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FACULTAD DE CIENCIAS
Maestría en Enseñanza de las Ciencias Exactas y Naturales
Asignatura:
Tópicos en Biología
PRÁCTICA DE LABORATORIO
Efectos de la nicotina y la cafeína en el índice mitótico de las células vegetales de Allium cepa
Effects of nicotine and caffeine in the index mitotic plant cells Allium cepa
Presenta:
Juan David Galeano Marín
71360774
Docente:
María Elena Márquez Fernández
Medellín, Colombia
Noviembre 26 de 2016
Estudios de referencia
Nicotina
Allium cepa
Cafeína
Se han evaluado sus efectos
negativos en el ciclo
mitótico.
Considerado un modelo
experimental para evaluar la
toxicidad de extractos.
Se han evaluado sus efectos
negativos en el ciclo
mitótico.
(Moyano, 2013; Silva, D.,2010; Grando,
S., 2002; Schaal, C., Chellappan, SP.,
2014; Kim, CS., Choi, JS., Joo, SY., Bae,
EH., Ma, SK., Lee, J., Kim, SW., 2016).
(Capote, A., Fundora, Z. y Pérez O.,
2000; Muñoz, D. y Guerrero, N., 2012;
Andrioli, N., Wulff, A. y Mudry, M.,
2006; Leme y Marin, 2009).
(Röper, W. 1977; Röper, W. 1975;
Röper, W. 1978; Chen Y, Zhang L, Zhou
Y, Geng Y, Chen Z., 2000).
*Alteración del sistema visual del pez cebra.
*Inhibición de diferenciación de miofibroblastos
humanos.
*puede inducir la progresión del ciclo celular, la
angiogénesis y la metástasis de los cánceres de
pulmón y de páncreas.
*Apoptosis.
* Disminución índice mitótico.
* El efecto de diferentes reguladores
del crecimiento.
* Células binucleadas.
* El efecto citotóxico y genotóxico de
extractos naturales en células.
* Malformación del huso acromático
*la toxicidad del metronidazol.
* Células tetraploides.
Una breve descripción de la práctica…
Mediante la siguiente práctica de laboratorio se busca observar los
efectos biológicos de la nicotina y la cafeína en el índice mitótico de las
células vegetales del tejido meristemático de la raíz de Allium cepa.
Inicialmente seleccionaran quince (15) bulbos de cebolla que se
sumergirán parcialmente en agua, para propiciar el crecimiento de las
raíces durante cuatro (4) días. Posteriormente, se seleccionarán cinco
(5) bulbos que serán expuestos en una solución de cafeína, otros cinco
(5) en una solución de nicotina y los cinco (5) restantes se dejarán en
sus respectivos recipientes con agua, durante cinco (2) días. Luego, se
tomarán muestras de cada uno de los tres (3) tipos de preparaciones
para ser observadas en el microscopio y determinar el índice mitótico
en cada uno de los tres casos para luego comparar los resultados
obtenidos en el caso de la cafeína, la nicotina con la preparación que
sólo contiene agua. Finalmente, se establecerá si la exposición de las
células a estas dos sustancias tiene algún efecto sobre su índice
mitótico y cuáles son.
Objetivo
La práctica de laboratorio, tiene como objetivos,
determinar los efectos biológicos de la nicotina y la
cafeína en el índice mitótico de las células vegetales
del tejido meristemático de la raíz de Allium cepa.
Para luego, comparar los índices mitóticos
obtenidos en cada caso (sin exposición a la cafeína y
a la nicotina y con exposición a cada una de las dos
sustancias) y, posteriormente, analizar los
resultados obtenidos para concluir cuáles son los
efectos biológicos de la nicotina y la cafeína en el
índice mitótico de las células vegetales del tejido
meristemático de la raíz de Allium cepa.
Materiales y reactivos
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Microscopio electrónico
15 bulbos de Allium cepa.
Porta objetos.
Cubre objetos.
3 Cajas Petri
Papel absorbente.
Aguja de disección.
Tijeras.
HCl diluido.
Colorante aceto-orceína.
Cafeína.
Nicotina.
Procedimiento
Se colocan los
bulbos de cebolla
en un recipiente con
agua. Durante 4 días
Se le adiciona
extracto de
nicotina (Ácido
nicotinico).
