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Actividad enzimática
Enzimas
• Las enzimas son catalizadores biológicos que disminuyen la energía de
activación de las reacciones que catalizan, pero no modifican la constante de
equilibrio.
Por tanto aceleran en igual proporción la velocidad de la reacción en las dos
direcciones.
Unión específica
•La(s) molécula(s) que va(n) a reaccionar, sustrato(s), se
unen a una región en la superficie de la enzima llamada
sitio activo.
La actividad catalítica de una enzima depende de su integridad como ESTRUCTURA NATIVA.
Algunas enzimas requieren de otras moléculas para catalizar una reacción.
ENZIMAS
SIN GRUPOS
QUÍMICOS ADICIONALES
GRUPO PROSTÉTICO
COFACTORES
IONES METÁLICOS
(Fe2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+)
GRUPOS COMPLEJOS
COENZIMAS
Apoenzima (si no lo tiene)
Holoenzima (si lo tiene)
UNIDADES DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Actividad
Unidad Internacional (U)= mol producto formado/min
Katal = mol producto formado/s
Actividad específica
U/mg proteína Katal/mg proteína
Velocidad inicial
La velocidad de una reacción que no sea de orden cero disminuye a
medida que ésta progresa porque va disminuyendo la concentración del o
los reactantes, y porque si la reacción es reversible se da la reacción
inversa.
•
• Por ello es conveniente medir la velocidad inicial (vo)de la reacción, que
es la velocidad antes de que la concentración de los reactantes disminuya
significativamente y de que los productos alcancen una concentración que
produzca una significativa reacción inversa.
• En el caso de las reacciones catalizadas por enzimas, otras dos razones
que hacen muy conveniente medir velocidades iniciales son:
– 1) el producto es un inhibidor de la reacción, aun cuando la reacción no
sea reversible.
– 2) la enzima puede ser inestable en el medio de reacción.
TABLA DE PURIFICACIÓN
Procedimiento
Volumen
de la
fracción
(mL)
Proteína
total en la
fracción (mg)
Actividad
enzimatica
(µmol/min
mL)
Actividad
total
Unidades
totales
(µmol/min )
Actividad
especifica
(µmol/min mg )
Actividad
específica
total
(µmol/min
mg totales )
Veces de
purificación
Rendimiento