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Bendita tú eres entre todas las enzimas…. ATP-SINTASA ESTRUCTURA DE LA ATP-SINTASA Matriz mitocondrial Membrana mitocondrial interna …danos hoy nuestro ATP de cada día ¿QUÉ QUISIMOS HACER? Con nuestros conocimientos de la ATP-sintasa (y nuestros desconocimientos) quisimos modelar el funcionamiento de esta enzima a partir de lo aprendido acerca de ratchets, específicamente el de la quinesina de una cabeza. • Potencial dado por las cargas negativas del anillo • Entrada de protones que apaga el potencial • Asimetría del potencial dada por distintos sitios de anclaje a la membrana NUESTRO RATCHET OFICIAL (POTENCIAL ASIMÉTRICO, T=7) 1000 800 400 200 0 -200 -25 -20 -15 -10 -5 0 Posición 5 10 15 20 25 700 600 500 Nº de enzimas Potencial 600 400 300 E= 0,338 200 100 0 -5 -4 -3 -2 -1 0 Posición 1 2 3 4 5 DISTINTAS CORRIDAS DE LO MISMO… 700 700 600 600 500 Nº de enzimas Nº de enzimas 500 400 300 300 200 200 100 100 0 -5 400 -4 -3 -2 -1 0 Posición 1 2 3 4 5 0 -5 -4 -3 -2 -1 0 Posición 1 2 3 0 Posición 1 2 4 5 E= 0.346 E= 0.3313 700 700 600 600 500 Nº de enzimas Nº de enzimas 500 400 300 400 300 200 200 100 100 0 -5 0 -5 -4 -3 -2 -1 0 Posición 1 2 3 4 5 -4 -3 -2 -1 E =0.339 E= 0.291 3 4 5 MODIFICANDO LOS TIEMPOS DE DIFUSIÓN… T=8 800 800 700 700 600 600 500 500 Nº de enzimas Nº de enzimas T=6 400 300 400 300 200 200 100 100 0 -5 -4 -3 -2 -1 0 Posición E = 0.144 1 2 3 4 5 0 -5 -4 -3 -2 -1 0 Posición 1 E= 0.167 2 3 4 5 MODIFICANDO LA ASIMETRÍA DEL POTENCIAL… Potencial simétrico 800 700 700 600 600 500 500 Nº de enzimas 800 400 300 400 300 200 200 100 100 0 -5 -4 -3 -2 -1 0 Posición 1 2 3 4 0 -5 5 -4 -3 -2 E = 0.018 -1 0 Posición 1 2 3 10 15 20 4 E= -0.005 1000 1000 800 800 600 Potencial 600 Potencial Nº de enzimas Potencial menos asimétrico 400 400 200 200 0 0 -200 -25 -200 -25 -20 -15 -10 -5 0 Posición 5 10 15 20 25 -20 -15 -10 -5 0 Posición 5 25 5 MODIFICANDO EL DX… dx= 8 400 350 Nº de enzimas 300 250 200 150 100 50 0 -5 -4 -3 -2 -1 0 Posición E= 0.014 1 2 3 4 5 RESULTADOS Pudimos determinar un tiempo óptimo de difusión. Realizando varias corridas del mismo ratchet, observamos que se obtenían resultados similares Modificando el tiempo de difusión respecto del óptimo (aumentándolo y disminuyéndolo), la asimetría del potencial y el dx, disminuye la eficiencia CONCLUSIONES Nos parece que el modelo de trinquete difusivo de la quinesina de una cabeza se aplica bastante bien al funcionamiento de la ATP-sintasa. Sin embargo, la eficiencia no nos parece muy alta. Las modificaciones efectuadas (tiempo de difusión, simetría,etc) disminuían la eficiencia, como era de esperar de acuerdo a lo aprendido para este tipo de ratchet. Sin embargo… Existen algunas diferencias entre el modo de funcionamiento real de la ATPsintasa y lo planteado por nosotros en la práctica…. LA VERDAD DE LA MILANESA… • Las cargas negativas impiden la rotación hacia la membrana hidrofóbica (potencial) •La entrada de protones apaga el potencial. • Distinta probabilidad de entrada de protones a cada canal, debido a la diferente concentración de protones (potencial asimètrico) AGRADECIMIENTOS… A Julio Washington… A Mari por la picada…