Download Presentado por: Asesor

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA
Y BIOQUÍMICA
Actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema
formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de
Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones.
.
Tesis para optar el Título Profesional de Químico Farmacéutico
Presentado por:
Br. Esteban Carhuallanqui, Vilma Vanessa.
Br. Rodríguez Castro, Enma Yicet.
Asesor:
Dra. JUANA ELVIRA CHÁVEZ
LIMA – PERÚ
2016
DEDICATORIA
Esta tesis está dedicada principalmente a Dios por darme la
vida, guiar mi camino espiritual y profesional en esta vida.
A mis padres Estanislao Rodriguez y Justina Castro por su
infinito amor y apoyo constante por enseñarme valores y
motivarme con su espíritu luchador por mejorar cada día.
Ustedes son parte de este logro, y su esfuerzo y empeño será
reflejado en esta tesis.
A mis hermanos: Rosa, Jesús, Antonio, Marcos y Cristina por
ser mi fuerza y motivo para salir adelante y demostrarles que
todo con perseverancia es posible de la mano de Dios.
A mis profesores por enseñarme, aconsejarme e instruirme en
el camino del estudio. Por su apoyo y comprensión en los
momentos más duros sin pedir nada a cambio.
Br. Rodríguez Castro, Enma Yicet.
DEDICATORIA
Doy gracias a Dios por darme la vida, sabiduría y entendimiento
y por haber logrado uno de mis objetivos.
Esta tesis está dedicada principalmente a mis padres, Rufino
Esteban Humareda por darme la vida; Vilma Carhuallanqui
Condor por ser siempre una mujer ejemplar y tenerme
tolerancia, paciencia y brindarme sus consejos sabios.
A mis hermanos Randy y Jhordy y decirles que el futuro de uno
está en sus manos.
A Jorge Rodríguez García por estar conmigo siempre
acompañándome a escalar cada peldaño de mi vida y que mis
logros también son sus logros.
A mis profesores por brindarnos su enseñanza y conocimientos
en nuestra vida profesional.
Br. Esteban Carhuallanqui, Vilma Vanessa.
RESUMEN
El presente estudio tuvo como objetivo determinar la actividad analgésica del extracto
y antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las
hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. La
planta se recolecto en el departamento de Junín, fue macerada por 7 días en
etanol/agua (70:30). Se realizó la prueba de solubilidad y el análisis cualitativo. Para
determinar la actividad analgésica se empleó el modelo de contorsiones abdominales
por ácido acético glacial al 0,8%. (Koster y Col. Modificado 1959), se utilizaron 64
ratones y los grupos evaluados fueron: control negativo (agua destilada), control
positivo (ácido acético), extracto al 50, 100 y 200 mg/Kg y se comparó con
paracetamol 300 mg/Kg, tramadol 40 mg/Kg, Oxicodona 20 mg/Kg. Para determinar
el efecto antiinflamatorio se empleó el método de edema auricular por un agente
irritante xilol al 6% diluido en acetona en el pabellón de la oreja del ratón (Cyted,
1995). Se usaron 42 ratones y los grupos de estudios fueron: blanco (xilol al 6%),
crema al 5, 10 y 20%, comparando con el diclofenaco 1% en gel, clobetazol al 0,05%
en crema. Se comprobó que existe actividad analgésica del extracto y
antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las
hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones.
Palabras clave: Fosberg, “Pan de árbol”, actividad analgésica, antiinflamatoria.
SUMMARY
This study aimed to determine the analgesic and anti-inflammatory activity of the extract
of a cream formulated on the basis of hydro-alcoholic extract from fresh leaves of
breadfruit (Park.) Fosberg "bread tree" in mice. The plant was collected in the
department of Junin, it was macerated for 7 days in ethanol / water (70:30). The
solubility test and qualitative analysis. To determine the analgesic activity model writhes
by glacial acetic acid 0.8% was used. (Col. Modified Koster 1959), 64 mice were used
and were evaluated groups: negative control (distilled water), positive control (acetic
acid) extract 50, 100 and 200 mg / kg and compared with 300 mg paracetamol / kg, 40
mg tramadol / Kg, Oxycodone 20 mg / Kg. To determine the anti-inflammatory effect the
method of ear edema was employed by an irritant xylol 6% diluted in acetone in the
pinna of the mouse (Cyted, 1995). The 42 mice were used and groups studies were:
white (xylol 6%), cream 5, 10 and 20%, compared to 1% diclofenac gel clobetazol
0.05% cream. It was found that there analgesic and anti-inflammatory activity of the
extract of a cream formulated on the basis of hydro-alcoholic extract from fresh leaves
of breadfruit (Park.) Fosberg "bread tree" in mice.
Keywords: Fosberg, "bread tree", analgesic, anti inflammatory.
INDICE GENERAL
Pág.
RESUMEN
SUMMARY
I.
INTRODUCCIÓN
1.1.
Planteamiento del problema
1
1.2.
Formulación del problema
2
1.3.
Justificación del problema
2
1.4.
Objetivos
2
1.5.
1.6.
II.
1
1.4.1. Objetivo General
2
1.4.2. Objetivos Específicos
3
Variables
1.5.1. Variable dependiente
3
1.5.2. Variable independiente
3
Hipótesis
3
MARCO TEÓRICO
4
2.1.
Antecedentes de la Investigación
4
2.1.1. Antecedentes internacionales
4
2.1.2. Antecedentes nacionales
5
Bases teóricas
7
2.2.
2.2.1. Inflamación
2.2.2. Dolor
11
2.2.3. Piel
16
2.2.4. Estudio botánico de la especie vegetal Artocarpus altilis
(Park.) Fosberg “Pan de árbol”
2.2.5. Flavonoides
18
24
III.
PARTE EXPERIMENTAL
28
3.1.
Diseño metodológico
28
3.1.1. Tipo de investigación
28
3.1.2. Diseño de la investigación
28
Materiales
28
3.2.1. Materiales para el estudio cualitativo
28
3.2.2. Materiales para el estudio farmacológico
29
3.2.3. Material biológico
29
3.2.4. Material vegetal
29
Muestra
29
3.3.1. Muestra vegetal.
29
3.3.2. Muestra biológico.
29
Métodos
30
3.2.
3.3.
3.4.
3.4.1. Preparación del extracto hidroalcohólico de Artocarpus
IV.
altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.
30
3.4.2. Prueba de solubilidad y análisis cualitativo.
30
3.4.3. Análisis farmacológico
31
RESULTADOS
4.1.
Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas
frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.
4.2.
4.3.
34
34
Análisis Cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas
frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.
35
Análisis estadístico.
36
4.3.1. Actividad Analgésica
37
4.3.2. Actividad Antiinflamatoria
42
V.
DISCUSIÓN
45
VI.
CONCLUSIONES
49
VII.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
