Download Sin título de diapositiva

TP N° 4-5
COLORACIONES I y II
ANAEROBIOSIS
RECUENTO
Microbiología
Tecnicatura Universitaria en Esterilización
2016
Formas de las bacterias
Diferentes agrupaciones de cocos
diplococos
estreptococos
sarcinas
estafilococos
Diferentes morfologías en bacilos
Espirilo
Espiroqueta
OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS
Examen en fresco (vivos sin teñir)
Técnicas de coloración
COLORANTES
-Son compuestos orgánicos y cada tipo de colorante
suele tener afinidad por determinadas estructuras
celulares.
-Colorantes catiónicos:
- Son sales que en medio acuoso:
Cl AM
---
Cl- + AM+ (azul de metileno)
se combinan con compuestos celulares con carga
negativa, ej.: ácidos nucleicos y polisacáridos ácidos.
COLORACIÓN VITAL
o
PREPARADO EN FRESCO
Permite visualizar si los
microorganismos son:
-móviles
-inmóviles
En qué consiste?
TÉCNICAS DE COLORACIÓN
Cultivos bacterianos: 18 - 24 h
Preparación del frotis
1. Secado
2. Fijación
-Métodos físicos: calor
-Métodos químicos
3. Enfriado
4. Coloración (simple o compuesta)
5. Lavado
6. Secado
7.
Observar en microscopio 100x
con aceite de inmersión
Fijación: preserva las estructuras
y las hace más visibles
COLORACIÓN de GRAM
Divide a las bacterias en 2 grandes grupos:
-Gram positivas (violeta)
-Gram negativas (rojizas)
Coloración de Gram
Bacterias y esporas según la coloración de Gram
TINCION DE ZIEHL NEELSEN
Para bacterias ácido alcohol resistentes (BAAR)
Ej.: Mycobacterium tuberculosis
Estructura de la
pared
COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN (para BAAR)
Frotis.
Fucsina Ziehl concentrada,
(calentar con hisopo encendido hasta emisión de vapores durante 10
min)
Alcohol-ácido
Lavar
Azul de metileno
Lavar-Secar
Observar 100x
ANAEROBIOSIS
1. Qué es?
2. Sistemas de incubación para anaerobios
3.Métodos para generar anaerobiosis
(leer por Guía de TP)
RECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLES
1°. Diluir la muestra
2°. Sembrar
-Por extensión en superficie:
1°) la muestra
2°) el medio de cultivo
-Por placa vertida:
1°) la muestra
2°) el medio de cultivo
Recuento de microorganismos viables
Cálculo:
(elegir la dilución
donde hay
30-300 colonias)
10-1: 800 / 600
10-2: 70 / 90 
10-3: 6 / 4
Promedio: 80 col (A)
A x inv. del volumen sembrado x inv. de la dilución = B ufc/ml