Download BPL de Microbiología Procesamiento del material de vidrio

Dr. FÉLIX DANIEL ANDUEZA LEAL
ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL CHIMBORAZO
RIOBAMBA, MAYO 2015
DEFINICIÓN AGUA
MINEROMEDICINAL
•“Aquella que recibe de los
minerales alguna virtud extraña y
se utiliza como medicamento”
(Limón Montero, 1697)
•“Aquellas que procediendo de un
manantial o fuente pueden ser
utilizadas directamente con fines
terapéuticos por haber sido
reconocido por los organismos
competentes, siendo por lo tanto
verdaderos medicamentos”.
(Armijo, 1968)
CLASIFICACIÓN DE LAS AGUAS
MINEROMEDICINALES
• EN BASE A SU TEMPERATURA
– HIPOTERMALES ‹ 20 0 C
– MESOTERMALES ENTRE 30
– HIPERTERMALES › 40 0 C
0
Y 40 0 C
• EN BASE A SU COMPOSICIÓN QUÍMICA
– CLORURADAS
– BICARBONATADAS
SULFATADAS
FERRUGINOSAS
SULFURADAS
CARBOGASEOSAS
• EN BASE A SU CONTENIDO MINERAL
– OLIGOMINERALES ‹ 0,2 g/l DE RESIDUO SÉCO
– MEDIOMINERALES ENTRE 0,2 Y 1,0 g/l DE RESIDUO SÉCO
– MINERALES › 1,0 g/l DE RESIDIO SÉCO
CICLO HIDROLÓGICO
Escorrentía superficial
infiltración
Zona no saturada
Zona saturada
Escorrentía subsuperficial o hipodérmica
Nivel freático
percolación
Aguas subterráneas
Recarga= parte del agua infiltrada
que alcanza la zona saturada
Escorrentía subterránea
Captación
Zona impermeable
Tiempo de tránsito= tiempo que tarda una particula
de agua desde que alcanza la zona saurada hasta una
captacion o sale a la superficie.
BALNEARIOS DE AGUAS
MINEROMEDICINALES
USOS TERAPEUTICOS DE LAS AGUAS
MINEROMEDICINALES
• Afecciones del aparato locomotor. En todos estos
procesos la vía tópica es la principal vía utilizada.
• Enfermedades renales para los que se utiliza la vía
tópica.
• Afecciones de vías respiratorias. Entre ellas se
utilizan distintas técnicas por vía inhalatoria.
• Afecciones vasculares periféricas
• Afecciones psicosomáticas
• Afecciones gastrointestinales. En estos casos se
utiliza la vía oral
• Enfermedades dérmicas
(San Martín y Valero, 2004)
ASPECTOS DEL ESTUDIO
MICROBIOLÓGICO
• SANITARIOS
– PATÓGENOS
– MICROBIOTA
AUTÓCTONA
• LEGALES
– NORMATIVA
• MICROBIOLÓGICO
– VIABLES NO
CULTIVABLES
• ECOLÓGICOS
– COMUNIDADES
– PROPIEDADES
• EVOLUTIVO
– ORIGEN DE LA VIDA
MICROBIOTA DEL AGUA MINERAL
NATURAL
• MICROORGANISMOS VIABLES CULTIVABLES
–
–
–
–
Microorganismos totales
Microorganismos heterótrofos
Indicadores de calidad sanitaria
Microorganismos indicadores ecológicos
• MICROORGANISMOS VIABLES NO CULTIVABLES
• MICROORGANISMOS ENDOLÍTICOS
• TAPETES MICROBIANOS
MICROBIOLOGÍA DE LAS AGUAS
MINEROMEDICINALES
.No son estériles
.Poseen una Microbiota escasa
.La microbiota depende de sus
condiciones fisicoquímicas,
ambientales y ecológicas.
(Chapelle, 2000; De la Rosa y Mosso,
2000; Leclerc y Da Costa, 2004).