50
VIII.
ANEXO
55
INDICE DE FIGURAS
Pág.
Figura 1.
Reacción de la ciclooxigenasa
9
Figura 2.
Conversión de la PGG2 en PGH2; reacción de la PG
9
hidroperoxidasa (PGH sintasa).
Figura 3.
Síntesis del TX2 a partir de PGH2
9
Figura 4.
Ruta principal de la biosíntesis de las prostaglandinas.
10
Figura 5.
Sitios de acción de inhibidores de la síntesis de prostaglandina
11
Figura 6.
Escala analgésica del dolor según la O.M.S.
13
Figura 7.
Esquema de las capas de la piel
17
Figura 8.
Estructura química de un flavonoide
24
Figura 9.
Ruta de la biosíntesis de flavonoides en las plantas
26
INDICE DE CUADROS
Pág.
Cuadro 1.
Uso del paracetamol analgésico no opiáceo.
15
Cuadro 2.
Uso de los analgésicos opiáceos
16
Cuadro 3.
Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas
frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.
Cuadro 4.
Análisis Cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas
frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.
Cuadro 5.
41
Porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas de los
ratones tratados.
Cuadro 9.
39
Prueba de post hoc de Tukey de las arcadas abdominales en
ratones.
Cuadro 8.
37
Prueba de post hoc de Tukey de las contorsiones abdominales
en ratones.
Cuadro 7.
35
Evaluación del promedio del número de Arcadas y contorsiones
abdominales inducida con ácido acético 0,8%.
Cuadro 6.
34
Prueba de post hoc de Tukey de la actividad antiinflamatoria
42
44
INDICE DE GRÁFICOS
Pág.
Gráfico 1.
Inhibición del número de contorsiones inducida con ácido
acético 0,8% con diferentes tratamientos.
Gráfico 2.
Inhibición del número de arcadas inducida con ácido acético
0,8%.
Gráfico 3.
38
40
Porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas
tratadas con la crema formulada a base del extracto
hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis
(Park.) Fosberg “Pan de árbol” frente a fármacos de referencia
en 4 horas.
43
ABREVIATURAS
Park: Parkinson
PGs: Prostaglandinas
COXs: Ciclooxigenasas
PGI2: Prostaciclina
LTs: Leucotrieno
PAF: Factor activador plaquetario
LPS: Lipopolisacarido bacteriano
PGG2: Prostaglandina G2
PGH2 : Prostaglandina H2
TXA2 : Tromboxano
AINE: Antiinflamatorio no esteroideo
msnm: Metros sobre el nivel del mar
ECA: Enzima convertidora en angiotensina
PEP: Fosfoinolpiruvato
PAL: Fenilalanina amonioliasa
CNPB: Centro Nacional de Productos Biologicos
INS: Instituto Nacional de Salud
Ex: Extracto
EtOH: Etanolico
AN: Antinociceptivo
COX-2: Ciclooxigensa - 2
OA: Osteoartritis
AR: Artritis reumatoide.
I.
1.1.
INTRODUCCIÒN
Planteamiento del problema:
La búsqueda de principios activos para la elaboración de medicamentos
ocupa un lugar importante en la investigación. El Perú es un país con una
amplia diversidad de recursos vegetales, de las cuales muchas poseen
propiedades terapéuticas no comprobadas científicamente. Estas plantas
medicinales podrían ser utilizadas como complemento alternativo a diversas
patologías; como para el tratamiento del dolor e inflamación.
El dolor según la International Asociation for the Study of Pain (IASP) tiene
una alta prevalencia y un gran impacto individual, familiar, laboral, social y
económico, este aumenta con la edad llegando un 42,6% en mayores de 65
años, que padecen de dolor en las extremidades inferiores, también los
jóvenes son más frecuentes de padecer dolores. Así mismo, la inflamación
es una respuesta ante una agresión externa que está relacionado con el
dolor.
Se considera que el dolor, la fiebre y la inflamación, constituyen síntomas
cardinales de las enfermedades, lo que ha propiciado la búsqueda
sistematizada de sustancias que sean capaces de aliviar o desinflamar estas
manifestaciones del organismo por alguna alteración fisiológica; como una
experiencia desagradable que alerta al individuo cuando ocurre un daño
tisular causado por estímulos químicos, térmicos o mecánicos.1
La presente investigación tiene como finalidad incentivar a la investigación de
plantas medicinales y demostrar el usos tradicional en el dolor e inflamación
de la especie vegetal Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”, a la
que se atribuyen tradicionalmente muchas propiedades medicinales que aún
no han sido estudiadas.
Uno de los objetivos fundamentales de un Químico Farmacéutico es
contribuir con la terapia del dolor e inflamación para mejorar la calidad de
vida de las personas, por medio de la atención farmacéutica e investigación.
Por lo que, en este trabajo se plantea demostrar el uso tradicional
científicamente de la actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de
una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas
de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones.
1
1.2.
Formulación del problema
¿Existe Actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema
formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de
Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones?
1.3.
Justificación del problema:
El presente trabajo de investigación pretende demostrar el uso tradicional
científicamente de la especie vegetal Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan
de árbol”, que presenta actividad farmacológica como: Analgésico y
antiinflamatorio. Así mismo, buscar un producto natural que disminuya las
complicaciones del dolor e inflamación, presentes en nuestra sociedad.
Existen muchos trabajos que han evaluado la actividad antiinflamatoria en
extractos vegetales como en metabolitos secundarios aislados de fuentes
naturales a través de diferentes modelos farmacológicos tanto in vivo como in
vitro.2 Los flavonoides, metabolitos aromáticos, poseen una gran variedad de
efectos biológicos en los que sobresale la actividad antiinflamatoria.3
Con los resultados obtenidos por medio de esta investigación, se podrá
demostrar científicamente su uso tradicional como alternativa en el
tratamiento para el dolor e inflamación, debido a su eficacia, menos
reacciones adversas y costo relativamente bajo a un fármaco convencional a
pesar de que sus compuestos biológicamente activos son desconocidos.
1.4.
Objetivos
1.4.1. Objetivo General:
Determinar la actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una
crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas
de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones.
2
1.4.2. Objetivos Específicos:

Realizar el análisis cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas
frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.

Evaluar la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las
hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” a
diferentes concentraciones (50, 100 y 200 mg/Kg) en ratones.

Evaluar la actividad antiinflamatoria de una crema formulada a base
del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis
(Park.) Fosberg “Pan de árbol” a diferentes concentraciones (5, 10, 20
%) en ratones por vía tópica.
1.5.
Variables
1.5.1. Variable dependiente:

Actividad analgésica y antiinflamatoria.
1.5.2. Variable independiente:

Extracto hidroalcohólico de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan
de árbol”
1.6.
Hipótesis

El extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis
(Park.) Fosberg “Pan de árbol” tiene actividad analgésica y la crema
formulada actividad antiinflamatoria en ratones.
3
II.
2.1.
MARCO TEORICO
Antecedentes de la Investigación:
2.1.1. Antecedentes internacionales
Pastorello M, Ciangherotti C, Varela M, et al. Venezuela en el año
2012.4 “Actividad antiinflamatorio y analgésico del extracto acuoso de la
raíz de Ruellia tuberosa L.” Objetivo: Evaluar el posible efecto
antiinflamatorio y analgésico del extracto acuoso de la raíz de Ruellia
tuberosa L. en animales de experimentación. Método: Para determinar el
efecto Antiinflamatorio de la raíz de Ruellia tuberosa L, se empleó el
método de inducción del edema por carragenina en la pata trasera de la
rata. Para evaluar el posible efecto analgésico se empleó el método de
inducción de dolor visceral a través de la administración de un irritante
químico ácido acético glacial 0,6%. Resultado: Ruellia tuberosa L. Inhibió
el desarrollo de edema de la pata de la rata inducido por carragenina en
un 38,7 y 31,5% a la 1 y 3 h, respectivamente. Asimismo, se observó una
disminución en el número de contorsiones inducidas por el ácido acético
glacial al 0,6% en ratones, con un efecto máximo de 85,7% de reducción
a la dosis de 50 mg/Kg, superando al control positivo de ácido acetil
salicílico (64,5%). Conclusión: El presente estudio permite demostrar que
el extracto acuoso de la raíz de Ruellia tuberosa L. Posee una potente
actividad analgésica y antiinflamatoria en animales de experimentación.
Sánchez N, Bu Wong M, Pérez H, et al. En la Habana, Cuba. En el
año 2012.5 “Efecto del zumo de Morinda citrifolia L. (noni) en modelos de
analgesia”. Objetivo: Evaluar el efecto del zumo de Morinda citrifolia L.
(noni) en diferentes modelos de analgesia. Método: Se utilizó el modelo
de irritación peritoneal por ácido acético glacial al 0,6%, administrado por
vía intraperitoneal a ratones OF1 y se cuantifico durante 30 minutos, el
número de contorsiones o estiramientos. Además, se utilizó el modelo del
plato caliente y de la retirada de la cola. Resultado: El ensayo de
contorsiones inducida por ácido acético glacial al 0,6%, disminuyeron el
número de contorsiones o estiramientos de manera dependiente de la
dosis, pero significativo con la dosis de 900 y 1800 mg/Kg. En los
4
modelos de plato caliente y de retirada de la cola, solo la dosis más alta
prolongó de manera estadísticamente significativa. Conclusión: Se evaluó
el efecto analgésico del zumo de Morinda citrifolia L. (noni) en tres
modelos.
Adeyemi O, Aiqbe F, Uyaiabasi N. En Nigeria, en el año 2011. 6
“Actividad analgésica y antiinflamatoria del extracto acuoso del tallo y
hojas de Asystasia gangetica (Linn) T. Anderson”. Objetivo: Evaluar la
Actividad analgésica y antiinflamatoria del extracto acuoso del tallo y
hojas de Asystasia gangetica (Linn) T. Anderson. Método: El efecto
analgésico del extracto acuoso del tallo y hojas se evaluó en ratas y
ratones utilizando el modelo de las contorsiones inducidas por ácido
acético glacial, el método de la retirada de la cola y el modelo de placa
caliente. Su efecto antiinflamatorio se evaluó en ratas utilizando el modelo
de edema plantar inducido por carragenina y el modelo de edema en las
orejas de los ratones inducido por xileno. Resultado: El extracto acuoso
del tallo y hojas redujo el número de retorcimientos en la prueba de
contorsiones inducido por ácido acético. El extracto (200 mg/Kg) produjo
un efecto inhibidor significativo (p <0,05) comparable a la producida por 1
mg/Kg de dexametasona del modelo de edema en la oreja de ratón
inducido por xileno. Conclusión: El extracto acuoso del tallo y hojas de
Asystasia gangetica (Linn) T. Anderson, posee actividad analgésica y
antiinflamatoria.
2.1.2. Antecedentes nacionales
Condeso S, Cuba C, Del Águila C, et al. Perú en el año 2010. 7
“Exploración de la actividad Analgésica y Antiinflamatoria de las hojas de
Maytenus Macrocarpa (chuchuhuasi) mediante el Test de Formalina”.
Objetivo: Determinar la actividad analgésica y antiinflamatoria en ratas
albinas, mediante el Test de Formalina. Método: Se administró formalina
en la pata trasera de la rata, se observó las conductas de lamidas, y
conteo del tiempo en dos fases. Resultado: Se observó un periodo de
latencia máxima y tiempo de lamidas mínimo en la fase uno, de las hojas
de Maytenus Macrocarpa (chuchuhuasi) a dosis de 750 mg/Kg, con 1000
mg/Kg fue de 126 y 8,5 segundos respectivamente. Conclusión: Se
5
confirmó la acción analgésica y antiinflamatoria de las hojas de Maytenus
Macrocarpa (chuchuhuasi), a dosis de 750 y 1000 mg/Kg mediante el test
de Formalina en ratas albinas, siendo más eficaz a dosis de 750 mg/Kg.
Amorós A, García C, Hernández C, Sandoval A, et al. Perú en el año
2010.8 “Evaluación del Efecto Analgésico y Antiinflamatorio del Pan de
árbol “Artocarpus Altilis” en animales de experimentación”. Objetivo:
Evaluar los efectos antiinflamatorios y analgésicos en animales de
experimentación. Método: Para el Efecto Antinflamatorio usaron 50 ratas
albinas machos de 200 a 250 g de peso. Para el Efecto analgésico: Se
emplearon 50 ratones. Se utilizó la técnica de contorsiones abdominales.
Las dosis empleadas fueron de 500, 1000 y 1500 mg/Kg para ambas
actividades. Resultado: El mejor Efecto Analgésico se observó a dosis de
1500 mg/Kg en relación al control. La dosis de 1500 mg/Kg presentó un
buen efecto antiinflamatorio a partir de la primera hora de administración
vía oral, superior a la observada con el Diclofenaco. Conclusión: Pan de
árbol “Artocarpus altilis” tiene Efecto Analgésico a dosis dependiente y
Efecto Antiinflamatorio superior al observado con el Diclofenaco a dosis
de 1500 mg/Kg.
Vargas C. En Lima, Perú. En el año 2007.9-10 “Estudio de la Actividad
cicatrizante y Antiinflamatoria del extracto alcohólico de las hojas de
Senna reticulata (Willd) H. Irwin & barneby (Retama)”. Objetivo:
Determinar la actividad antiinflamatoria y cicatrizante en el extracto
etanólico de las hojas de Senna reticulata (Willd) H. Irwin & barneby
“Retama”. Método: Para la actividad Antiinflamatorio, se utilizó el modelo
de edema auricular inducido por xilol (Cyted, 1995). Para la Actividad
Cicatrizante se empleó el modelo de lesión inducida en el lomo de ratón
(vaisberg y col, 1989). Resultado: El análisis de varianza del efecto
antiinflamatorio en ratones al aplicar la crema con el extracto etanólico vía
tópica, no presenta diferencias significativas entre las medias (p=0,646
>0,05) y según la prueba de Tukey para la actividad cicatrizante muestra
diferencias significativas. Conclusión: El extracto etanólico de las hojas de
Senna reticulata (Willd) H. Irwin & barneby “Retama”, no presenta
actividad antiinflamatoria significativa por vía tópica. La crema con el
6
extracto etanólico al 20% de las hojas de “Retama”, presenta actividad
cicatrizante.
2.2.
Bases teóricas:
2.2.1. Inflamación.11
La inflamación fue descrita por Celsius en el año 10 antes de Cristo como
enrojecimiento e inflamación con calor y dolor. El proceso inflamatorio
puede ser provocado por numerosos estímulos como agentes biológicos,
isquemia, interacciones antígeno - anticuerpo, lesiones térmicas o
fisicoquímicas. Esta respuesta está acompañada con tumefacción
(edema), rubor, calor, dolor espontaneo a la palpación y desorden de la
función tisular. La inflamación ocurre en tres fases distintas, por diferentes
mecanismos:
1. Una fase transitoria aguda, caracterizada por vasodilatación local,
hiperemia activa e incremento en la permeabilidad capilar.
2. Una fase subaguda tardía, visiblemente caracterizada por un periodo
de hiperemia pasiva, infiltración de leucocitos y fagocitos.
3. Una fase proliferativa crónica, en el cual ocurre degeneración de
tejidos, lesión endotelial y fibrosis.12
La inflamación es una respuesta a un estímulo específico, mediada por
diferentes señales bioquímicas y fisiológicas. Los mediadores pertenecen
a diferentes clases químicas como aminas biógenas (histaminas,
serotonina), proteínas y péptidos (enzimas hidrolíticas, citoquinas,
factores de crecimiento, factores activadores de colonia, factores de
