Download A, B y O

INMUNOHEMATOLOGIA
HEMATOLOGIA CLINICA
2013
Ivan Maria Victoria
Karl Landsteiner
Modelos de la estructura de las principales
proteínas activas de grupo sanguíneo
CLASIFICACION SEGÚN SU
NATURALEZA QUIMICA
CARBOHIDRATOS
ABO, LEWIS, Hh
GLICOLIPIDO
P
GLICOPROTEINA
Kell, Xg, Scianna, Kx, MNSs (GPA GPB),
Dombrock (GPI-linked)
PROTEINA
Rh, LuTHERAN (iGsf), Duffy(ECR), Kidd
( Urea Transp.), Diego (Banda 3), Colton
(Acuaforina-1), LW (IgSF),Chido/Rogers
(C4A C4B),
CLASIFICACION ISBT:
DEFINICIONES
SISTEMA DE GRUPO SANGUINEO
Sistema formado por uno o más antigenos controlados
por un único locus o por un complejo de genes homólogos
estrechamente ligados que no recombinan durante la
meiosis
Inmunogenicidad
Nombre
Sistema Inmunogenicidad
SISTEMA
ABO
SISTEMA ABO
Clasificación ISBT: ABO, 001
Expresión:
Soluble: Saliva y otros fluidos corporales, excepto LCR
(en los secretores)
Otras células sanguíneas: linfocitos, plaquetas
(adsorbidos del plasma)
Tejidos: Amplia distribución. Células epiteliales y
endoteliales.
Ubicación: 9q34.1-q34.2
Nombre del gen:
ABO
Producto del gen:
A:
a(1,3)N-Acetilgalactosaminiltransferasa (353 aa)
B:
a(1,3)Galactosaminiltransferasa (353 aa)
LOS GRUPOS SANGUÍNEOS SON ALOGÉNICOS
La mayoría de los individuos desarrollan anticuerpos
frente a los antígenos ABO alogénicos aunque no
hayan sido expuestos a eritrocitos extraños; esta
sensibilidad se debe al contacto con epítopos
idénticos que casualmente expresan de forma
rutinaria una gran cantidad de microorganismos.
SISTEMA ABO: IMPORTANCIA CLINICA
•Reacciones hemolíticas postransfusionales severas
• Enfermedad hemolítica del RN leve a moderada
• Asociación con la enfermedad:
• Debilitamiento de la expresión de A y B en leucemias y enfermedades
que inducen éstres en la hemopoiesis (talasemia, anemia de Diamond
Blackfan).
• Los antígenos A y B son marcadores tumorales
(modificaciones en las cadenas de azúcares son características
de cánceres y eritroleucemias).
SISTEMA ABO
ADULTOS
RECIEN
NACIDOS
A1
810.000 1.700.000
250.000 370.000
A2
240.000 290.000
140.000
B
610.000 830.000
200.000 320.000
TIPIFICACION ABO DE
RUTINA
Suero vs.
GR vs.
%
GR O
GRUPO
ABO
+
0
0
+
+
+
+
-
Anti-A
Anti-B
Anti-A,B
GR A1
0
0
0
+
+
0
+
0
+
+
+
B
N
0
45
49
0
A
40
27
0
0
B
11
20
-
-
AB
4
GR B
4
CAUSAS COMUNES DE RESULTADOS FALSO
POSITIVO FALSO NEGATIVO EN LA
TIPIFICACION ABO
RESULTADOS FALSO
NEGATIVO
No se agregó reactivo o
suero.
RESULTADOS FALSO
POSITIVO
Centrifugación excesiva.
Proporción inapropiada de
suero y de eritrocitos.
Uso de reactivos, glóbulos
rojos o solución salina
contaminada.
Centrifugación
insuficiente.
Uso de material de vidrio
sucio.
Incubación a más de 20 24ºC.
Interpretación o registro
incorrecto de los
resultados.
Interpretación o registro
incorrecto de los
resultados.
TIPIFICACION ABO DE
RUTINA
Suero vs.
GR vs.
Anti-A
Anti-B
Anti-A,B
GR A1
0
0
0
+
0
0
+
GRUPO
ABO
GR B
GR O
+
+
0
0
+
+
+
0
?
DISCREPANCIA
+
+
+
+
0
?
DISCREPANCIA
+
+
+
+
+
?
