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PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
INMUNOLOGIA 2009
Dra. Virginia Bolaños de Corzo
Departamento de Microbiología
FMVZ - USAC
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Las respuestas inmunitarias contra la
mayoría de los antigenos inducen la
producción especifica de anticuerpos y
linfocitos T efectores.
Este reconocimiento entre el antigeno –
anticuerpo o linfocito sienta las bases
del diagnostico inmunológico.
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El estudio de las inmunoreacciones se
realiza mediante el empleo de técnicas
inmunológicas basadas en la detección
de y evaluación de la respuesta humoral
( anticuerpos y complemento) o de base
celular (linfocitos T y fagocitos).
SEROLOGIA
La medición de las interacciones AntigenoAnticuerpo con fines diagnósticos.
Se realizan en 2 vías:
 Utilización de anticuerpos específicos para
detectar el antigeno.(diagnostico directo)
 Utilización de antigenos específicos para
detectar anticuerpos. (diagnostico indirecto)
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La reacción entre el Ag y el Ac es de
naturaleza física y química.
La fuerzas que los mantienen unidos,
son de tipo no covalente, como la
atracción electrostática, los puentes de
hidrógeno y las fuerzas de Van der
Waals y la exclusión del agua.
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Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o
intensidad de la unión, entre un sitio de
unión del anticuerpo y un determinante
antigénico.
Avidez: es la fuerza con la que el
anticuerpo multivalente se une a un
antígeno multivalente.
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Especificidad; capacidad de los anticuerpos de
distinguir y reaccionar con una estructura
química entre muchas.
Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona
con otro antígeno, cuando este y el antígeno
que estimulo la producción del anticuerpo
especifico comparten un epitopo idéntico o
muy similar.
REACTIVOS
Muestra: suero.
Se debe obtener en forma aséptica.
No usar anticoagulante.
Dejar coagular la sangre en forma inclinada.
No refrigerar hasta que el coagulo se haya
retraído.
Transportar en refrigeración.
Almacenar el suero en congelación.
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VOLUMEN RECOMENDADO
La cantidad de sangre que se obtendrá
depende de la especie animal:
Bovinos
10 ml.
Equinos
10 ml.
Cerdos
5 ml.
Ovinos y caprinos 5 ml.
Pollos
1 ml.
Gallinas
2 ml.
Perros y gatos
2 – 3 ml.
REACTIVOS
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1.
2.
3.
ANTIGENOS.
Constituidos por el microorganismo o parásito.
Antigenos crudos: presentan el inconveniente de
dar reacciones heteroespecificas.
Antigenos puros.
Antigenos altamente purificados:
Anticuerpos monoclonales.
Gérmenes recombinantes.
BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO
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Se debe leer con detenimiento los instructivos de la
pruebas.
Los sueros deben estar en buenas condiciones no
hemolisados.
El suero debe agitarse suavemente, pues los
anticuerpos sedimentan.
Los antigenos deberán conservarse en refrigeración.
Realizar controles de calidad a los antigenos,
periódicamente.
Monitorear la temperatura del laboratorio (18 – 26
grados centigrados)
BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO
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El tiempo de incubación debe controlarse con
precisión.
No se debe mantener los reactivos a
temperatura ambiente mas de lo necesario.
Manejar los materiales que se usaron como si
fueran infecciosos.
Utilizar controles positivos y negativos.
No se debe hacer modificaciones al protocolo
de la prueba recomendado.
CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS DE
INMUNODIAGNOSTICO
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Utilizar pequeñas cantidades de reactivos.
Sensibles y especificas.
Estandarizada y validada.
Reproducible.(Ínter laboratorios)
Antigenos inactivados.
Sencilla.
Equipo y reactivos accesibles, económicos.
CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
1.
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Pruebas de unión primaria.
Miden la cantidad de inmunocomplejos (unión
antigeno-anticuerpo), utilizando
radioisótopos, colorantes fluorescentes o
enzimas.
Radioinmunoanalisis (RIA)
ELISA
Inmunofluorescencia.
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Los anticuerpos o antígenos marcados reciben
el nombre de conjugado. Los anticuerpos
conjugados suelen ser monoclonales o
antinmunoglobulinas especificas.
Se les llama sistemas competitivos. Se
establece competencia por los sitos de unión
disponibles entre el reactivo conocido, (ag, o
ac) añadido al ensayo a concentración
limitada, y el elemento a investigar.
Pruebas de union secundaria
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Los complejos se agregan y originan
fenómenos perceptibles visualmente. Son
reacciones no reversibles.
Dependen en gran medida del estado físico
del antigeno, de la temperatura, de los
electrolitos presentes en la reacción, de la
afinidad y avidez en la interacción antigenoanticuerpo, proporción entre ambos, tipo de
inmunoglobulina presente.
CATEGORIAS DE PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
2.
Pruebas de unión secundaria:
La reacción antigeno – anticuerpo va
seguida de una segunda reaccion.
Si el antigeno es soluble la reacción
que se da es de precipitación.
Si el antigeno es particulado
(suspensión) la reacción es de
aglutinación.
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Son de menor sensibilidad que las
primarias, pero mas clásicas.
PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA
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Aglutinación: en placa, en tubo.
Precipitación: Inmunodifusion en agar,
inmunoelectroforesis
Hemoaglutinación.
Inhibición de la hemoaglutinación.
Fijación de complemento.
Neutralización y Seroneutralizacion
realizadas in vitro.
CATEGORIAS DE PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
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Pruebas de unión terciaria.
Evalúan la capacidad de los anticuerpos
de neutralizar la capacidad biológica de
un antigeno ( virus, toxinas).
Identificación de toxinas.
Identificación de virus
Medir la actividad de un anticuerpo para
neutralizar a un microorganismo.
Pruebas de protección (anticuerpos)
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Se basan en la medición de las
manifestaciones biológicas que el
sistema inmune desarrolla frente a un
antígeno en el animal, incluyendo la
evaluación del efecto protector real de
los anticuerpos o su capacidad de
neutralizar la acción biológica del
antígeno.
OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA
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Identificación de problemas de salud.
Determinación de la distribución de una enfermedad.
Determinación de la incidencia y prevalencia de una
enfermedad.
Evaluación del sistema inmune del individuo o de
una población.
Medición de la inmunidad materna.
Programación de calendarios de vacunación.
Evaluación de programas o campañas de
vacunación.