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Dr. FÉLIX DANIEL ANDUEZA LEAL ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL CHIMBORAZO RIOBAMBA, MAYO 2015 DEFINICIÓN AGUA MINEROMEDICINAL •“Aquella que recibe de los minerales alguna virtud extraña y se utiliza como medicamento” (Limón Montero, 1697) •“Aquellas que procediendo de un manantial o fuente pueden ser utilizadas directamente con fines terapéuticos por haber sido reconocido por los organismos competentes, siendo por lo tanto verdaderos medicamentos”. (Armijo, 1968) CLASIFICACIÓN DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES • EN BASE A SU TEMPERATURA – HIPOTERMALES ‹ 20 0 C – MESOTERMALES ENTRE 30 – HIPERTERMALES › 40 0 C 0 Y 40 0 C • EN BASE A SU COMPOSICIÓN QUÍMICA – CLORURADAS – BICARBONATADAS SULFATADAS FERRUGINOSAS SULFURADAS CARBOGASEOSAS • EN BASE A SU CONTENIDO MINERAL – OLIGOMINERALES ‹ 0,2 g/l DE RESIDUO SÉCO – MEDIOMINERALES ENTRE 0,2 Y 1,0 g/l DE RESIDUO SÉCO – MINERALES › 1,0 g/l DE RESIDIO SÉCO CICLO HIDROLÓGICO Escorrentía superficial infiltración Zona no saturada Zona saturada Escorrentía subsuperficial o hipodérmica Nivel freático percolación Aguas subterráneas Recarga= parte del agua infiltrada que alcanza la zona saturada Escorrentía subterránea Captación Zona impermeable Tiempo de tránsito= tiempo que tarda una particula de agua desde que alcanza la zona saurada hasta una captacion o sale a la superficie. BALNEARIOS DE AGUAS MINEROMEDICINALES USOS TERAPEUTICOS DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES • Afecciones del aparato locomotor. En todos estos procesos la vía tópica es la principal vía utilizada. • Enfermedades renales para los que se utiliza la vía tópica. • Afecciones de vías respiratorias. Entre ellas se utilizan distintas técnicas por vía inhalatoria. • Afecciones vasculares periféricas • Afecciones psicosomáticas • Afecciones gastrointestinales. En estos casos se utiliza la vía oral • Enfermedades dérmicas (San Martín y Valero, 2004) ASPECTOS DEL ESTUDIO MICROBIOLÓGICO • SANITARIOS – PATÓGENOS – MICROBIOTA AUTÓCTONA • LEGALES – NORMATIVA • MICROBIOLÓGICO – VIABLES NO CULTIVABLES • ECOLÓGICOS – COMUNIDADES – PROPIEDADES • EVOLUTIVO – ORIGEN DE LA VIDA MICROBIOTA DEL AGUA MINERAL NATURAL • MICROORGANISMOS VIABLES CULTIVABLES – – – – Microorganismos totales Microorganismos heterótrofos Indicadores de calidad sanitaria Microorganismos indicadores ecológicos • MICROORGANISMOS VIABLES NO CULTIVABLES • MICROORGANISMOS ENDOLÍTICOS • TAPETES MICROBIANOS MICROBIOLOGÍA DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES .No son estériles .Poseen una Microbiota escasa .La microbiota depende de sus condiciones fisicoquímicas, ambientales y ecológicas. (Chapelle, 2000; De la Rosa y Mosso, 2000; Leclerc y Da Costa, 2004). MICROBIOLOGÍA DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES La Microbiota del agua mineral natural esta constituida por dos tipos de microorganismos: . Autóctonos . Alóctonos (Schmidt-Lorenz, 1976) BAÑOS DE GUAYLLBABMBA RIOBAMBA. CHIMBORAZO. ECUADOR RECUENTO DE MICROORGANISMOS TOTALES Y VIVOS 10 ml 1 ml de naranja de acridina o 0,2 ml del kit Baclight live/dead 5 min en la oscuridad filtrar Bacterias vivas: Bacterias muertas: Microscopio de epifluorescencia MICROORGANISMOS TOTALES Y VIVOS RECUENTO DE BACTERIAS