DISCREPANCIA
CAUSAS DE DISCREPANCIA
• SUBGRUPOS DEL ABO
• PRESENCIA DE ANTICUERPOS IRREGULARES
• POLIAGLUTINACION
GR vs.
Anti-A
Anti-B
+
0
Anti-A
+
Anti-B
0
Suero vs.
Anti-A,B
GRA1
GRB
GRO
+
+
0
+
Anti-A,B
+
GRA1 GRA2 GRB GRO
+
0
Conclusiones: presencia de anti-A1
+
0
SUBGRUPOS DEL A
(excluidos A1 y A2)
Métodos:
1)Aglutinación con anti-A y anti-A,B
2)Presencia o Ausencia de anti-A1
3)Presencia o ausencia de A en saliva
4)Presencia o ausencia de H en saliva
5)presencia de diversas glicosil
transferasas
1) REACCION CELULAR CON
ANTI-A Y ANTI-A,B
AGLUTINACION DEBIL
NO AGLUTINACION
A3
Am
AX
Ay
Aend(Bantu)
Ael
A3
Campo mixto
(30%)
AX
Aend
Aglutina con
anti-A,B
Campo mixto
(10%)
4000 sitios
antigénicos
200.000 sitios en
los aglutinados
Transferasa débil
y heterogénea
Transferasa débil
No Transferasa
en suero
Anti-A1
Anti-A1
s/Anti-A1
70.000 a 100.000
sitios antigénicos
Secretor de A
Alelo dominante
No secretor de A
no secretor de H
No secretor de A
secretor de H
Alelo dominante
Alelo dominante
SUBGRUPOS DEL B
GR vs:
Fenotipo
Eritrocito
a-A
a-B
a-A,B
B
0
4+
4+
B3
0
Bm
Bx
Suero vs:
saliva de
GR0 secretores
a-H
GRA
GRB
0
4+
0
0
B&H
1+cm 2+cm
4+
4+
0
0
B&H
0
0
4+
4+
0
0
B&H
0
0/+ 0/2+
4+
4+
0
0
H
0/+
GR vs.
Suero vs.
Anti-A
Anti-B
Anti-A,B
0
0
DB
UE
GR O
GROh
0
0
+
0
0
GRA1
GRB
GRO
+
+
+
Conclusiones: Oh (BOMBAY)
SISTEMA ABO: GENÉTICA.
Interacción con el sistema Hh
El locus ABO tiene tres alelos: A, B y O, y por el
hecho de ser diploide todo individuo será portador de
dos alelos.
GEN
Hh
Fucosil
transferasa
SUSTANCIA
PRECURSORA
Azúcar
inmunodominante
SUSTANCIA
H
L-Fucosa
N-AcGalactosamina
D-Galactosa
Azúcar
inmunodominante
N-AcGalactosaminil
transferasa
GEN
A
D-Galactosil
transferasa
GEN
B
GEN AMORFO
GEN
0
SISTEMA
ABO
Un gen H situado en un locus separado codifica la sustancia
precursora sobre la que actúan los productos de los genes
A y B.
Los subgrupos de A : A1 y A2 serológicamente se
diferencian por su comportamiento frente a
extractos vegetales denominados “LECTINAS”.
LECTINA anti-A1 de Dolichos biflorus.
LECTINA anti-H de Ulex europeaus.
Fenotipo
Frecuencia
A1
80 %
A2
20 %
GRUPO BOMBAY
Los individuos con genotipo HH o Hh producen la
enzima 1,2-fucosiltransferasa que transforma la
sustancia precursora en Sustancia H.
Los individuos con fenotipo BOMBAY con genotipo hh
no producen dicha enzima, por lo que no pueden
modificar la sust. precursora, lo que hace que no
puedan sintetizar SUSTANCIA H.
Esto condiciona a que los genes del sistema ABO (si
los tuviesen ) no pueden expresarse, por lo que
parecen ser del grupo O.
Presentan de manera constante además de anti-A y
anti-B, un anticuerpo natural anti-H muy activo a 37ºC,
capaz de hemolisar los hematíes de cualquier individuo
que no sea de fenotipo BOMBAY.
Recordar…
Los títulos de antiA y antiB con frecuencia están
disminuidos en pacientes ancianos
y con
hipogammaglobulinemia, por lo que puedo tipificar
erróneamente cuando haga el GRUPO SERICO.
