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Ingeniería Genética
Clonación de genes
CONCEPTOS
BIOTECNOLOGÍA
Aplicación de procedimientos genéticos para
crear nuevos organismos capaces de sintetizar
productos específicos de alto valor comercial
INGENIERÍA GENÉTICA
Técnicas de manipulación del material
genético que permiten transferir genes de
unas células a otras. Se pueden introducir genes
en el genoma de una célula que carece de ellos.
Objetivos:
•Obtención de proteínas que tienen valor por sí
mismas
•Producir efectos positivos en células receptoras
CLONACIÓN DE GENES
CONCEPTO
Método empleado en Ingeniería Genética
consistente en obtener múltiples copias de un
determinado gen utilizando el poder replicativo
de los organismos vivos
ETAPAS DE LA CLONACIÓN DE GENES
1. Obtención del gen que se desea clonar
2. Recombinación con el vector de clonación
para obtener ADN recombinante
3. Incorporación del ADN recombinante en la
célula hospedadora
4. Detección del gen clonado
5. Multiplicación de la célula hospedadora y del
gen deseado
ETAPA 1: OBTENCIÓN DEL GEN DESEADO
A) POR ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
ETAPA 1: OBTENCIÓN DEL GEN DESEADO
B) POR RETROTRANSCRIPTASAS
Empleado cuando se desea clonar y expresar un
gen eucariótico en células procariotas.
Gen ADN (con intrones)
Transcripción
preARNm (con intrones)
Procesado
ARNm (sin intrones)
Retrotranscriptasa
Transcripción
inversa
Gen ADN (sin intrones)
ETAPA 2: FORMACIÓN DEL ADN RECOMBINANTE
Gen deseado + Vector de clonación (virus o plásmidos)=
ADN recombinante
ETAPA 2: FORMACIÓN DEL ADN RECOMBINANTE
Tanto el vector de clonación como el gen que se desea clonar
deben ser cortados por el mismo enzima de restricción
ETAPA 3: INCORPORACIÓN DEL ADN RECOMBINANTE
A LA CÉLULA HOSPEDADORA
Técnicas:
•Transformación, conjugación o transducción cuando la célula
hospedadora es una bacteria.
•Microinyección, electroporación, microbalas de metal, …
cuando la célula hospedadora es eucariota.
ETAPA 4: DETECCIÓN DEL GEN CLONADO EN LA
CÉLULA HOSPEDADORA
Técnicas:
•Detección de la proteína producida por el gen clonado.
•Utilización de marcadores (genes que ayudan a la
identificación de las células que los contienen) en el vector de
clonación.
ETAPA 5: MULTIPLICACIÓN DE LA CÉLULA
HOSPEDADORA Y DEL GEN DESEADO
Al multiplicarse la célula hospedadora también se replica su
ADN y, por tanto, el gen que se desea clonar, obteniendo
muchas copias del mismo.
CLONACIÓN DE UN FRAGMENTO DE ADN MEDIANTE PLÁSMIDOS
OTRAS TÉCNICAS DE CLONACIÓN:
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
• “In vitro”
• Mayor velocidad
• Pequeños fragmentos de ADN
OTRAS TÉCNICAS DE CLONACIÓN:
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
OTRAS TÉCNICAS DE CLONACIÓN:
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)