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DIEGO FERNANDO LOPEZ MUÑOZ
Docente de bacteriología
Master en biomedicina experimental
Medios de cultivo
MEDIOS DE CULTIVO
• Conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento
que crean condiciones
necesarias
para
el
desarrollo de M.O
• Diversidad metabólica
de los M.O enorme.
• Al igual que la variedad
de medios de cultivo
CARACTERISTICAS DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
• Se comercializan liofilizados – rehidratarlos.
• Preparación se reduce a pesar y redisolverlos.
• Seguir las instrucciones del fabricante para su
uso.
• Importante: las sustancias termolábiles se
esterilizan por filtración y luego se añaden a
los
medios
de
cultivo
previamente
esterilizados – autoclave.
CONSTITUYENTES HABITUALES
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
•
•
•
•
•
Agar
Azucares
Extractos
Peptonas
Fluidos corporales
• Sistemas
amortiguadores
• Indicadores de PH
• Agentes reductores
• Agentes selectivos
• Metales y minerales
esenciales.
AGAR
• Agente gelificante.
• Polisacárido que
se obtiene de algas
marinas
• Características
bacterias no lo
degradan.
AZUCARES
• Carbohidratos
• Fuente de carbono
para el M.O
• Los mas usados son:
• Glucosa
• Lactosa
• sacarosa
EXTRACTOS
• Son preparados de
órganos y tejidos
animales o vegetales
obtenidos de agua y
calor.
• Carne
• Levadura
• Malta
PEPTONAS
• Son
proteínas
hidrolizadas
• Se obtienen por
digestión química o
enzimática
• Estas pueden ser de
origen animal o
vegetal.
FLUIDOS CORPORALES
• Se adicionan a los
medios
para
el
cultivo de M.O.
patógenos
• Sangre completa
• Sangre desfibrinada
• Plasma/suero
SISTEMAS AMORTIGUADORES
• Son sales que se añaden
para mantener el pH
optimo.
• Dentro de un rango preestablecido.
• Favorezca crecimiento
• Mas usados son:
• Fosfatos, acetatos
INDICADORES DE PH
• Indicadores acido –
básico
• Se adicionan para
detectar los cambios
de PH.
• Mas usados:
• Rojo fenol
• Purpura
de
bromocresol
AGENTES REDUCTORES
• Sustancias que se
añaden para crear
condiciones
que
permitan el desarrollo
de los gérmenes.
• Microarofilicos
y
anaerobios.
• Cisteína y tioglicolato
AGENTES SELECTIVOS
• Sustancias como el
cristal violeta, las sales
biliares
que
a
determinadas
concentraciones actúan
como agentes selectivos
• Ejemplo : productos
químicos
y
antimicrobianos
METALES Y MINERALES
• Son esenciales para
el crecimiento de
M.O.
• Condición optima.
• Se añaden en trazas
al medio
• Los mas usados:
• Ca, Mg, Fe.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
• Solidos y líquidos
• Solidos: contienen
un
agente
solidificante.
• Se preparan en cajas
de Petri o en tubos
con la superficie del
tubo inclinado.
Medios líquidos
Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta
razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo
nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona
y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la
obtención de una suspensión bacteriana de una determinada
concentración.
Medios sólidos
Agar-agar: Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas.
Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua
caliente; una solución al 1,5% , forma un gel firme entre 32 y 39ºC
y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una
vez fundido alrededor de los 45ºC
SEGÚN SU UTILIZACIÓN
Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos
para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no
necesiten requerimientos especiales.
Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias
nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para
el crecimiento de microorganismos exigentes.
Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de
ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana.
Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo
impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se
denomina inhibidor.
Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características
bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies
Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad
específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un
microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para
asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato específico que vaya
a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado.
Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de
células a partir de un microorganismo ya aislado. Se emplean en la
obtención de vacunas, en la investigación y en la industria
Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que, por
diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan
como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el
Laboratorio de Microbiología
Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no
pueden sembrarse inmediatamente. Su utilización debe hacerse introduciendo la
torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en
un tubo). Son ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart
AGAR SANGRE
• Medio no selectivo.
• Para aislamiento y cultivo
variedad de M.O.
• Bacterias patógenas y no
patógenas.
• Mantener cepas de cultivo
almacenados – corto tiempo.
• Enriquecido con sangre de
cordero-desfibrinada.
• Determinacion
Rxn
hemoliticas.
AGAR MACCONKEY
• Selectivo y diferencial.
• Aislamiento de bacterias del
genero Gram Negativo.
• Mx. Clínicas, alimentos,
aguas, productos lácteos,
farmacéuticos.
• M.O.
tales
como
Salmonella,
Shiguella,
Escherichia coli.
• Sales biliares y cristal
violeta inhibidores Gram
positivos.
AGAR TSI
• Medio para diferenciar
enterobacterias.
• Basado
producción
de
sulfuro de hidrogeno.
• Fermentación
lactosa,
sacarosa, dextrosa.
• Interpretación:
• Roja/Amarilla
indica
fermento dextrosa.
• Amarilla/Amarilla
• Roja/Roja.
AGAR MOTILITY
• Medio de cultivo semisolido.
• Utilizado para detectar
movilidad bacteriana y
producción de Indol
• Útil
para
diferenciar
miembros de la familia
enterobacterias.
• Producción
de
acido
sulfhídrico,
Indol
y
Movilidad.
TUBOS CALDO BHI
• Brain, Heart, Infusion.
• Medio liquido
• Útil para el cultivo de
estreptococos,
pneumococos,
meningococos y otros
M.O. exigentes.
• Este
medio
se
le
adicionan otras sustancias
para
el
uso
de
hemocultivos.