Los RN no producen títulos normales de antiA y
antiB hasta los 36 meses de edad, alcanzando el
titulo máximo entre los 5 a 10 años de edad.
El gen ABO está organizado en 7 exones y 6
intrones.
Las
modificaciones
polimórficas
ocurren tanto a nivel de exones como de
intrones. El tamaño del gen es de 18 kb
Los alelos del grupo O en su mayoría tienen
deleciones de un único nucleótido en el exón 6, lo
que produce un producto no funcional. Esta
deleción genera un codón stop.
SISTEMA ABO
Variaciones de aminoacidos en las transferasas según alelos
156
176
216
235
266
268
291
352
A1
Pro
Arg
Phe
Gly
Leu
Gly
Asp
Arg
A2
Leu
A3
AX
Asn
Ile
SISTEMA ABO
Variaciones de aminoacidos en las transferasas según alelos
B
156
176
216
235
266
268
291
352
Pro
Gly
Phe
Ser
Met
Ala
Asp
Arg
B3
Cis-A,B
B(A)
Gly
Leu
Arg
Trp
Gly
Leu
SISTEMA ABO
Variaciones de aminoacidos en las transferasas según alelos
0
0
156
176
216
235
266
268
291
352
Pro
Gly
Phe
Gly
Leu
Arg
Asp
Arg
Gly
Gly
0
Produce una proteína sin actividad enzimática de 116 aa. Después de Val
en el residuo 86 se produce una mutación de una base en el codon 87 (nt
261), generando un codon stop.
MEDIADAS POR LA INMUNIDAD
Hemolítica transfusional Aguda:
Causa: Incompatibilidad ABO
Fisiopatología:
1.
Fase I : Interacción AG-AC.
2.
Fase II: Activación Fagocítica
3.
Fase III: Respuesta Sistémica
Hemolítica Transfusional Aguda
Presentación:
Fiebre
Nauseas / Vómitos
Dolor
Hipotensión
Shock
Disnea
Complicaciones:
Fallo Renal Agudo
Coagulación Intravascular Diseminada
SISTEMA RH
Philip Levine
Antígenos del Sistema Rh
D
f
Ew
VS
cE
Rh32 Evans Crawford
C
Ce
G
CG
hrH
Rh33 Rh39
E
Cw
Hro
CE
Rh29
c
Cx
Hr
Dw
Goa
e
V
hrS
"c-like"
hrB
HrB
Tar
Rh35 Rh41
Bea
Rh42
JAL
JAHK
Nou
STEM
DAK
Riv
FPTT
LOCR
Sec
MAR
Dav
BARC
Asignación Cromosomal
• Los Ags. de este Sistema
son gobernados por 2 genes:
RHD y RHCE
con una localización en el
Cromosoma 1 (1p36.13p34.3)
Flegel WA; Transfusion and
Apheresis Science 44 (2011) 81–91
Cartron JP et al; Vox Sanguinis
1998; 74 (Suppl. 2): 29-64
Cómo la proteína puede formar una estructura
símil barril dentro de la membrana y con
función de transporte en la misma
DENSIDAD ANTIGÉNICA
ANTÍGENO
COPIAS /G.R.
D
9.900 - 33.300
C
7.200 - 56.400
E
17.900 - 27.500
c
37.000 - 85.000
e
13.400 - 24.400
Rol Biológico
• Sugerencia de Función Estructural: Sujetos
Rh Null (carecen Ag. Rh29) padecen un
Síndrome con estomatocitos.
• Disminución de la expresión antigénica de
los Ags. del Sistema Rh en Leucemias y
otras Enfermedades Oncohematológicas.
• Función de Transporte en la Membrana:
Aumento de permeabilidad catiónica.
• También se ha postulado recientemente que
las proteinas Rh podrían funcionar como un
canal de gas para CO2
RELACIÓN CON CONDICIONES
HEMATOLÓGICAS PARTICULARES
Sugerencia de función estructural
• Sind. Rh Nulo (sin Rh:29): Estomatocitos
Antígenos del Sistema Rh
• son sintetizados en el glóbulo rojo
• son detectados solamente en los hematíes
• sus determinantes proteicos están
representando el producto primario
codificado por un gen
• se heredan como rasgos Codominantes
Definiciones Básicas
• Las dos principales razones por las cuales los
hematíes no pueden ser genotipados son:
– las pruebas serológicas revelan la presencia o
ausencia de antígenos, no de genes, y
– los hematíes en circulación no poseen núcleo y
por lo tanto no expresan genes.
