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FERTILIZACION IN VITRO EN EL
SIGLO XXI ¿ EN DONDE NOS
ENCONTRAMOS ?
Dr. José Arturo Mora Rodriguez
La Vida inicia aqui …
Historia Medicina Reproductiva
1960
- Estimulación ovarica con clomifeno y gonadotropinas
1970
- Secresión , sintesis , mecanismo de acción GnRH y
gonadotropinas
- Fertilizacion in Vitro
1980
- Agonista de GnRH y gonadotropinas
- Criopreservación
1990
- Gonadotropinas recombinates
- Diagnostico Genetico Preimplantacional
- Inyección intracitoplasmatica del espermatozoide (ICSI)
- Antagonista de GnRH
2000
- Maduracion de ovocitos in vitro
- Celulas Madres Embrionarias
- Transferencia de un solo embrión
- Vitrificacion
Avances en Medicina
Reproductiva
Estimulacion Ovarica con antagonistas
GnRH
Transferencia de un solo embrión
Transferencia Blastocisto
Maduración ovocitos in-vitro
Criopreservacion y vitrificación
Diagnostico genetico preimplantacional
Diagnostico
Genetico
Preimplantación
Diagnostico Genetico Preimplantación
(DGP)
DGP es un procedimiento
usado junto con la
Fertilización In Vitro
(FIV)
en la que se somete a
pruebas un embrión antes
de ser transferido a la
mujer.
DGP fue descrito en
1990.
DGP combina los ultimos
avances
en
genetica
molecular y la tecnologia
de
la
reproducción
asistida.
H. Handyside et al., "Pregnancy from biopsied human preimplantation embryos sexed by Y-specific DNA amplification," Nature, 244:768-70, 1990.
¿ Como se realiza el diagnostico
genetico preimplantacional?
Muy complejo
Tecnicamente dificil
M. Bielanska et al., "Fluorescence in situ hybridization of sex chromosomes in spermatozoa and spare implantation embryos of a Klinefelter 46,XY/47,XXY male,
" Human Reproduction, 15:440-4, February 2000.
¿ Como se realiza el DPG ?
Estimulación Ovarica
FIV
Biopsia blastomera dia 3
Transferencia
embrión sin
alteración
Resultado
Bebe cromosomicamente
normal
Analisis
Genetico
DPG ofrece 2 tipos de analisis
Reaccion Cadena
Polimerasa (PCR)
Hibridación
Fluorescente In
Situ (FISH).
M. Bielanska et al., "Fluorescence in situ hybridization of sex chromosomes in spermatozoa and spare implantation embryos of a Klinefelter 46,XY/47,XXY male,
" Human Reproduction, 15:440-4, February 2000.
Beneficios DGP
Incrementa tasa
Implantación.
Reduce Perdidas
Gestacionales.
Reducción en la
posibilidad de tener un
niño con aneuploidia.
M. Bielanska et al., "Fluorescence in situ hybridization of sex chromosomes in spermatozoa and spare implantation embryos of a Klinefelter 46,XY/47,XXY male,
" Human Reproduction, 15:440-4, February 2000.
Alternativas DPG
Concebir naturalmente y
control prenatal durante
embarazo.
Adopción.
M. Bielanska et al., "Fluorescence in situ hybridization of sex chromosomes in spermatozoa and spare implantation embryos of a Klinefelter 46,XY/47,XXY male,
" Human Reproduction, 15:440-4, February 2000.
Futuro DGP
Mejorar los metodos
para obtener un
diagnostico preciso.
DPG es una promesa
para el futuro , las
tecnicas y prubas
geneticas si se
perfeccionan.
DPG se convertira en
una rutina en los
proximos años.
Conclusiones
DPG es un procedimiento
efectivo para prevenir
nacimientos de niños
afectados.
DPG en una aneuploidia es
eficaz y da como resultado una
alta tasa de tener bebes en
casa cuando se aplique en
determinadas categorias de
pacientes .
MADURACIÓN DE
OVOCITOS IN VITRO
Maduración in vitro
„Ovocitos pueden finalizar su
maduración meiotica in vitro
24 – 48 horas“
Edwards R. Early Stages of fertilization in vitro of Human oocytes matured in
vitro . Nature. Vol.221 February 15,1969
Maduracion de ovocitos
Tecnica que permite evolución de ovocitos
Metafase I (MI) y vesicula germinal (VG) al
estadio de metafase II (MII) en medios de
cultivos especificos
Kwang-Yul Cha . Maturation in vitro of immature human oocytes for clinical use . Human Reproduction Update 1998, Vol. 4, No. 2 pp. 103–120
Desarrollo MIV
1983 Veeck primer nacimiento después MIV.
2000 Cha Nacimiento de 20 niños sanos despues MIV
2003 Mikkelsen Nacimiento de 33 niños sanos después
MIV
Hoy
>300 niños despues MIV
Kwang-Yul Cha . Maturation in vitro of immature human oocytes for clinical use . Human Reproduction Update 1998, Vol. 4, No. 2 pp. 103–120
Base MIV
Recuperación de ovocitos de folículos antrales antes
selección y atresia. . .