complemento, anticuerpos, quininas), especies reactivas de oxigeno
(anión superóxido, hidroperóxido, radicales hidroxilos), y lípidos (factores
activadores de plaquetas, prostanoides, leucotrienos). Estos mediadores
inician, mantienen, agravan y modulan el curso inflamatorio.11
2.2.1.1.
Las Prostaglandinas (PGs).11
Son una mezcla de ácidos liposolubles, conocidos por las siglas PG
seguida de la letra E, F, A o B y un índice numérico que puede ser
seguido de una letra griega. Las prostaglandinas son reguladores bien
conocidos del crecimiento de la célula. Se sintetizan a partir del ácido
7
araquidónico
por
la
acción
de
diferentes
enzimas
como
las
ciclooxigenasas (COXs).13
La vía por la cual el ácido araquidónico se metaboliza a eicosanoides
depende del tejido, del estímulo y de la presencia de inductores o
inhibidores endógenos y farmacológicos.14
Las
prostaglandinas
constituyen
una
parte
de
productos
fisiológicamente activos del metabolismo del ácido araquidónico,
permitio el descubrimiento del tromboxano A2 (TXA2), de la prostaciclina
(PGI2) y de los leucotrienos (LTs).15
El sistema enzimático central de la biosíntesis de prostaglandinas es la
prostaglandina G/H sintasa (PGS), bifuncional que cataliza la ciclación
oxidativa de los ácidos grasos poliinsaturados. El ácido araquidónico
proviene de los fosfolípidos de membrana por acción de la hidrolasa
fosfolipasa A2. Este paso de rotura es el paso limitante de velocidad en
la síntesis de prostaglandinas, y ciertos agentes que estimulan la
producción de prostaglandinas lo hacen estimulando la actividad de la
fosfolipasa A2. Existen dos formas de ciclooxigenasa (COX) o
prostaglandina G/H sintasa (PGS). La COX - 1, o PGS - 1, es una
enzima constitutiva que se encuentra en la mucosa gástrica, las
plaquetas, el endotelio vascular y el riñón. La COX - 2, o PGS - 2 es
inducible, y se genera en respuesta a la inflamación. La COX - 2 se
expresa principalmente en macrófagos activados y en monocitos
cuando son estimulados por el factor activador plaquetario (PAF), la
interleuquina - 1, o el lipopolisacarido bacteriano (LPS), y en las células
del musculo liso, células epiteliales ,endoteliales y neuronas. La
inducción de la PGS - 2 es inhibida por los glucocorticoides. Las dos
formas de PGS catalizan la oxigenación del ácido araquidónico a PGG 2
como la reducción de la PGG2 a PGH2.16 Los glucocorticoides atraviesan
la membrana citoplasmática y interactúa con los receptores específicos
en el citoplasma, produciendo un cambio en la conformación y
facilitando su translocación al interior del núcleo celular afectando la
transcripción de genes, por ende su acción no es inmediata y su efecto
se observa en un tiempo mayor después de su administración.
8
Figura 1. Reacción de la ciclooxigenasa.16
Figura 2. Conversión de la PGG2 en PGH2; reacción de la PG
hidroperoxidasa (PGH sintasa).16
Las prostaglandinas tienen una vida media muy corta. Poco después de su
liberación son captadas rápidamente por células en donde son inactivadas, bien
por oxidación del grupo hidroxilo en C-15 bien por β-oxidación a partir del
extremo carboxilo de la cadena.16
Figura 3. Síntesis del TXB2 a partir de PGH2.16
9
Ó
Figura 4. Ruta principal de la biosíntesis de las prostaglandinas.16
10
La producción de prostaglandina es inhibida por agentes antiinflamatorios
esteroideos y no esteroideos. Los agentes no esteroideos (NSAID), bloquean la
producción de prostaglandinas al inhibir irreversiblemente a la enzima
ciclooxigenasa.
hidrocortisona,
Los
fármacos
prednisona
y
antiinflamatorios
betametasona,
esteroideos,
bloquean
la
como
la
liberación
de
protaglandinas al inhibir la actividad de la fosfolipasa A 2, con lo cual interfieren
en la movilización del ácido araquidónico. El paso limitante de la velocidad de la
síntesis de prostaglandinas es la liberación de ácido araquidónico de los
depósitos de los fosfolípidos de membrana en respuesta a la activación de la
fosfolipasa A2.16
Inhibido por los
antiinflamatorios
esteroides
Fosfolípidos
Fosfolipasa A2
Acido araquidónico
Ciclooxigenasa
Prostaglandinas
Inhibido por los
antiinflamatorios
no esteroideos.
Figura 5. Sitios de acción de inhibidores de la síntesis de prostaglandinas.16
2.2.2. Dolor.17
La Asociación Internacional para el Estudio del Dolor define al dolor como
"una experiencia sensitiva y emocional desagradable, asociada a una
lesión tisular real o potencial". La percepción del dolor consta de un
sistema neuronal sensitivo (nocioceptores) y unas vías nerviosas
aferentes que responden a estímulos nocioceptivos tisulares; la
nociocepción puede estar influida por otros factores (psicológicos).
11
2.2.2.1.
Tipos de Dolor.17
1. Según su duración:
a. Agudo: Limitado en el tiempo, con escaso componente psicológico.
Constituyen la perforación de víscera, el dolor neuropático y el dolor
musculo esquelético en relación a fracturas patológicas.
b. Crónico: Ilimitado en su duración, se acompaña de componente
psicológico. Es el dolor típico del paciente con cáncer.
2. Según su patogenia:
a. Neuropático: Producido por estímulo directo del sistema nervioso central
o por lesión de vías nerviosas periféricas. Se describe como punzante,
quemante, acompañado de parestesias y disestesias, hiperalgesia,
hiperestesia y alodinia. Ejemplo: La plexopatía braquial o lumbo - sacra
post - irradiación, la neuropatía periférica post - quimioterapia y post radioterapia y la compresión medular.
b. Nocioceptivo: Este tipo de dolor es el más frecuente y se divide en
somático y visceral.
c. Psicógeno: Interviene el ambiente psico - social que rodea al individuo.
Es típico la necesidad de un aumento constante de las dosis de
analgésicos con escasa eficacia.
3. Según la localización:
a. Somático: Se produce por la excitación anormal de nocioceptores
somáticos superficiales o profundos (piel, musculo esquelético, vasos,
etc). Es un dolor localizado, punzante y que se irradia siguiendo
trayectos nerviosos. El más frecuente es el dolor óseo producido por
metástasis óseas. El tratamiento debe incluir un antiinflamatorio no
esteroideo (AINE).
b. Visceral: Se produce por la excitación anormal de nocioceptores
viscerales. Este dolor es continuo y profundo. Asimismo puede
irradiarse a zonas alejadas al lugar donde se originó. Frecuentemente
se acompaña de síntomas neurovegetativos. Son ejemplos de dolor
12
visceral los dolores de tipo cólico, metástasis hepáticas y cáncer
Pancreático. Este dolor responde bien al tratamiento con opioides.
4. Según el curso:
a. Continuo: Persistente a lo largo del día y no desaparece.
b. Irruptivo:
Exacerbación
transitoria
del dolor
en
pacientes bien
controlados con dolor de fondo estable.
5. Según la intensidad:
a. Leve: Puede realizar actividades habituales.
b. Moderado: Interfiere con las actividades habituales. Precisa tratamiento
con opioides menores.
c. Severo: Interfiere con el descanso. Precisa opioides mayores.
6. Según la farmacología:
a. Responde bien a los opiáceos: Dolores viscerales y somáticos.
b. Parcialmente sensible a los opiáceos: Dolor óseo (además son útiles los
AINE) y el dolor por compresión de nervios periféricos (es conveniente
asociar un esteroide).
c. Escasamente sensible a opiáceos: Dolor por espasmo de la
musculatura estriada y el dolor por infiltración - destrucción de nervios
periféricos (responde a antidepresivos o anti convulsionantes).
Figura 6. Escala analgésica del dolor según la O.M.S.17
13
Pacientes con dolor leve inician tratamiento con fármacos como el
Paracetamol, ácido acetilsalicílico u otros analgésicos antiinflamatorios no
esteroideos (primer escalón). Estos agentes presentan techo terapéutico:
Una vez alcanzada la dosis máxima recomendada, el incremento de la
dosis no produce mayor analgesia. La Sociedad Americana del Dolor
recomienda que todos los regímenes analgésicos deben incluir un
fármaco no opioide aunque el dolor sea suficientemente intenso como
para añadir un analgésico opioide.17
El dolor moderado se puede beneficiar de un tratamiento con opioides
menores como la codeína. Se utilizan conjuntamente con analgésicos no
opioides, ya que pueden ser aditivos o sinergistas. Los opiáceos actúan a
través de receptores en el sistema nervioso central, mientras que los
analgésicos no opioides ejercen su acción en la periferia (segundo
escalón).17
Los enfermos con dolor severo necesitan tratamiento con opioides
mayores como la morfina, fentanilo y la oxicodona de liberación retardada
(tercer escalón). Los agonistas puros (morfina, metadona y fentanilo) no
tienen techo analgésico a diferencia de los agonistas parciales
(buprenorfina).17
Cuando no se obtiene una analgesia adecuada con opioides sistémicos,
debe considerarse el cuarto escalón que incluye procedimientos como la
analgesia continua espinal o epidural, bloqueo de nervios periféricos,
bloqueo simpático, etc.17
Los coadyuvantes aumentan la eficacia analgésica, se utilizan en el
manejo de síntomas concurrentes que exacerban el dolor y para tipos