• Dado que un genotipo de grupo sanguíneo es
una interpretación del fenotipo de un
individuo, deberá calificarse como un
genotipo probable.
Nomenclaturas
• Ha sido usado un número de diferentes tipos de
nomenclaturas: letras mayúsculas (D, G, V); letras
mayúsculas con minúsculas (C y c, E y e); superíndices
(Cw, Cx), números (Rh32; Rh33) y hasta tortuosos
jeroglíficos
(RoHar, ha, rhw2, DCor, R̿N, rhii), generando
tanta inconsistencia como confusión, ambas
altamente indeseables.
Definiciones Básicas
• En este sistema las notaciones emplean
simples letras (CDE), superíndices (Cw, Goa,
Bea, etc.) y términos numéricos (Rh2)
• Los genes se escriben en itálicas empleando el
nombre del sistema y el número del antígeno
como un superíndice, p. ej., Rh4.
Definiciones Básicas
• El fenotipo puede anotarse con letras (D+C+Ec+e+) o con números (Rh:1,2,-3,4,5). Un complejo
génico (haplotipo) puede indicarse en términos CDE
o mediante el uso de un símbolo de gen. El uso de
un símbolo de gen solo se aplica cuando se usa CDE
taquigráfico (corto). El símbolo de gen R denota la
presencia de un gen D; en tanto que r indica la
ausencia de un gen D.
Madre: Rh +
Rh DD
= Rh +
Rh Dd
= Rh +
Rh dd
= Rh -
Niño
Padre: Rh+
Principales genes o haplotipos Rh
R1
r
R2
Ro
r’
r”
Rz
ry
CDe
cde
cDE
cDe
Cde
cdE
CDE
CdE
Como convertir Nomenclatura de
Fisher-Race a la de Wiener
• D
• D
•
•
•
•
R
r
Considere sólo los genes C y/o E en el
haplotipo
Gen R
Gen r
CE
1
’
CE
2
”
CE
o
CE
z
y
D C E c
e
Genotipo más
Fenotipo
probable
M O + O + + Cce
P
+ + + O + DCEe
Cde/cde
(r’r)
CDe/CDE
(R1RZ)
CDE/cde
CDe/cDE
RN + + + + + DCEce
(R1ZRr)2)
PROBABILIDADES DE UNA MADRE RhDE TENER UN HIJO Rh+
SEGÚN LAS CARACTERÍSTICAS DEL PADRE
PADRE
Rh +
Probablemente
Homocigota (D/D)
Rh +
Probablemente
Heterocigota (D/d)
Rh +
Rh Desconocido
Rh -
GENOTIPO MÁS
PROBABLE
CDe/CDe (R1R1)
CDe/cDE (R1R2)
cDE/cDE (R2R2)
CDe/CDE (R1RZ)
cDE/CDE (R2RZ)
CDE/CDE (RZRZ)
CDe/cde (R1r)
cDE/cde (R2r)
cDe/cde (Ror)
No Determinado
No Determinado
-
PROBABILIDADES
SEGÚN
PROMEDIO
GENOTIPO
97,76 %
94,50 %
92,79 %
96,16 %
97,89 %
95,25 %
100 %
53,09 %
53,08 %
53,02 %
51,60 %
70,90 %
58,97 %
0%
Base Genética de la Proteína Rh
La proteína Rh cruza
la membrana del G.R.
Gen RHD :10 exones
codificando regiones
3pares de bases
1 triplete =
1 aminoácido
Código para proteínas
Base Genética de la Proteína Rh
La proteína Rh cruza
la membrana del G.R.
Gen RHD :10 exones
codificando regiones
3pares de bases
1 triplete =
1 aminoácido
Código para proteínas
Base Genética de la Proteína Rh
Gen RHD :10 exones
codificando regiones
Código para proteínas
Rh Negativo
Rh Positivo
Gen RHD
Proteína D
Gen RHCE
Proteína Cc y Ee
Proteína Cc y Ee
Gen RHD
Gen RHCE
Intrón 4, 600 pares de bases más largo que el
Intrón 4 del gen RHD
Gen RHD
Proteina RhD
Gen RHCE
Proteina RhCcEe