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“Antigenic drift” como
mecanismo de evasión
tumoral hacia los
Linfocitos T citolíticos
Emilio Flores Pardo
Introducción:
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Las mutaciones en epitopos de Ag virales permiten a los
virus escapar del reconocimiento de Ac y linfocitos T.
En las células tumorales no queda muy claro como
consiguen escapar al reconocimiento por parte del sistema
inmune.
Se han descrito muchos mecanismos, en virus y tumores,
capaces de ayudar a la evasión de las células T citolíticas:
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Ingnorancia del sistema inmune.
Inducción de anergia clonal de células T especícicas frente a un
tumor.
Regulación negativa en la presentación de Ag.
Pérdida de la expresión de tumores Antigénicos.
No queda claro como mutaciones en epitopos antigénicos en
células tumares contribuyen a la evasión del sistema inmune.
Introducción (II)
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El estudio de ratones en los que se modifica
genéticamente células T para que expresen un
solo epitopo antigénico, ayuda a establecer el
mecanismo de reconocimiento de esa célula T.
Seleccionando una línea transgénica de ratón,
que exprese un TCR específico frente a un
determinado tumor, se puede estudiar el
mecanismo de resistencia que presenta frente a
un determinado quimioterápico.
Estas mutaciones podrían ser moduladas:
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Péptido de unión al MHC.
Complejo MCH : complejo peptídico del TCR
En el Método se describe:
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Animales de experimentación: Ratones transgénicos que
expresaban un TCR especícico para el tumor antigénico: H2:P1A35-43.
Producción de cadenas alfa de TCR en ratones transgénicos: Clon
de CTL reactivo a P1A.
Líneas celulares:
Transferencia de células T transgénicas: Pools de bazo y nódulos
linfoides de los ratones transgénicos incubados con un Ac y
separados con otro anti-Ac.
Caracterización molecular del Ag P1A de las líneas celulares
nativas y linfocitos T citolítcos resistentes a los tumores. Utiliza RTPCR.
Sintesis de péptidos tanto los nativos como los mutantes.
Citometria de Flujo.
Proliferación de ensayos.
Citotoxicidad de ensayos.
Resultados:
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La terapia en monoclonales de células T
transgénicas, provoca distintas resistencias
tumorales.
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Terapia con P1CTLs(antitumoral) muestra una reducción
del 60 % del tumor durante la primera semana, pero en la
segunda semana el tumor sigue creciendo resistiendo.
(fig.a)
Los CTL son activos frente a la línea celular original, pero
no ante otras 2 generadas a partir de la nativa (fig b).
A pesar de que expresen ambas lineas tumorales el
mismo AgP1. (fig c)
Y que superficie niveles similares de H-2L a la línea
tumoral nativa. (fig d)
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Estos resultados
demuestran que terapia
con CTL activos frente a
P1 seleccionan
mutantes resistentes al
tratamiento, aunque no
pierden la expresión de
moléculas de superficie
del MCH o la expresión
P1.
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Alteraciones moleculares de genes de P1A en
genes tumorales se elevan con la terapia
monoclonal.
Se secuenciaron 5 clones (fig a) de P1A de CTL
resistentes al tumor y se compararon con la forma
nativa. Se encontraron mutaciones y se
intentaron identificar:
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Se identificaron 2 enzimas de restricción capaces de
reconocer la mutación. (fig b)
Se valoró la expresión del gen P1A en los clones
tumorales po PCR, RT-PCR y RT. (fig c)
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Bases inmunológicas de la perdida de
respuesta en la terapia monoclonal.
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Consecunecias de estas mutaciones en las nativas y
mutantes:
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Las mutantes inducen menos proliferación. Fig b
Son más resistentes a la citolisis. Fig c
Los peptidos mutantes son Antagonistas para P1A. Fig d
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Figura a: representa
los distintos tipos de
péptidos, P1A nativo,
○ control
(citomegalovirus) y el
resto de peptidos
mutantes.
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Susceptibilidad
específica a la la lisis
por Linfocitos T
citotóxicos de la línea
nativa y los distintos
mutantes.
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La disminución del reconocimiento de
peptidos Ag puede ser debida dos causas:
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La unión del MHC
Complejo MHC – péptido:
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P1A(6R) es algo
menos potente que el
péptido nativo en la
estabilización de H-2L.
Mutaciones en P7 y
P8 incrementaron la
unión a H-2L
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Efectos de la alteración de los péptidos sobre la
unión de P1A específico de células T al H-2L:
Complejo péptidico. (Mediación de los efectos
de las mutaciones sobre el reconociminento de
células T)
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Caracterización de los ratones transgénicos que expresan
un TCR específico para P1A. Fig a
Representación gráfica del complejo MHC-Péptido de
células T. Fig b
Comparación cuantitativa de la avidez del complejo nativo
y mutante H-2:P1A. Fig c
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Células T transgénicas policlonales que
expresan TCR con cadena alfa reactivo
frente a P1A, selecciona clones con
variantes antigénicos in vivo.
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La expresión de P1CTL TCR de cadena alfa se
produjo en más del 90% de células T. fig a
Evolución del tamaño del tumor en función del
tipo de tratamiento (TCR-alfaTG)
DISCURSION:
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Antigenic drift podría ser el mejor mecanismo de
evasión del sistema inmune en virus, no se
conoce muy bien su contribución en tumores,
pero no ha podido ser bien analizada hasta ahora
por:
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Rápida replicación e inestabibildad del genoma.
Diferentes respuestas del sistema inmune a virus y
tumores
Es muy dificil carcaterizar todos los antígenos tumorales,
hay una perdida de claridad en los espectros de tumores
que hace muy difícil analizar los distíntos tipos de
mutaciones
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La línea tumoral no presentaba alta frecuencia
de mutación de los epitopos antigénicos P1A:
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El análisis de 37 clones por mapeo y secuenciaciación no
mostró mutaciones en los epitopos antigénicos.
Se intento repetidamente la selección de mutantes P1A
activos. Las mutaciones en el P1A epitopo no se
presentan con una alta frecuencia (inferior a 1/5*107)
Las células aisladas de RAG2-/- de ratón, que no
recibieron terapia no presentaron mutaciones.
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El trabajo demuestra que además de la
pérdida antigénica y de MHC, la
antigenicidad de los tumores puede estar
alterada por antigenic drift.
Muchos virus y tumores pueden evadir su
destrucción por las mutaciones de sus
epitopos.
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Algunas propiedades de P1A:
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Hay una correlación entre la unión del complejo H2L:péptido de la TCR y la propiedad de inducir respuestas
de células T .
La intensidad de la unión de MHC: unión peptídica no
siempre se correlaciona con la función biológica.
La mejor caracterización de los espectros
antigénicos permitirá el estudio de el
mecanismo de antigenic drift.
Los resultados
demuestran que la
mutación antigénica de
los tumores es un
mecanismo de evasión
de la terapia con
Linfocitos T citotóxicos
in vivo