Download OPERON LAC

OPERON LAC
OPERON LAC
“Operón”: Se define como una unidad genética funcional formada
por un grupo o complejo de genes capaces de ejercer una
regulación de su propia expresión por medio de los sustratos con
los que interaccionan las proteínas codificadas por sus genes.
Los genes involucrados en el uso de la Lactosa como fuente de
carbono, se encuentran agrupados y codifican para enzimas que
participan en la misma vía metabólica.
OPERON LAC
COMPOSICIÓN.
a) Genes estructurales (en tándem).
• gen lac Z codifica para la expresión de la β-galactosidasa
• el gen lac Y que codifica para la permeasa del galactósido.
• el gen lac A, codifica para la acetiltransferasa de tiogalactósido.
Se transcriben desde un promotor común en un mRNA policistrónico,
el cual es traducido para dar lugar a las tres enzimas.
COMPOSICIÓN
b)Promotor
Sitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA
antes del inicio de la transcripción.
COMPOSICIÓN.
c) Operador
• Por lo general se localiza adyacente o traslapado
con el promotor , sirve como el sitio de unión de
una proteína, conocida como represor (ejemplo
de proteína reguladora de genes).
• La proteína reguladora de genes (represor)
reconoce una secuencia especifica dentro del
DNA y se une a esta con alta afinidad.
COMPOSICIÓN
d) Gen Regulador.
• La expresión de los genes estructurales también esta
controlada por un gen regulador específico.
• El gen regulador puede estar cerca o lejos de los
genes que están siendo regulados. El gen regulador
codifica para una proteína específica, un producto
denominado REPRESOR.
En este tipo de operador inducible como lac, la proteína
represora sólo puede unirse al DNA en ausencia de lactosa,
que funciona como un INDUCTOR.
CONTROL POSITIVO POR cAMP.
La concentración de cAMP en las células se relaciona con la presencia de
glucosa en el medio; a mayor concentración de glucosa, menor concentración de
cAMP.
El cAMP actúa en las células procariotas al unirse a una proteína, en este caso
la proteína receptora de cAMP (CAP) . Aunque el CAP es incapaz de unirse al
DNA, el complejo cAMP-CAP reconoce y se une a un sitio especifico de la región
de control de lac, aumentando la afinidad de la región promotora por la RNA
polimerasa, lo que estimula la transcripción del Operón.
La presencia del complejo cAMP-CAP es necesaria para la transcripción del
Operón, aun cuando la lactosa esta presente y el represor es inactivo.
1. β-Galactosidasa Lac Z
2. Represor transcripcional del operón Lac, Lac I
3. Lactosa permeasa Lac Y
4. Activador transcripcional del operón Mph
9 . Galactosidasa -O-Acetiltransferasa Lac A
http://www.youtube.com/watch?v=Y3dyxgSdKs4&feature=related
E. coli en medio mínimo
Medio mínimo
A
15 min Glu 2%
B
Lac 2 %
C
Glu + Lac
2%
7.5 min
D
Glu 2 %
½ tiempo
+ Lac 2 %
E
Glu + Lac
2%
Centrifugar a 10,000 rpm, decantar sndnt
Resuspender bacterias en 250 µL de amortiguador Z
Añadir 25 µL de CHCl3 + 12.5 µL SDS 0.1 %
Añadir 50 µL de ONPG, Incubar 2 min. TA
Añadir 125 µL Na2CO3 1 M
Observar color