MICROBIOLOGÍA DE LAS AGUAS
MINEROMEDICINALES
La Microbiota del agua
mineral
natural
esta
constituida por dos tipos
de microorganismos:
. Autóctonos
. Alóctonos
(Schmidt-Lorenz, 1976)
BAÑOS DE GUAYLLBABMBA
RIOBAMBA. CHIMBORAZO. ECUADOR
RECUENTO DE MICROORGANISMOS
TOTALES Y VIVOS
10 ml
1 ml de naranja de acridina o
0,2 ml del kit Baclight live/dead
5 min en la oscuridad
filtrar
Bacterias vivas:
Bacterias muertas:
Microscopio de
epifluorescencia
MICROORGANISMOS
TOTALES Y VIVOS
RECUENTO DE BACTERIAS
HETERÓTROFAS
50 mL
AGAR PCA
INCUBAR A 22º C POR 5 DÍAS
AGAR PCA
INCUBAR A 37º C POR 2 DÍAS
RECUENTO DE COLIFORMES
TOTALES Y FECALES
250 mL
AGAR CHAPMAN-LACTOSATRIFENIL-TETRAZOLIO
INCUBAR A 30º C POR 24 - 48 h
AGAR CHAPMAN-LACTOSATRIFENIL-TETRAZOLIO
INCUBAR A 44,5º C POR 24 - 48 h
INVESTIGACIÓN DE Staphylococcus
aureus
250 mL
CALDO CASEINA- SOJA
AISLAR E IDENTIFICAR
INCUBAR A 37º C
POR 24 HORAS
AGAR BAIRD PARKER
INCUBAR A 37º C POR 48 HORAS
INVESTIGACIÓN DE Pseudomonas
aeruginosa
250 mL
AISLAR
E
IDENTIFICAR
AGAR CETRIMIDA
INCUBAR A 42º C
POR 24 HORAS
RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS
FILTRAR
100 ml
FILTRAR
10 ml
AGAR SABOURAUD
IDENTIFICACIÓN
GÉNEROS Y ESPECIES DE BACTERIAS HETERÓTROFAS
AISLADAS EN LOS MANANTIALES
MINEROMEDICINALES DE GUAYLLABAMBA
GÉNEROS Y ESPECIES
Ralastonia pickettii
Bacillus spp.
Brevibacterium spp.
Methylobacterium spp.
Corynebacterium aquaticum
Staphylococcus spp.
Pseudomonas aeruginosa
Moraxella spp.
MANANTIALES MINEROMEDICINALES
Piscina 1
Piscina 2
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
COLONIAS DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
AZULES
BACILOS GRAM POSITVOS IRREGULARES
- Aerobio; Inmóvil
-
Oxidasa +; Catalasa (d)
No fermenta azúcares
Reducción nitratos +
Fosfatasa +; Gelatina Esculina +; Urea + . . .
ESPECIES DE MOHOS ENCONTRADAS
EN AGUAS MINERALES NATURALES
Penicillium spp.
Aspergillus spp.
Cladosporium spp.
Chrysosporium spp.
Curvularia spp.
Cladosporium spp.
Fusarium spp.
Acremonium spp.
ASPECTOS A DESARROLLAR EN PROXIMAS INVESTIGACIONES
. ESTUDIOS METAGENOMICOS
. BIOPRPSPECCION BIOLOGICA
. ESTUDIOS Y CARACTERIZACION DE RESISTOMAS
. VADEMECUM DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES DEL ECUADOR
VIABLES NO CULTIVABLES
Aguas minerales subterráneas: sistemas con bajo nivel de materia
orgánica y biodisponibilidad limitada = oligotróficos
(DOC= 0,1-0,7 mg/L)
Bacterias:
estado “starvation survival ”= “estado viable no
cultivable” (SVNC)*
responden a la limitación de nutrientes y estrés:
• sistemas de transporte, afinidad por nutrientes
• rutas metabólicas alternativas, cap asimilación
otras fuentes de N, P, Fe y C
• formas de resistencia (esporas, cistos, f. latencia…)
• nanobacterias, ultramicrobacterias ( 0,3 μm)
“microcélulas”
• formación de biofilmes
* metabólicamente activas, incapaces de dividirse:
Enterobacteriaceae, Vibrio, Aeromonas, Campylobacter,
Helicobacter, Legionella
DIVERSIDAD MICROBIANA Y ESPECIFICIDAD
Ecosistemas de las aguas minerales muestran elevada diversidad microbiana
fenotípica y genotípica
Microbiota autóctona de
aguas minerales
16S rRNA
RFLP
Restriction Fragment Length Polimorphism
MICROORGANISMOS ENDOLÍTICOS
Lyngbya
Micrografías ópticas del cultivo de algas y
cianobacterias: Contraste de fases y
autofluorescencia roja
Chroococcus
Synechocystis
Anabaena
Micrografías electrónicas (LTSEM-BSE) de los
microorganismos endolíticos en las rocas
carbonatadas
TIPOS DE TAPETES
Superficie
Epilíticos
TAPETE DE SUPERFICIE
50μm
LT-SEM
Oscillatoria
M. confocal, naranja acridina FILTRO
Contraste de fases 20x
Zona superior
Zona inferior/media
EQUIPO DE TRABAJO
DRA. SANDRA ESCOBAR. ESPOCH. ECUADOR
MSc. JUDITH ARAQUE. ULA. VENEZUELA
BACHILLER ANA VANESA VEINTIMILLA. ESPOCH. ECUADOR
DR. GERARDO MEDINA. ESPOCH. VENEZUELA
DR. FELIX ANDUEZA. PROMETEO ESPOCH.VENEZUELA
MUCHAS GRACIAS