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Documento 3
Guía obtención ADN
Algunas consideraciones previas:
El material biológico debe ser tan fresco como sea posible. Con la adecuada
organización, todas las etapas pueden completarse en cerca de 55 minutos.
Cuando se realiza extracto de ADN, podemos esperar tres resultados
básicos.
I.- Ningún ADN II.- El ADN parece una pelusa disgregada III.-El ADN aparece
como hilos delgados.
Aunque el ADN como hilos enrollados son los más impresionantes, el que está
disgregado también permite mostrar que ADN está presente.
Los aspectos básicos en la extracción de ADN son:
 Para que la célula se abra se debe destruir la bicapa de fosfolípidos, esto se
logra con el detergente, la sal y la acción de la batidora.
 La célula se debe romper para soltar el núcleo y éste también debe abrirse
para soltar el ADN. A estas alturas el ADN debe protegerse de enzimas que lo
degradarán produciendo sólo pequeños fragmentos.
 Una vez que se obtiene el ADN debe precipitarse con alcohol.
 Las enzimas ADNasas disgregan (rompen) el ADN. Guardar las soluciones en
refrigeración retarda la acción de esta enzima.
 La papaína es una enzima que ayuda a degradar las proteínas asociadas al
ADN y que pueden contaminar su extracción. El jugo de la papaya y el jugo de
la piña contiene esta enzima.
 El etanol es un alcohol que se usa para precipitar el ADN. En agua, el ADN es
soluble, pero cuando está en etanol, se enrolla y precipita dejando atrás los
otros componentes de la célula que no son solubles en él
Materiales:
1 taza de flor coliflor – 2 papayas maduras – detergente líquido (lavaloza de uso
doméstico) – solución de NaCl al 4% sin yodo – etanol – azul de metileno –
indicador rojo fenol – 2 gotarios – 2 vasos de precipitado de 50 ml – colador –
batidora – asa de alambre – sistema de refrigeración – 4 pipetas – 1 portaobjetos
– 1 cubreobjetos – 1 microscopio óptico.
Procedimiento
Corte y lleve a una batidora 1 taza de flor de coliflor cruda. Agregue 100 ml. de
solución salina. Mezcle en la batidora por 1 minuto y a alta velocidad. Pase la
mezcla a un vaso de precipitado, a través de un colador de malla muy fina.
Agregue 5 ml. de detergente. Mezcle sin formar espuma. (Solución celular).
Obtenga jugo filtrado de papaya madura y fresca. Debe ser molida con cáscara y
pepas. (Solución enzimática).
Ponga en un tubo de ensayo 5 ml. de solución celular más 5 ml. de solución de
enzima. Mezcle suavemente, sin agitar. Deje reposar por 5 a 10 minutos.
Agregue 6 ml. de etanol lentamente, derramándolo por la pared del tubo de
ensayos, sin mezclar ni agitar. Permita que se forme una capa de alcohol (etanol)
por sobre el filtrado. Repose la mezcla por 2 a 3 minutos.
El ADN flotará en el alcohol. Pasee, como revolviendo lentamente, el asa de
alambre por la interfase que se forma en la frontera entre el filtrado y el alcohol. Si
ha llegado al resultado esperado, verá como unos muy delgados hilos blancos se
enrollan en la varilla. ESOS HILOS SON ADN.
Tome una muestra de las fibras de ADN y deposítelas sobre un porta objetos, de
modo que quede dispersado y tan delgado como sea posible.
Tiña durante unos minutos con azul de metileno. Cubra y observe al microscopio.
Coloque una parte del ADN logrado sin teñir, en un tubo de ensayo limpio con 10
ml. de solución de cloruro de sodio al 4%. Agregue cinco gotas del indicador rojo
fenol a la solución de ADN. El color rosa oscuro resultante se debe a la presencia
de ADN.
Todos los tejidos producen ADN, unos un poco más que otros. Un problema que
constantemente persiste, ocurre al agregar el alcohol, normalmente se vierte
demasiado rápido. En lugar de formar dos capas distintas, se mezclan ambas.
Una vez que eso pasa, no hay mucho que pueda hacerse.