Durante 2 días
Se le adiciona
extracto de
cafeína
(“Fencafen”).
Durante 2 días
Continúa en agua
durante 2 días
(Control)
Procedimiento
Se toman muestras de las raíces de cada preparación para observarlas en el microscopio
Se lavan con
agua
destilada y
se ponen en
una caja de
petri que
contiene
5mL de
etanol.
Después de
8 minutos se
lavan de
nuevo con
agua
destilada.
Procedimiento
Se toma una
pequeña
muestra del
extremo
externo de
la raíz (2 a 3
mm)
Se pone sobre
un
portaobjetos y
se le adiciona
una gota de
aceto-orceina.
Se les coloca un cubre objetos y se realiza un “squash”, con el borrador de un lápiz.
Se llevan al microscopio, para observar:
Células
mitosis
Profase
Metafase
Anafase
Se realiza conteo para determinar:
Índices
Telofase
Polinucleadas
Tetraploides
Apoptosis
Resultados
Cálculos
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Índice Mitótico (IM)
Número de células en mitosis (#CM)
Total de células (TC)
Índice profásico (Ip)
Número de células en profase (#Cp)
Índice metafásico (Im)
Número de células en metafase (#Cm)
Índice anafásico (Ia)
Número de células en anafase (#Ca)
Índice telofásico (It)
Número de células en telofase (#Ct)
Número de células en mitosis (#CM)
Comparación de los resultados
obtenidos
Cuestionario
1. ¿Cuáles diferencias se pueden apreciar entre las células observadas en cada fase en la preparación que solo contiene
agua y la preparación que contiene extracto de nicotina?
2 ¿Cuáles diferencias se pueden apreciar entre las células observadas en cada fase en la preparación que solo contiene
agua y la preparación que contiene extracto de cafeína?
3 Según las diferencias observadas en las células en cada fase entre la preparación que solo contiene agua y la que
contiene extracto de nicotina, ¿cuáles son los efectos de la nicotina en el ciclo mitótico en cada fase?
4 Según las diferencias observadas en las células en cada fase entre la preparación que solo contiene agua y la que
contiene extracto de cafeína, ¿cuáles son los efectos de la cafeína en el ciclo mitótico en cada fase?
5 ¿Cuáles pueden ser los efectos en la salud humana del consumo excesivo de productos que contienen cafeína?
6 ¿Cuáles pueden ser los efectos en la salud humana del consumo excesivo de productos que contienen nicotina?
7 ¿Cuáles son las razones por las que la cebolla Allium cepa es considerada como un modelo experimental efectivo para
evaluar la toxicidad de extractos?
8 ¿Cuáles alteraciones puede sufrir el ciclo mitótico?
9 ¿Cuáles pueden ser los efectos en la salud humana de las alteraciones del ciclo mitótico?
10 ¿Cuáles son los puntos de control del ciclo mitótico?
11 ¿Cuáles pueden ser las consecuencias en la células si fallaran u ocurriera alguna anomalía en estos puntos de
control?
12 ¿Cómo se observarían estas células en el microscopio debido a las fallas o anomalías en estos puntos de control?
13 ¿Cuáles sustancias pueden ser utilizadas para disminuir y/o revertir los efectos ocasionados por la cafeína y la
nicotina?
14 Describe brevemente las características de las células en cada fase del ciclo celular
15 Explica las características de la mitosis
16 ¿En cuál o cuáles fases se encontraban la mayoría de las células?
Conclusiones
En el caso de la cafeína, se espera observar células binucleadas en
cada una de las fases, porque la cafeína inhibe la formación del
fragmoplasto o tabique de separación celular, por eso, no se produce
la citocinesis y los dos núcleos permanecen separados pero dentro del
mismo citoplasma. Posteriormente, si se continúa el proceso división
mitótica de las células hijas los dos núcleos entran de nuevo en mitosis
y se podrán observar células binucleadas en profase, metafase,
anafase y telofase. En un segundo proceso de división mitótica bajo los
efectos de la cafeína se espera observar células poli nucleadas.
Debido a las irregularidades causadas por la cafeína, es probable que
los sitios de control se activen, para evitar que las células pasen a las
fases siguientes del ciclo celular o que inicien de nuevo otro ciclo y, por
tanto, algunas células binucledas se queden en G0. Asimismo, se
espera que el número de células en cada una de las fases disminuya
con respecto a la que fue tratada sólo con agua.