específicos de dolor como el neuropático.17
2.2.2.2.
Analgésicos no opiáceos.18
Son fármacos que se utilizan para el dolor leve y moderado. A pesar de
que solamente algunos están indicados en analgesia, todo los AINES
presentan acciones antiinflamatorias, analgésicas y antipiréticas, en
mayor o menor grado, a dosis terapéuticas no han demostrado
tolerancia y tienen efecto techo antialgico, por lo que aunque se
14
aumente la dosis por encima de las máximas, no se obtiene mayor
analgesia y si se potencian sus efectos tóxicos.19
Como el paracetamol: Inhiben la síntesis de eucosanoides inhibiendo la
enzima ciclooxigenasa responsable para la transformación del ácido
araquidónico en PGG2 etapa indispensable en la formación de
prostaglandinas, prostaciclina y tromboxano.19,20
El Paracetamol es un analgésico para aliviar dolores musculares,
articulares, menstruales, de espalda, garganta, cefaleas y combate la
fiebre, aunque a diferencia del ácido acetilsalicílico, no posee
propiedades antiinflamatorias. En dosis adecuadas no suele presentar
efectos secundarios. No altera la coagulación, ni la mucosa gástrica y
por lo general, no produce reacciones alérgicas. No obstante, existen
contraindicaciones para ciertos casos. Una sobredosis de paracetamol
puede provocar daños importantes en el hígado, incluso puede llegar a
ser mortal.20
Cuadro 1. Uso del paracetamol analgésico no opiáceo.21
Analgésico
Dosis
habitual
Paracetamol 500
1000 mg
Intervalo
–
4-6
horas
Dosis
máxima
Ventajas
4000 mg No tiene actividad
antiinflamatoria.
/ día
No causa gastropatía
ni nefropatía.
A dosis habitual no
es hepatotóxico.
2.2.2.3.
Analgésicos opioides.21
Los opiáceos son compuestos derivados del opio, del cual se ha aislado
más de 20 alcaloides y el más activo es la morfina. La morfina y otros
alcaloides naturales del opio han dado lugar a una gran cantidad de
compuestos que comparten total o parcialmente sus propiedades
analgésicas.
Los opiáceos actúan interaccionando con receptores situados en el
sistema nervioso central como en el periférico, pertenecientes al
15
sistema opioide endógeno que fisiológicamente a través de péptidos
opioides
endógenos,
regulan
la
transmisión
nociceptiva.
analgésicos opioides son considerados medicamentos
Los
altamente
efectivos para el control del dolor agudo, crónico no maligno y crónico
oncológico.22
Cuadro 2. Uso de los analgésicos opiáceos.21
Opioide
Tramadol
Dosis
T.
inicial
máxima
50
Clorhidrat mg
Intervalo
- 100 2 horas
vía 1 hora
Reacciones Adversas
medicamentosas.
6 - 8 horas
Menor
constipación
6 horas
sedación,
y
deprime
o
oral.
escasamente el centro
(opioide
100 - 150
respiratorio
débil).
mg
tolerancia
vía
parenteral.
lentamente
y
crea
más
que
la
morfina.
Cardiotoxicidad:
Aumenta la frecuencia
cardiaca y la presión
arterial. A altas dosis
deprime
la
contractilidad.
T. máximo: Tiempo en que tarda en alcanzar la concentración máxima.
2.2.3. Piel 23
La piel es el órgano sensorial primario encargado de registrar el dolor, la
temperatura y la presión ejercida en la superficie corporal, protege a los
tejidos y órganos situados debajo de ella para no ser expuestos al aire o
al agua u otros agentes como las radiaciones solares, microorganismos
patógenos.
Los Dermatólogos, definen la piel como: “La piel humana proporciona al
organismo protección mecánica frente a los agentes externos, por la
resistencia de su estrato córneo y por el conjunto de fibras colágenas y
elásticas que la integran. Está encargada de regular la absorción de
16
sustancias; interviene como barrera a nivel epidérmico, y regula el medio
interno, manteniendo constante la temperatura y la composición
fisicoquímica del cuerpo humano”.
Desde afuera hacia dentro, se distinguen tres capas de tejido, cuyo origen
embriológico es totalmente distinto, perteneciendo cada capa a una capa
embriológica diferente:
1. La epidermis.
2. La dermis o corion.
3. El tejido subcutáneo o también denominado hipodermis o subcutis.
Figura 7. Esquema de las capas de la piel.23
2.2.3.1.
Componentes de la piel.23
1. Epidermis:
Está formada por el epitelio plano estratificado queratinizado o
cornificado, denominado “queratinocitos” especializado en sintetizar
filamentos de queratina, proteína sulfatada que le proporcionan
cierta rigidez, dureza y semi impermeabilidad. Dependiendo del
espesor de la epidermis la piel es gruesa o delgada. La piel gruesa
17
se localiza en la palma de las manos y en las palmas de los pies. La
piel delgada ocupa todo el resto de la cubierta corporal.
2. Dermis:
Es el componente conjuntivo de la piel. Constituida por dos estratos
de tejido conjuntivo de la piel. Está constituida por dos estratos de
tejido conjuntivo fibroso unidos entre sí. El estrato más superficial se
denomina papilar y el más profundo, reticular.
2.2.4. Estudio botánico de la especie vegetal Artocarpus altilis (Park.) Fosberg
“Pan de árbol”
2.2.4.1.
Familia Moraceae (Moraceas).24
La familia se distribuye en las regiones tropicales y templadas de todo
el mundo, siendo originaria de Indonesia y Polinesia, pero su diversidad
se centra en los trópicos. La familia está con una asombrosa diversidad
de estructuras inflorescencias complejas, síndrome de polinización, los
sistemas de cría y formas de crecimiento en la familia ha complicado su
taxonomía a nivel tribal y por debajo.25
La familia comprende aproximadamente 37 géneros y 1050 especies,
incluyendo varias especies económica y ecológicamente importantes,
como árbol de fruta de Pan (Artocarpus altilis), mora Turca
(Broussonetta papynfera Vent.), y los higos (Ficus L).24
En Perú, de la familia Moraceae se conocen 19 géneros y 128
especies, la mayoría arbóreas y/o hemiepífitos. De las cuales dos
especies endémicas en igual número de géneros. Se encuentran en la
región Bosques Húmedos Amazónicos, entre los 115 y 220 m de altitud.
Ambas especies endémicas se encuentran dentro del Sistema Nacional
de Áreas Naturales Protegidas por el Estado.26
2.2.4.2.
Genero Artocarpus. 24
En 1976, en el barco Bounthy, a cargo del capitán William Blight, los
ingleses llevaban a las Antillas el “árbol de fruta de Pan”, que
18
trasladaban desde Polinesia. Este barco naufrago y el “árbol de fruta de
Pan” no pudo llegar a América. En un segundo intento, el 1793, las
plantas llegaron al fin a las Antillas donde se aclimataron y desde donde
se extendieron a toda las regiones tropicales incluyendo parte de
Ecuador.
Artocarpus es un género Pantropical con numerosas especies nativas
del bosque húmedo de Malasia, Indonesia,
Filipinas y Melanesia.
Mientras que solamente Artocarpus altilis y Artocarpus hetheropillus son
ampliamente cultivadas fuera de sus áreas de distribución natural,
muchas otras especies producen frutos comestibles y no moderables; y
otros moderables de alta calidad.27
El género Artocarpus se conoce por producir un gran número de
metabolitos secundarios y es específicamente rica en fenilproPanoides
tales como flavonoides y flavonas. Artocarpus altilis (árbol de fruta de
Pan), tiene más de 130 compuestos identificados en varios órganos del
árbol, más de 70 de los cuales se derivan de la ruta de
fenilproPanoides.24
Varios estudios han sugerido que las plantas son fuentes potenciales de
agente antioxidante natural que juegan un papel importante en la salud
humana, tales como la prevención de los daños oxidativos y reducir los
riesgos de enfermedades crónicos.
La especie Artocarpus altilis “árbol de fruta de Pan”, deriva su nombre
por su sabor semejante al Pan, y porque en algunos países tropicales
es usado como sustituto de este producto. Es un alimento energético
con un porcentaje alto de carbohidratos (20 a 35 %), rico en calcio,
hierro, fosforo y vitaminas C y B. Cuando se hace relación a los árboles
que son una verdadera fuente de vida, se tiene que incluir,
necesariamente al “árbol del Pan”, por su utilidad e importancia como:
Alimento humano y animal, planta ornamental, medicinal, protectora de
aguas y suelos, maderable, fuente de fibra, y como origen de tantos
otros beneficios que le han dado visa de residente en muchos de los
países tropicales del mundo. 28
19
2.2.4.3.
Descripción botánica de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg.
Los arboles de fruta de Pan son grandes entre 15 a 20 metros de altura
y un diámetro a veces más de 0,60 m; de hojas perennes follaje
persistente en el árbol durante todo el año; las hojas son alternas, con
estipulas elípticas recortadas de siete a once lóbulos, de grandes
dimensiones pueden llegar a tener de 30 a 90 cm de longitud. La cara
superior de la hoja es glabra salvo en la proximidad de las nervaduras
principales.
El árbol tiene una corteza lisa, de color claro, pudiéndose volverse
oscuro por la exposición al aire; y el tronco puede ser de hasta 1,2 m de
diámetro, a veces crece hasta una altura de 4 m antes de ramificar. El
látex está presente en todas las partes del árbol. Dos estipulas grandes
encierran la yema terminal.29

