollo de los blastocistos
5.4 -
CULTIVO SECUENCIAL
Objetivo: simplificar la obtención de Blastocistos
MICROGOTA
IVF-20
Día 0
G1.1
Día +1
G2.1
Día +2
Día +3
Día +4
Día +5
1er. Medio Secuencial
2º Medio Secuencial
Piruvato / Lactato
aa. No esenciales
Glutamina
[ Glucosa ] baja
aa. No esenciales
aa. esenciales
Glutamina
[ Glucosa ] alta
Día +6
Vitrolife serie G 5
Medio único
Medios únicos:
- Aquellos que permiten que el embrión escoja del medio
de cultivo aquellos nutrientes que necesita en cada
momento.
- Desde el día +1 hasta día +5 /+6 (blastocisto)
- Cada 2 días cambio a medio fresco.
- Macklon (2002)
- Sepúlveda (2003)
- Biggers (2007,20089
Buenas tasas de obtención de blastocisto, implantación y embarazo.
global® medium is designed as ONE medium for all embryo culture
from Day 1 to the blastocyst stage
Conclusión:
Ambos tipos de medios de cultivo son eficaces para cultivar nuestros
embriones “in vitro” y cada laboratorio debe elegir aquellos que les
proporcionen los mejores resultados.
Medios comerciales disponibles usados en los laboratorios FIV
VITROLIFE ( Serie G 5)
MEDICULT (Origio). (universal IVF,ISM1,ISM2,BlastAssist)
Life GLOBAL (Global, HTF)
COOK (Sydney IVF Claevage, fert, Blastocyst)
IRVINE (P1,ECM,SSM,Multi-blast)
SAGE (Fert media,Cleavage media, Blastocyst media,IVM)
The EmbryoScope©
Novel research tool to quantify embryo quality
-Avanzado incubador de embriones
-Nos permite observar el embrión
segundo a segundo desde la
fecundación hasta la transferencia.
-Nos permite medir el consumo de o2
de los ovocitos y embriones
(respiración).
Podremos elegir el embrión con mejor
ritmo de desarrollo y respiración.
Embrión con mejor potencial de
implantación.
Grácias por su atención