HETERÓTROFAS 50 mL AGAR PCA INCUBAR A 22º C POR 5 DÍAS AGAR PCA INCUBAR A 37º C POR 2 DÍAS RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES 250 mL AGAR CHAPMAN-LACTOSATRIFENIL-TETRAZOLIO INCUBAR A 30º C POR 24 - 48 h AGAR CHAPMAN-LACTOSATRIFENIL-TETRAZOLIO INCUBAR A 44,5º C POR 24 - 48 h INVESTIGACIÓN DE Staphylococcus aureus 250 mL CALDO CASEINA- SOJA AISLAR E IDENTIFICAR INCUBAR A 37º C POR 24 HORAS AGAR BAIRD PARKER INCUBAR A 37º C POR 48 HORAS INVESTIGACIÓN DE Pseudomonas aeruginosa 250 mL AISLAR E IDENTIFICAR AGAR CETRIMIDA INCUBAR A 42º C POR 24 HORAS RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS FILTRAR 100 ml FILTRAR 10 ml AGAR SABOURAUD IDENTIFICACIÓN GÉNEROS Y ESPECIES DE BACTERIAS HETERÓTROFAS AISLADAS EN LOS MANANTIALES MINEROMEDICINALES DE GUAYLLABAMBA GÉNEROS Y ESPECIES Ralastonia pickettii Bacillus spp. Brevibacterium spp. Methylobacterium spp. Corynebacterium aquaticum Staphylococcus spp. Pseudomonas aeruginosa Moraxella spp. MANANTIALES MINEROMEDICINALES Piscina 1 Piscina 2 + + + + + + + + + + + + + COLONIAS DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS AZULES BACILOS GRAM POSITVOS IRREGULARES - Aerobio; Inmóvil - Oxidasa +; Catalasa (d) No fermenta azúcares Reducción nitratos + Fosfatasa +; Gelatina Esculina +; Urea + . . . ESPECIES DE MOHOS ENCONTRADAS EN AGUAS MINERALES NATURALES Penicillium spp. Aspergillus spp. Cladosporium spp. Chrysosporium spp. Curvularia spp. Cladosporium spp. Fusarium spp. Acremonium spp. ASPECTOS A DESARROLLAR EN PROXIMAS INVESTIGACIONES . ESTUDIOS METAGENOMICOS . BIOPRPSPECCION BIOLOGICA . ESTUDIOS Y CARACTERIZACION DE RESISTOMAS . VADEMECUM DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES DEL ECUADOR VIABLES NO CULTIVABLES Aguas minerales subterráneas: sistemas con bajo nivel de materia orgánica y biodisponibilidad limitada = oligotróficos (DOC= 0,1-0,7 mg/L) Bacterias: estado “starvation survival ”= “estado viable no cultivable” (SVNC)* responden a la limitación de nutrientes y estrés: • sistemas de transporte, afinidad por nutrientes • rutas metabólicas alternativas, cap asimilación otras fuentes de N, P, Fe y C • formas de resistencia (esporas, cistos, f. latencia…) • nanobacterias, ultramicrobacterias ( 0,3 μm) “microcélulas” • formación de biofilmes * metabólicamente activas, incapaces de dividirse: Enterobacteriaceae, Vibrio, Aeromonas, Campylobacter, Helicobacter, Legionella DIVERSIDAD MICROBIANA Y ESPECIFICIDAD Ecosistemas de las aguas minerales muestran elevada diversidad microbiana fenotípica y genotípica Microbiota autóctona de aguas minerales 16S rRNA RFLP Restriction Fragment Length Polimorphism MICROORGANISMOS ENDOLÍTICOS Lyngbya Micrografías ópticas del cultivo de algas y cianobacterias: Contraste de fases y autofluorescencia roja Chroococcus Synechocystis Anabaena Micrografías electrónicas (LTSEM-BSE) de los microorganismos endolíticos en las rocas carbonatadas TIPOS DE TAPETES Superficie Epilíticos TAPETE DE SUPERFICIE 50μm LT-SEM Oscillatoria M. confocal, naranja acridina FILTRO Contraste de fases 20x Zona superior Zona inferior/media EQUIPO DE TRABAJO DRA. SANDRA ESCOBAR. ESPOCH. ECUADOR MSc. JUDITH ARAQUE. ULA. VENEZUELA BACHILLER ANA VANESA VEINTIMILLA. ESPOCH. ECUADOR DR. GERARDO MEDINA. ESPOCH. VENEZUELA DR. FELIX ANDUEZA. PROMETEO ESPOCH.VENEZUELA MUCHAS GRACIAS