División: Magnoliophyta.

Clase: Magnoliopsida.

Subclase: Hamamelididae.

Orden: Urticales.

Familia: Moraceae.

Género: Artocarpus.

Especie: Artocarpus altilis (Park.) Fosberg.

Nombre Vulgar: Pan de árbol.
Las hojas son gruesas y cortaceas con una parte superior de color
verde oscuro brillante. La parte inferior es oscura con un nervio central
elevado y venas profundas. Las hojas varían en tamaño y forma incluso
en el mismo árbol, mayoritariamente van de ovaladas a obovadas. Las
hojas son a veces suaves, pero a menudo están cubiertos de unos
pocos a muchos pelos de color rojizo pálido, especialmente en el nervio
central y las venas.29
El fruto es una estructura altamente especializada, un sincarpo, están
unidas al eje de la fruta o núcleo de 1500 - 2000 flores. El núcleo
contiene numerosos tubos de látex y haces vasculares grandes que se
decoloran rápidamente en un pequeño corte, debido a la actividad
20
enzimática oxidativa. La mayor parte de la fruta se forma a partir del
perianto persistente de cada flor. A medida que el fruto se desarrolla, el
perianto crece vigorosamente y se convierte en carnoso en la madurez,
que forma la porción comestible de la fruta. La corteza dura de la fruta
se compone de cinco discos de siete lados, cada uno de la superficie de
una flor individual. La corteza es generalmente teñida con exudaciones
del látex en la madurez. Presenta pequeñas espinas en toda la
corteza.29
2.2.4.3.1.
Hábitat y distribución.24
Crece de manera óptima en las zonas Ecuatoriales y tropicales,
pero pueden crecer en zona de climas templados con inviernos
muy suaves.
Se encuentra en tierras de alturas situadas por
debajo de los 600 - 650 msnm, pero podría vivir hasta los 1,550
msnm sin dificultades, si se trata de una zona de clima cálido, en
cuanto al régimen de irrigación, requiere un riego anual. La
estación
lluviosa
del árbol de
Pan
debe
ser el verano
preferiblemente, y que el calor, combinado con la lluvia abundante
y la humedad ayuda que la planta crezca.
Las condiciones del suelo necesarias para el correcto crecimiento
de las plantas son de arena, franco arenoso o franco. Esta planta
crece mejor a temperatura 21 - 32 °C. El suelo debe ser neutral en
condiciones, a un pH 7,4 a 6,1.
2.2.4.3.2.
Etnofarmacología.24
Las flores se frotan en las encías alrededor de los dientes para
aliviar el dolor. El Látex para el tratamiento de dolores de huesos y
esguinces; enfermedades por hongos como la candidiasis. Se
toma látex diluido internamente para tratar la diarrea, dolor de
estómago y la disentería. Hojas machacadas para tratar hongos.
Látex y el jugo de las hojas trituradas son a la vez tradicional
utilizados en las islas del Pacífico para tratar infecciones del oído.
21
La raíz es un astringente y se usa como un purgante; macerado es
utilizado como una cataplasma para enfermedades de la piel.
La corteza se utiliza en varias islas del Pacífico para tratar el dolor
de cabeza. Las hojas se usan en Taiwán para el tratamiento de las
enfermedades del hígado y fiebres, y el extracto de las flores es
eficaz para el
tratamiento de edema de la oreja. Extractos de
corteza mostraron fuerte actividad citotóxica contra las células de
leucemia en cultivo de tejidos, y extractos de las raíces, tallo y
cortezas mostraron alguna actividad antimicrobiana frente a
bacterias Gram positivas.
2.2.4.3.3.
Uso farmacologico.24
Actividades
farmacológicas
de
Artocarpus
antiinflamatoria, potente antifúngico, estudia el
sexual,
actividad
antibacteriana,
inmunomodulador,
efectos
altilis.
comportamiento
antidiabético,
anticolinérgicos,
Actividad
actividad
actividad
quelante,
evaluación nutricional como agente cosmético, inhibidores de la
ECA, actividad antioxidante, toxicidad para las células cancerosas,
Antihelmíntico, regulamiento de los estrógenos y la inhibición de la
biosíntesis de melanina.
El nombre genérico de la especies proviene de las palabras
griegas "artos" (Pan) y 'karpos' (fruta) y los frutos se consumen y
son llamados comúnmente
árbol del Pan. Sinónimos de
Artocarpus altilis son Artocarpus communis y Artocarpus incisos.
Metabolitos de Artocarpus altilis, se encuentran en extractos de
hojas, tallos, frutos y la corteza que contienen compuestos
biológicamente activos utilizados en las diversas actividades.28
2.2.4.3.4.
Componentes fitoquímicos de Artocarpus altilis.30
El género Artocarpus puede producir un gran número de
metabolitos secundarios generalmente rica en fenilproPanoides,
tales como flavonoides y flavonas. También produce compuestos
fenólicos incluyendo flavonoides, y estilbenoides arylbenzofurons.
Más de 130 compuestos se identifican en diversos órganos del
22
árbol de Artocarpus altilis, más de 70 de los cuales derivado de la
vía fenilproPanoide.
El extracto metanólico, acetato de etilo y éter de petróleo de hoja
de Artocarpus altilis tiene esteroides, fitosteroles, gomas y resinas.
Además, los otros constituyentes presentes en el extracto de hoja,
72,5% son aminoácidos, ácidos grasos 68,2% y 81,4% de
carbohidratos, aminoácidos esenciales como cistina, arginina,
histidina, leucina, lisina, treonina, metheonine, triptófano, sacarosa
y ácidos grasos . Calcio, hierro y sodio son los minerales del Pan
de árbol.
2.2.4.3.5.
Actividad biológica de Artocarpus altilis.
A. Agente antioxidante.
Horng - Huey et al. (2013). Evaluó las actividades antioxidantes
de
flavonoides
aislados
de
la
corteza
de Artocarpus
altilis incluyendo sus efectos inhibidores sobre la tirosinasa de
champiñón y la biosíntesis de melanina in vitro. Concluyeron que
estos
flavonoides
son
adecuados
como
antioxidantes
y
blanquean la piel. Sin embargo, nuevas investigaciones son
requeridos para determinar sus mecanismos de acción.31
B. Agente antimicrobiano
Chinmay et al. (2013). Investigó la actividad antimicrobiano
de extractos de hojas Artocarpus altilis en diferente medios de
solvente (éter de petróleo, metanol y acetato de etilo). Se
concluyó que el extracto de metanol de la hoja Artocarpus
altilis tiene mayor actividad antimicrobiana, mientras que el éter
de petróleo y
acetato de etilo mostraron mejor efectividad a
bajas concentraciones.32
23
2.2.5. Flavonoides
2.2.5.1.
Estructura molecular de las flavonas
Es el término genérico con que se identifica a compuestos polifenolicos
caracterizados por una estructura química basada en un esqueleto C6 C3 - C6, esto es un anillo bencénico unido a una cadena propánica y
esta a su vez a otro anillo bencénico.33
Figura 8. Estructura química de un flavonoide.33
Dependiendo del grado de saturación y patrón de sustitución de grupos
funcionales en la estructura base, da lugar a flavonoides con
designaciones
comunes
como
flavonoides,
flavonas,
chalconas,
auronas, isoflavonoides, etc.; así como a sus derivados glicosidados
que portan moléculas de azucares e incluso derivados ácidos de
azucares. Suelen encontrarse también parcialmente polimerizados
dando lugar a dímeros, trímeros, etc; hasta formar complejos
multienlazados como los taninos condensados.33
Estos compuestos se encuentran de manera natural en los alimentos
que consumimos, particularmente en los vegetales. En general el sabor
que aportan a los alimentos suele ser amargo llegando incluso a
provocar sensaciones de astringencia dependiendo de lo condensado
que sean los taninos.33
24
2.2.5.2.
Distribución de los flavonoides.33
Los flavonoides se encuentran en todo los vegetales superiores al
estado libre y de glucósidos. Por hidrolisis se desdoblan en materias
colorantes como flavonicas y en azucares (glicosidos pigmentarios)
constituyendo la mayor parte de los colorantes amarillos de las flores,
hojas y frutos.
2.2.5.3.
Características de los flavonoides.33
Los flavonoides o bioflavonoides son pigmentos vegetales no
nitrogenados. Su función dentro del mundo de las plantas parece ser la
de atraer a los polinizadores hacia las flores o los animales que comen
los frutos con la intensión de que puedan dispensar mejor las semillas.
Muchas veces los flavonoides son la respuesta adaptativa de las
plantas a la intensa radiación ultravioleta. Estos componentes protegen
a las plantas de los efectos nocivos de estos rayos solares. Algunos
dan color amarillo y el nombre general a principios fue Queflavus en
latín significa “amarillo”. De este nombre deriva la palabra Flavonoide.
2.2.5.4.
Biosíntesis
Proceden del metabolismo secundario de los vegetales a través de la
ruta del ácido shikimico (anillo B y C) y la ruta de los policeticos (anillo
A).
25
Figura 9. Ruta de biosíntesis de flavonoides en las plantas. 33
26
La vía del ácido shikimico se inicia en los plastos por condensación de
dos productos fotosintéticos, 4 - P con el fosfoenolpiruvato (PEP), y por
diversas modificaciones se obtiene el ácido shikimico, del cual derivan
directamente algunos fenoles en los vegetales. La vía del ácido
shikimico normalmente prosigue, y la incorporación de una segunda
molécula de PEP conduce a la formación de fenilalanina. La vía
sintética de los flavonoides comienza cuando la fenilalanina, por acción
de la enzima fenilalanina amonioliasa (PAL) se transforma en acido
cinámico, que luego es transformado en acido p - cumarinico por
incorporación de un grupo hidroxilo a nivel de anillo aromático, y la
acción de una CoA ligasa lo transforma en cumaril - SCoA, el precursor
de la mayoría de los fenoles de origen vegetal, entre los que se
encuentran los flavonoides.
2.2.5.5.
Flavonoides y salud.33
Los flavonoides o bioflavonoides son pigmentos naturales presentes en
los vegetales y que nos protegen del daño de los oxidantes; la polución
ambiental, con la presencia de minerales tóxicos; las sustancias
químicas presentes en los alimentos: Colorantes, conservantes, etc;
como el organismo humano no puede producir estas sustancias
químicas debemos obtenerlas de la alimentación o en forma de
suplementos.
No son considerados por los nutricionistas como vitaminas, sin embargo
los Flavonoides actúan protegiendo la salud: Limitan la acción de los
radicales libres (oxidantes) reduciendo el riesgo de cáncer y
enfermedades cardiacas, mejoran los síntomas alérgicos y de artritis,
aumenta la actividad de la vitamina C, refuerzan los vasos sanguíneos,
bloquean la progresión de las cataratas y la degeneración macular.
27
III.
3.1.
PARTE EXPERIMENTAL
Diseño metodológico.
3.1.1. Tipo de investigación:
 Según Nivel o Alcance: Experimental básico.
 Según Estrategia: Prospectivo.
 Según Tendencia: Transversal.
 Según Propósito: Aplicada.
3.1.2. Diseño de la investigación