Dia 3
Dia 8 - 12
d>10mm
Kwang-Yul Cha . Maturation in vitro of immature human oocytes for clinical
use . Human Reproduction Update 1998, Vol. 4, No. 2 pp. 103–120
MADURACIÓN IN VITRO
La recuperación de ovocitos inmaduros y su maduración
“in vitro” (MIV) constituye un tratamiento potencialmente
útil para ciertos tipos de pacientes con problemas de
esterilidad
PRINCIPALES DIFERENCIAS
FIV
MIV
Tratamiento estimulacion Si
No/ Minimo
Recuperacion de
ovocitos
Maduros
Inmaduros
SHO
7-15%
No
No. Embriones
Evolutivos
7
3
Tasa embarazo
45%
20-25%
Indicaciones MIV
SHO
Criopreservacion de ovocitos ( Oncologia )
Baja respondedora
Falla implantación
Ventajas MIV
Evitar efectos secundarios , incluyendo
SHO
Tratamiento Simple
Disminuye costos $$
IMSI : Analisis Morfologia
Microscopia electronica :
- 20 000-180000X
- costo!!!!
• IMSI:
- 6600 à 10 000X
- Diagnostico
y tratamiento!!!
IMSI
Analisis de la cabeza
espermatica (Bartoov, 2002)

Cromatina:
Normal 0-1 vacuola
Anormal: si una o mas vacuolas
ocupan mas del 4% del area
IMSI
Microscopio invertido con
condensador Normaski
Micromanipulador
automatizado
Objectivo 100X con aceite
inmersion
Camara
IMSI
Inyección de espermatozoides
con apariencia normal y
grandes vacuolas afectaria el
ciclo de FIV ?
Impacto de las vacuolas en el
desarrollo embrionario?
IMSI
Intra-cytoplasmic of morphologically
selected sperm injection
1
1
2
X 300
2
X 6600
IMSI: cromatina
Sin vacuola
Una vacuola
IMSI
Espermatozoides con vacuolas de diferente tamaño
IMSI: cromatina anormal
X 300
X 6600
MSOME E IMSI
• MSOME
Motile Sperm Organelle Morphology Evaluation
• IMSI
Intracitoplasmatic Morphologically Selected Sperm
Injection
Morfologia
400 aumentos
Morfologia
6000 aumentos
Bartoov Benjamin . Intracitoplasmatic Morphologically Selected Sperm Injection . Human Reproduction Vol.20, No.1 pp. 185–190, 2005
Indicaciones
Factor masculino
severo
Pacientes con
fragmentacion DNA
Pacientes con falla en
implantación
Fallos previos a FIV ,
ICSI u aborto
Bartoov Benjamin . Intracitoplasmatic Morphologically Selected Sperm Injection . Human Reproduction Vol.20, No.1 pp. 185–190, 2005
Resultados IMSI
Incrementa la tasa de embarazo e
implantación
Reduce la tasa de aborto
Incrementa la probabilidad de obtener un
producto sano
Pacientes con falla implantación
Bartoov Benjamin . Intracitoplasmatic Morphologically Selected Sperm Injection . Human Reproduction Vol.20, No.1 pp. 185–190, 2005
BIOLOGÍA CELULAR
REPRODUCTIVA
Mientras un brazo de esta ciencia se ha
dedicado a mejorar las condiciones generales
en que se dan estos procedimientos (assisted
hatching, cocultivo, ICSI, etc.)
Otros se ha adentrado en la investigación del
material que da origen al ser humano (células
germinales)
Células madre embrionarias
Se obtienen de embriones que han sido
donados o aquellos que dejan de crecer o
degeneran durante los procedimientos de
Reproducción Asistida.
Extracción de blastómeras de embriones
humanos
Derivación de células madre a partir de
blastómeras
Ovocito
fertilizado
Embrión de
8-10 cel.
Blastocisto
Blastómeras en
cultivo
Cel. Madre
embrionarias
pluripotenciales
Importancia de las células madre
embrionarias.
Son de gran interés médico y científico por su
habilidad para dar lugar a cualquier tipo de
célula del cuerpo humano.
Ayudan al estudio de las primeras etapas del
desarrollo embrionario, que no pueden ser
estudiadas directamente en humanos o en el
útero.
Para probar el uso de nuevos fármacos y
protocolos de tratamientos.
Al existir controversia con el uso
de células madre embrionarias,
debido a la “destrucción” de
embriones…….
Alternativas para obtener células madre
embrionarias sin destruir embriones
Transferencia Nuclear
Clonación Terapéutica
Espermatozoides y ovocitos a
partir de células madre
 Las células madre pueden tener un papel prometedor
en el campo de la medicina reproductiva. Diversos
trabajos han demostrado que son una fuente viable
para obtener ovocitos y espermatozoides tanto en
modelos animales como en humanos.
Células madre: Un paso más en la
reproducción asistida.
Se estima que el 50% de los pacientes en
técnicas de reproducción asistida necesitan algún
tipo de donación de gametos.
En roedores, se han podido obtener ovocitos y
espermatozoides a través de células madre
embrionarias, dando lugar a descendencia.
 Estos hallazgos pueden tener importantes
implicaciones en el campo de la medicina
reproductiva, ya que se podría evitar la
donación.
Reproducción asistida vs clonación
terapéutica
Reproducción asistida
El objetivo es producir
un embrión que será
implantado en la
madre, con la finalidad
de dar a luz un nuevo
ser.
Clonación terapéutica
El objetivo es producir
un
embrión
para
generar células madre
embrionarias.
Dichas células pueden
ser
utilizadas
en
diferentes terapias, sin
temor de que puedan
ser rechazadas por el
receptor
Clonación Terapéutica
Tomado de: The science of life cloning by Davide Prentice. http://www.leaderu.com/science/stem-cell-cloning-slideshow.pdf [accesado
14/08/2010]
Exactamente en donde esta la clínica
donde hizo su tratamiento?