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PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
INMUNOLOGIA 2009
Dra. Virginia Bolaños de Corzo
Departamento de Microbiología
FMVZ - USAC
PRUEBAS DE AGLUTINACION
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Método rápido y sencillo usado ampliamente
para identificar: virus, bacterias, grupos
sanguíneos.
Cuando se usan antigenos conocidos se detectan
anticuerpos específicos.
Los antigenos que se utilizan se encuentran en
suspensión.
La IgM es la mas eficiente aglutinando.
PRUEBAS DE AGLUTINACION
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Los anticuerpos establecen uniones cruzadas con los
antigenos, lo que se visualiza como ¨grumos¨.
Las partículas de antigeno poseen carga negativa.
(Potencial Zeta).
Los anticuerpos poseen carga positiva.
Es necesario que exista una concentración salina
para favorecer la reacción.
Fenomeno de Prozona: cuando existe un exceso de
anticuerpos, se inhibe la aglutinación.
PRUEBAS DE AGLUTINACION
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VENTAJAS
Muy utilizadas.
Sencillas.
Rápidas.
Cuali o cuantitativas
Económicas
DESVENTAJAS
 Muy sensibles.
 Reacciones heteroespecificas.
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Prueba de aglutinacion
Pruebas de Precipitación
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Se realizan en medios líquidos y en medios
semisólidos.
Debe existir equivalencia entre ambos
reactivos: antigeno y anticuerpo.
En medios líquidos se mezclan ambos
componentes, dejando reposar y se formara
un anillo en la interfase de los líquidos.
Prueba de Ascoli para Antrax.
Pruebas de Precipitación.
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Los medios semisólidos se usan para
inmunodifusion o inmunoeletroforesis.
Se basa en el hecho de que de que la mayoría
de las proteínas se difunden a través de un gel.
Al contactarse antigenos y anticuerpos
específicos se forma una banda de
precipitación en el punto en que ambos
alcanzan equivalencia.
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La prueba de Coggins (Anemia infecciosa
equina) es un ejemplo de inmunodifusion
doble.
Enfermedades que se diagnostican por esta
prueba: leucosis bovina, Influenza aviar,
lengua azul, virus de artritis encefalitis
caprina (cae).
PRUEBAS DE PRECIPITACION
VENTAJAS
 Existen varias pruebas.
 Se observan
fácilmente.
 Muy útiles.
 No se requiere equipo
costoso.
 Pueden ser cuali o
cuantitativas
DESVENTAJAS
 Poseen baja
sensibilidad.
Prueba de Inmunodifusion
INMUNOELECTROFORESIS
Son pruebas que combinan la electroforesis con
reacciones de antigeno-anticuerpo.
Inmunoelectroforesis en agar.
1.
El antigeno se coloca en el medio.
2.
Se separa por electroforesis.
3.
Se agrega suero hiperinmune.
4.
Al unirse antigeno y anticuerpo se forman líneas de
precipitación.
PRUEBAS DE HEMOAGLUTINACION
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Algunos virus tienen la propiedad de aglutinar
eritrocitos de mamíferos o aves permitiendo
identificarlos y cuantificarlos.
Grupos virales: orto y paramixovirus, alfa y flavirus,
coronavirus.
Mycoplasma gallisepticum.
La hemoaglutinación ocurre cuando la
hemoaglutinina actúa de manera reciproca con un
receptor especifico en la superficie del eritrocito.
P. DE HEMOAGLUTINACION
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La glucoproteina sirve como el sitio de
recepción para la hemoaglutinina y como
sustrato para la neuraminidasa
viral.
Las HA del virus se unen a los G.R. formando
agrupaciones que se visualizan como
aglutinación.
Prueba de HA
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Puede ser cuali o cuantitativa.
La ultima dilución que presenta aglutinación
se toma como el titulo, el cual se expresa en
unidades aglutinantes = 1 DHA
Es importante considerar: concentración de
sales, Ph, temperatura.
PRUEBA DE INHIBICION DE LA
HEMAGLUTINACION HI
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1.
2.
Los anticuerpos contra los virus
hemoaglutinantes inhiben la hemaglutinacion
al bloquear los lugares de unión.
Esta prueba se usa para:
Identificar el virus.
Para medir concentraciones de Ab.
PRUEBA DE HI
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1.
2.
3.
4.
Titulo: mas alta dilución que Inhibe la
Hemaglutinacion por el No. de DHA
Para la interpretación considerar:
Método y vía de vacunación.
Tipo de vacuna.
Edad y fecha de vacunación.
Enfermedades inmunosupresoras.
Prueba de HI
Anticuerpos fluorescentes
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Estas técnicas utilizan normalmente cultivos
celulares (primarios o de líneas estables) infectados
con el virus o la bacteria sobre la que se desea
comprobar si hay o no anticuerpos en el suero
problema. Tras la incubación con el suero
problema;). La unión se visualiza tras la adición de
un conjugado anti-inmunoglobulina marcado con
isocianato o con peroxidasa y la posterior
observación al microscopio de fluorescencia o
convencional respectivamente.
Reacción de fijación de complemento
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Esta reacción sigue siendo el método de
elección para el diagnostico indirecto de
enfermedades infecciosas importantes en
veterinaria: brucelosis, paratuberculosis.
Posee alta especificidad y sensibilidad.
La prueba se basa en que los complejos
antigeno-anticuerpo, fijan el complemento, se
impide que este se una a un sistema indicador
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Que consiste en glóbulos rojos de ovino, recubiertos
de anticuerpos antihematies.
El consumo in vitro del complemento en la primera
etapa por la unión-antigeno anticuerpo, evitara que
los glóbulos rojos sean lisados (prueba positiva), sin
embargo si se observa hemólisis revelará la
*fijación* del complemento a este segundo
inmunocomplejo, lo que demuestra la ausencia de
anticuerpos específicos al antigeno de la primera
fase.
Seroneutralizacion
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Este método está considerado de referencia
para cualquier estudio serológico pues es el
que más se correlaciona entre la respuesta
"in vitro" y la respuesta "in vivo".
En esta prueba se puede valorar la capacidad
que tienen los anticuerpos presentes en un
suero problema para neutralizar la actividad
biológica de un antígeno.
Prueba de Neutralización
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1.
2.
Son altamente sensibles y especificas.
Se pueden realizar en 2 vías:
La concentración viral se mantiene constante
y el suero diluido.
El suero se mantiene constante y el antigeno
diluido.
Se podrá determinar la capacidad
neutralizante del suero o del antigeno.
Seroneutralizacion
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La valoración biológica de la efectividad del
proceso se puede realizar sobre cultivos
celulares o animales de laboratorio.
Pruebas de Protección.
Son similares a las de neutralización solo que
se realizan por completo in vivo.
La capacidad de proteccion que posee un
suero puede ser valorada mediante su
inoculacion en diluciones seriadas en un
grupo de animales de laboratorio, para luego
desafiarlo con el antigeno.
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El valor de protección de los sueros se
expresa como Dosis Protectiva 50%
(DP50%).
El calculo se realiza mediante pruebas
estadísticas como Reed y Muench.