3.2.
Experimental.
Materiales
3.2.1. Materiales para el estudio cualitativo

Tubos de ensayo 13 x 10 mL.

Gradilla de metal.

Pipeta de 1, 2, 5 y 10 mL.

Beacker 250 mL y 1L.

Cocinilla eléctrica modelo: SB302 Stuart Equipment, serie: CB302.

Propipeta de goma.

Baqueta de vidrio.

Espátula de metal.

Asperjador con bombilla.

Cubas cromatográficas 10 x 10 cm y 25 x 25 cm.

Probeta de 100 mL.

Balanza analítica (Modelo: Sartorius; Serie: TE2145).

Estufa (Modelo: Memmert).

CamPana extractora (Modelo: KtPeru; Serie: CL - 1000).

Espectrofotómetro UV- Visible a 280 nm (Modelo: BioSpec mini. Serie:
A11S146000028).

Lámpara UV (Modelo 4305M/MH).
28
3.2.2. Materiales para el estudio farmacológico:

Balanza para pesar ratones.

Jaulas de plástico para ratones.

Sonda orogástrica N°18 para ratones.

Placa petri de vidrio.

Sacabocado 6 mm de diámetro.

Balanza analítica (Modelo: Sartorius; Serie:TE2145)
3.2.3. Material biológico:

Ratones cepa BalB/C53/CNPB
3.2.4. Material vegetal:

Extracto hidroalcohólico de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de
árbol”.
3.3.
Muestra
3.3.1. Muestra vegetal.
Se utilizó 4 Kg de hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de
árbol” del Departamento de Junín, Provincia Chanchamayo, Distrito
Pichanaki. Las hojas fueron sometidas a una limpieza, eliminación de
partículas extrañas, se lavó con agua a presión y posteriormente con alcohol
al 70%. Se protegió de la radiación solar directa, polvo, etc. Se pesó todo el
material recolectado, obteniendo un peso de 4 Kg. Posteriormente se realizó
una maceración hidroalcohólico por 7 días.
3.3.2. Muestra biológico.
Se emplearon 120 ratones albinos Balb/C53/CNPB de 25 - 30 g de peso
corporal provenientes del Bioterio del Instituto Nacional de Salud en
Chorrillos (INS), con 7 días de aclimatación, (12 horas de luz y 12 horas de
oscuridad).
29
3.4.
Métodos
3.4.1. Preparación del extracto hidroalcohólico de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg
“Pan de árbol”.
Se pesaron 4 Kg de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg
“Pan de árbol” y se macero en alcohol etílico al 70 % durante 7 días, con
agitación diaria, en un frasco de vidrio color ámbar. Posteriormente, se
realizó el filtrado por gravedad de la solución para eliminar el solvente y
obtener un extracto seco, primero con gasa y luego con papel filtro rápido y
lento hasta obtener una solución transparente. El filtrado se colocó en una
fuente de vidrio para evaporar el alcohol y obtener el extracto seco utilizando
para ello secadoras eléctricas. Se dejó concentrar la muestra en la estufa por
5 días. Finalmente, se coloca el extracto en un frasco pequeño color ámbar
protegido de la luz y la humedad. Obteniéndose un rendimiento de extracto
seco de 300 g.
3.4.2. Prueba de solubilidad y análisis cualitativo.
3.4.2.1.
Prueba de solubilidad
Se tomó 20 mg del extracto de las hojas frescas de Artocarpus altilis
(Park.) Fosberg “Pan de árbol” y se colocó en 11 tubos de ensayo
para añadir a cada uno 1 mL de disolvente de diferente polaridad.
3.4.2.2.
Análisis cualitativo
Se pesó 20 mg de extracto de las hojas frescas de Artocarpus altilis
(Park.) Fosberg “Pan de árbol”, se solubilizo en su solvente soluble
metanol. Se colocó 1 mL del extracto y se colocó gotas del reactivo,
donde se identificó los metabolitos primarios y secundarios por
coloración y precipitación.34
30
3.4.3. Análisis farmacológico
3.4.3.1. Actividad analgésica.
Se utilizó el método de Koster y Col. Modificado.35 Modelo de
contorsiones abdominales por ácido acético glacial al 0,8%. Se usaron 64
ratones albinos de cepa BalB/C53/CNPB de 25 - 30 g de peso corporal;
24 horas antes de realizar el experimento se retiró el alimento. Se
distribuyó de forma aleatoria en 8 grupos de 8 ratones.
Grupos experimentales:
1. Control negativo. Agua destilada
2. Control positivo. Ácido acético glacial al 0,8%
3. Ex - EtOH 50 mg/Kg.
4. Ex - EtOH 100 mg/Kg.
5. Ex - EtOH 200 mg/Kg.
6. Paracetamol 300 mg/Kg.
7. Tramadol 40 mg/Kg.
8. Oxicodona 20 mg/Kg.
Se indujo un efecto protector, por sonda nasogástrica (vía oral), 60
minutos antes de administrar el irritante ácido acético glacial 0,8% por vía
Intraperitoneal a dosis de 0,1mL por cada 10g de peso corporal.
Seguidamente, Se cuantificó las contorsiones abdominales y arcadas
durante 20 minutos.
La contorsión abdominal es la contracción de la musculatura abdominal
con una elongación y estiramiento de las extremidades posteriores. Las
arcadas son movimientos violentos del estómago, que inducen al vomito.
Los resultados se expresaron como porcentaje de actividad anti
nociceptiva (% AN).
% AN = 100 – Contorsiones de los ratones con tratamiento * 100
Contorsiones de los ratones sin tratamiento
31
3.4.3.2. Actividad antiinflamatoria.
Se utilizó el método de edema auricular por un agente irritante xilol al 6%
diluido en acetona. Esta técnica consistió en la inducción de inflamación
por la aplicación de xilol, agente irritante produciendo un daño
neuronociceptivo en el pabellón de la oreja del ratón. La evaluación se
determinó por la medición de la respuesta inflamatoria que se traduce por
el aumento de peso en el área lesionada por el agente químico.8,36
Se
usaron
42
aproximadamente
ratones
25
-
albinos
30
g
de
de
cepa
peso
BalB/C53/CNPB
corporal.
Se
de
distribuyó
aleatoriamente 6 grupos de 6 ratones por grupo de estudio, empleando la
guía de manejo y cuidado de animales de laboratorio.
Grupos experimentales:
1. Grupo control: Xilol al 6%
2. Ex - EtOH 5% en crema.
3. Ex - EtOH 10% en crema.
4. Ex - EtOH 20% en crema.
5. Diclofenaco 1% en gel.
6. Clobetasol 0,05% en crema
Las orejas izquierdas recibieron solo el agente irritante Xilol al 6%, 5
veces en la cara interna y externa de las orejas del ratón. Las orejas
derechas recibieron el agente irritante en la cara interna y externa con un
hisopo estéril. Después de 20 minutos solo las orejas derechas recibieron
tratamiento con las cremas de los extractos de Artocarpus altilis (Park.)
Fosberg “Pan de árbol” de diferentes concentraciones (5%, 10% y 20%),
un antiinflamatorio como Diclofenaco en gel al 1% y un glucocorticoides
como Clobetasol crema 0,05% menos el grupo control.
Cuatro horas después de la aplicación de las sustancias antiinflamatorias
a ensayar, se procedió a sacrificar a los animales por dislocación cervical.
Luego, con un sacabocado de 6mm de diámetro se procedió a cortar una
porción del centro de ambas orejas y se colocó en una luna de reloj para
pesarlas por separado (oreja derecha y oreja izquierda). Anotando los
32
respectivos pesos. La evaluación se determinó por la medición de la
respuesta inflamatoria que se traduce por el aumento de peso.
La actividad antiinflamatoria se expresó como porcentaje de inhibición del
edema calculado:
Delta de peso (mg) = ∆ peso = (peso oreja inflamada - peso oreja no
inflamada)
% de inhibición del edema = 100 - ∆ peso del extracto *100
∆ peso control
3.4.3.3
3.4.3.4
Formulación de la crema:
-
Alcohol cetílico 4% (agente espesante, emoliente)
-
Acido esteárico 2 % (emoliente, emulgente)
-
Alcohol cetoesteárico 6% (agente emulsificante)
-
Vaselina líquida 1,5 % (emoliente y protector dermatológico)
-
Glicerina 4% (emoliente)
-
Agua destilada csp 100 %
Preparación de la crema:
Se procedió a preparar la fase oleosa (ácido esteárico, vaselina liquida,
glicerina) a una temperatura de ebullición a 80°C en un beacker de 500 mL y
en otro beacker la fase acuosa (alcohol cetílico, alcohol cetoesteárico), se
mezcló la fase acuosa en la fase oleosa y se completó con agua, hasta
formar una emulsión completa sin grumos con constante agitación.
Posteriormente,
para
finalizar
se
concentraciones en potes de 100g.
33
colocó
el
extracto
a
diferentes
IV.
4.1.
RESULTADOS
Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas
de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.
Cuadro 3. Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las
hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.
N°
SOLVENTES
NOMENCLATURA
RESULTADO
1
Agua destilada
H2O
+
2
Etanol
EtOH
+
3
Metanol
MeOH
++
4
n–butanol
n-buOH
+
5
Cloroformo
CHCl3
+
6
Acetato de etilo
EtoAc
+
7
Hexano
Hex
-
8
Acetona
Me2CO
+
9
Benceno
Bz
-
10
Éter etílico
Et2O
-
11
Éter de petróleo
Ep
-
Leyenda:

