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MARIA JOSE JARAMILLO ESTRELLA
8 DE SEPTIEMBRE DEL 2011
La cuantificación de los subgrupos de células utiliza 3 factores:
1. Existencia de una molécula en la superficie celular específica
de subgrupo (p.ej. , CD4 para los linfocitos T)
2. Un anticuerpo monoclonal específico de la molécula
3. Sustancias químicas llamadas fluorocromos que producen
fluorescencia a una longitud de onda concreta cuando se
exponen a una fuente de luz excitadora: fluoresceína (verde),
ficoeritrina (naranja) y aloficocianina (rojo)
Citometría
de Flujo
Separación de los
leucocitos
de
la
sangre
utilizando
gradiente
de
densidad.
La
purificación
puede
obtenerse
utilizando
anticuerpos
monoclonales
específicos
marcados con bolas
magnéticas
Análisis
de
la
proliferación
para
determinar la respuesta
del linfocito T al antígeno
específico
ACTIVACION DE LOS LINFOCITOS
T Y MEDIR SU RESPUESTA
METODOS DE
ACTIVACION
(INVESTIGACIÓN Y EXPLORACION
DIAGNOSTICA EN PACIENTES
CON INMUNODEFICIENCIAS)
ACTIVADOR
POLICLONAL O
MITÓGENO
LA LECTINA
FITOHEMAGLUTININA
(PHA)
PROLIFERACION
DE LINFOCITOS T
Y PRODUCCION
DE
CITOCINAS
EFECTORAS
ENLACES CRUZADOS
CON
GLUCOPROTEINAS
DE SUPERFICIE DE
LINFOCITOS T.
ANTI-CD3
MONOCLONAL
ENLACES CRUZADOS
CON EL COMPLEJO
TCR
SUPERANTÍGENOS
ENTEROTOXINA B
ESTAFILOCÓCICA
SUSTANCIAS
MICROBIANAS SE
UNEN A LOS
DOMINIOS DE LAS
CADENAS Vβ DEL TCR
ACTIVACION
Y
PROLOFERACION
DE TODOS LOS
LINFOCITOS
T
FRENTE
A
ESTIMULOS
ESPECIFICOS
La determinación de la respuesta del linfocito T se lleva a cabo de
diferentes modos, uno de los más sencillos es la citometría de flujo pero con
frecuencia se requiere de información mas detallada sobre las citocinas, lo
que permite clasificar las respuestas como TH1, TH2, TH17 o Treg.
Las citocinas que se producen pueden determinarse:
1. ELISA: inmunoanálisis enzimático sobre fase sólida
2. Citometría de Flujo: para determinarlos dentro de la célula
3. PCR (reacción en cadena de la polimerasa: para los transcritos de
ARNm específicos de las citocinas..
4. ADN recombinante para sintetizar molécula del HLA solubles
ADN recombinante para sintetizar molécula del HLA solubles.
Las
moléculas de HLA se ensamblan en los complejos de 4 componentes
péptido-HLA (tetrámero de HLA) lo que aumenta la avidez de
interacción . El tetrámero se acopla a un fluorocromo de modo que los
linfocitos T individuales son capaces de unirse al epítopo específico.
Revolucionado la capacidad de
determinar respuestas inmunitarias por
ejemplo: al virus de Epstein-Barr
(respuestas antivíricas)
Examinar la lisis específica por los
CTL y la destrucción de los linfocitos
asesinos naturales.
El análisis se basa en la incubación
de las células efectoras y las células
diana y la determinación de
afección de éstas.
En la evaluación de la actividad de
CTL debe usarse la célula diana
emparejada con la molécula del
MCH apropiado.
Las células diana se marcan mediante incubación con cromato sódico
radiactivo.
Si las células diana son dañadas por los efectores se libera el cromo del
citoplasma.
Los niveles de radiactividad son proporcionales a la lisis de la célula diana.
Burnet y Medewar, galardonados con el premio Nobel de Medicina en 1960,
estudiaron el rechazo de injertos cutáneos alogénicos (no propios), en los que
observaron una asociación linfocítica masiva.
La importancia radica en que se puede
obtener tolerancia a antígenos extraños,
aunque la vía de inyección neonatal no
se use en el transplante de órganos.
MEDICION
ENSAYO
EJEMPLOS ESPECIFICOS
Concentración de Ig
Nefelometría
IgG, IgM, IgA e IgE
Inmunoelectroforesis,
inmunofijación
Componente M
ELISA
Prueba de fijación de
complemento
C1, C2, C3, C4
CH50
Anticuerpos de agentes
infecciosos:
VIH
Streptococo
Treponema pallidum
ELISA, western blot
Aglutinación
Aglutinación
Anti-gp24, gp41, gp120
Polisacarido anticapsular
VDRL
Autoinmunidad:
Anticuerpos anti-Ig
Hemaglutinacion pasiva
Factor reumatoide
Inmunofluorescencia
ANA, y anti DNA`s
Citometría de flujo
Citometría de flujo
CD4, CD8, CD19
CD10 o células leucémicas
Gammapatías monoclonales
Complemento:
Componentes individuales
Actividad hemolítica total
Anticuerpos antinucleares
Marcadores de superficie
celular
Linfocitos normales
Tumores celulares