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SECCION 2
Desarrollo y caracterización de un clon infectivo del Cotton leafroll dwarf virus de
utilidad para el mejoramiento del algodón asistido por biotecnología.
Delfosse, V.C1.; Casse, M.F2; Hopp, H.E1; Bonacic Kresic, I2; Ziegler-Graff, V3;Distéfano,
A.J1
1
Instituto de Biotecnología, CICVyA-INTA-Castelar. 2EEA Roque Sáenz Peña, INTA-Chaco.
de Biologie Moléculaire des Plantes (IBMP), Strasbourg, France.
[email protected], [email protected]
3Institute
El algodón es un cultivo regional clave en el NEA. La enfermedad azul es la principal
enfermedad viral del algodón y causa importantes pérdidas en el cultivo. Es producida
por el Cotton leafroll dwarf virus (CLRDV) y el virus es transmitido por el pulgón del
algodón Aphid gossypii Glover, no siendo posible su transmisión mecánica. Los
síntomas de la enfermedad son enanismo, enrollamiento de las hojas con textura
coriácea y coloración verde oscura-azulada. El genoma del CLRDV fue recientemente
secuenciado por nuestro grupo confirmando que el virus debe clasificarse como una
nueva especie dentro del género Polerovirus (familia Luteoviridae). El CLRDV posee
un genoma de RNA de simple cadena (ssRNA) positiva de 5,866 kb.
El objetivo del trabajo es desarrollar una estrategia alternativa de infección, mediante
la obtención de un clon infectivo de cDNA del virus y un método eficiente de
inoculación vía agroinfección, independizándose de la transmisión por el insecto
vector. Este sistema es importante para la evaluación de la resistencia al CLRDV en
los programas de mejoramiento genético asistido, para la selección de genes de
resistencia en el germoplasma de algodón.
Para la construcción del clon infectivo se obtuvo la secuencia completa del cDNA viral
por RT-PCR, se colocó bajo el control del promotor 35S del Cauliflower mosaic virus y
se agregó una secuencia final de polyA(15) para estabilizar el mensajero. Se secuenció
la construcción y se comprobó su transcripción en protoplastos de tabaco. Por último,
la secuencia 35S-CLRDV se clonó en el vector binario pBin19 y el vector recombinante
se introdujo en la cepa LBA4404 de Agrobacterium tumefaciens. Para probar la
funcionalidad del clon infectivo se realizaron ensayos de agroinfección en plantas de
algodón susceptibles al virus. Se comprobó que el clon infectivo es capaz de
establecer la infección, mostrando las plantas síntomas de infección por CLRDV.