Conclusiones
En el caso de la nicotina, considerando los estudios referenciados en la introducción,
se puede esperar una disminución en el índice mitótico, es decir, un menor número de
células en mitosis y en cada fase en comparación con los tejidos que no tuvo
tratamiento con nicotina. Asimismo, se puede esperar un bajo crecimiento del tejido
debido a la disminución en el índice mitótico y a la apoptosis provocada por la
nicotina.
Es probable, que en el caso de la nicotina y la cafeína, además de las células poli
nucleadas, se observen células tetraploides, debido a que según los estudios
referenciados, los núcleos pueden ser fusionados por los efectos de la nicotina y la
cafeína.
El consumo de productos que contienen cafeína y nicotina en bajas proporciones, en
algunos casos pueden resultar benéficos para la salud. Sin embargo, el consumo
excesivo de los mismos y a largo plazo puede resultar contraproducente, causando
disfunciones en los órganos afectados e incluso se pueden manifestar en diversos
tipos de cáncer. Por esta razón, es conveniente que el consumo de estos productos sea
regulado.
Conclusiones
Esta práctica de laboratorio, si se realiza con las precauciones y elementos de protección necesarios, puede
resultar motivante e interesante para los estudiantes y permitiría comprender mejor el ciclo mitótico con sus
alteraciones. Además, puede resultar en una medida preventiva frente al consumo de estas sustancias y otras de
carácter sicoactivo. Esto en tanto, se puede establecer una relación entre el conocimiento científico y su utilidad en
la vida cotidiana.
En muchas páginas web, artículos de revista, tesis, entre otros medios de información se afirma que las
investigaciones realizadas sobre la relación de la cafeína y la nicotina con algunas enfermedades y diversos tipos de
cáncer, no son concluyentes. Si bien es cierto, que los resultados son diversos y en ocasiones parecen
contradictorios, es recomendable realizar una revisión de los mismos que tenga un enfoque desde lo molecular,
pasando por lo celular e incluso a nivel de tejidos, órganos y sistemas. Esto, porque es posible encontrar que en
algunas células la nicotina induce la proliferación celular de células mutadas, que inducen el cáncer y que las hace
resistentes a la apoptosis (Schaal, C., Chellappan, SP., 2014). Mientras que en otro estudio se plantea que esta
misma sustancia induce a la apoptosis de algunas células (Kim, CS., Choi, JS., Joo, SY., Bae, EH., Ma, SK., Lee, J., Kim,
SW., 2016). A pesar que esto parece contradictorio a primera vista, se debe considerar que los estudios fueron
realizados en diferentes tipos de células, en el primero se analizaron células del pulmón y páncreas, mientras que
en el segundo se estudiaron células epiteliales tubulares renales.
En el desarrollo de este trabajo se citan fuentes que probablemente no presentan un gran reconocimiento
académico. Sin embargo, fueron estas las que en alguna medida posibilitaron realizar un rastreo más riguroso para
encontrar artículos de revista que reposan en fuentes de mayor reconocimiento y cuyos autores muestran
titulaciones en universidades nacionales y/o internacionales. Asimismo, algunos de los artículos no son recientes
(1970 – 1978), pero el seguimiento de estos posibilitó encontrar otros más recientes. Por las razones expresadas se
hace el reconocimiento de su crédito.
Observaciones esperadas después del
tratamiento con agua
Profase
Metafase
Anafase
Telofase
Observaciones obtenidas después del
tratamiento con agua
Observaciones esperadas después del
tratamiento con cafeína
Observaciones obtenidas después del tratamiento
con cafeína (extracto de café instantáneo)
Observaciones obtenidas después del tratamiento
con cafeína (extracto de café instantáneo)
Observaciones obtenidas después del tratamiento
con cafeína (Fencafen)
Observaciones obtenidas después del
tratamiento con nicotina (ácido nicotinico)
Observaciones obtenidas después del
tratamiento con nicotina (ácido nicotinico)
Observaciones obtenidas después del
tratamiento con nicotina (extracto de cigarrillo)
Observaciones obtenidas después del
tratamiento con nicotina (extracto de cigarrillo)
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