Soluble (++)

Insoluble (-)

Parcialmente soluble (+)
Mediante la prueba de solubilidad (cuadro 3) realizada al extracto hidroalcohólico de
las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” (Figura 10), se
evidencia que es parcialmente soluble en etanol, n - butanol, cloroformo, acetato de
etilo y acetona, agua destilada, e insoluble en hexano, benceno, éter etílico y éter
de petróleo. Sin embargo, los resultados muestran una mayor solubilidad en
metanol del extracto hidroalcohólico. En el extracto hidroalcoholico se puede
obtener la presencia de glicosidos o agliconas muy hidroxiladas y en menos polares
flavonas altamente metoxiladas. Sin embargo, los flavonoides tienen características
generales de ser solubles en metanol por su carácter fenólico.
34
4.2.
Análisis Cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de
Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.
Cuadro 4. Análisis Cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de
Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”.
N°
1
ENSAYO
AlCl3
METABOLITO
ESPECIFICACIÓN
RESULTADO
Flavonoides
Fluorescencia con halo
+
amarillo en la luz ultravioleta
visible a λ 250 nm (UV).
2
3
FeCl3
Shinoda
Compuestos
Coloración rojo - vino
fenólicos
(compuestos fenólicos).
Flavonoides
Color amarillo, naranja,
+
+
carmelita o rojo intenso.
4
Gelatina/
Taninos
Precipitado blanco lechoso.
+
NaOH 1%
5
Dragendorff
Alcaloides
Precipitado anaranjado.
+
6
Mayer
Alcaloides
Opalescencia, turbidez,
+
precipitado blanco.
7
Popoff
Alcaloides
Precipitado amarillo.
-
8
Wagner
Alcaloides
Precipitado marrón o café
+
oscuro.
9
Fehling A y B
Azucares
Precipitado rojo.
+
reductores
10
Ninhidrina
Grupo amino libre
Azul o violeta.
-
11
Liberman-
Esteroides y/o
Rojo, rosado, violeta.
+
burchard
terpenos
Salkowski
Esteroides
Rojo o amarillo.
+
12
Leyenda:

Presencia (+)

Ausencia (-)
35
Basado en las pruebas generales de coloración y precipitación (figura 11), se
determinó la presencia de los siguientes metabolitos (cuadro 4). Realizado al
extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg
“Pan de árbol”. Se evidencia la presencia de flavonoides, alcaloides, esteroides
terpenicos, azucares reductores y no hay presencia de grupo amino libre. La
actividad antiinflamatoria puede atribuirse a los flavonoides y alcaloides. Pero en
este caso se determinó una mayor presencia de flavonoides.
4.3.
Análisis estadístico.
Se realizó el análisis de varianza (ANOVA) con el programa IBM SPSS Statistics
Base versión 22. Para determinar si existía diferencia significativa, en el estudio de
la actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema formulada a
base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.)
Fosberg “Pan de árbol” en ratones.
36
4.3.1. Actividad Analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”
en ratones.
Cuadro 5. Evaluación del promedio del número de arcadas y contorsiones abdominales inducida con ácido acético glacial
0,8%.
GRUPO DE ESTUDIO
PROMEDIO DEL
N°
PROMEDIO
% INHIBICION
DEL N°
CONTORSIONES
% INHIBICION ARCADAS
CONTORSIONES
ARCADAS
36,88
43,75
0%
0%
Ex - EtOH 50 mg/Kg.
24,25
23,88
34%
45%
Ex - EtOH 100 mg/Kg.
9,88
6,38
73%
85%
Ex - EtOH 200 mg/Kg.
20,13
7,75
45%
82%
Paracetamol 300mg/kg
9,00
13,38
76%
69%
Tramadol 40 mg/Kg
4,88
4,25
87%
90%
Oxicodona 20mg/Kg
1,13
0,88
97%
98%
Control positivo (ácido acético
glacial al 0,8%)
Se evaluó el promedio del número de contorsiones y arcadas. Hallándose un porcentaje de inhibición de arcadas y contorsiones.
Mostrándose un porcentaje de inhibición significativo en el extracto hidroalcohólico de 100 mg/Kg con un 73%, similar al paracetamol
300 mg/Kg con un 76%. Mostrando su efectividad.
37
4.3.1.1.
Contorsiones del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en
ratones.
Gráfico 1. Inhibición del número de contorsiones inducida con ácido acético glacial 0,8% con diferentes tratamientos.
Control
positivo
Ex – EtOH
50 mg/Kg
Ex – EtOcH
100 mg/Kg
Ex – EtOH
200 mg/Kg
Paracetamol
300 mg/Kg
Tramadol
40 mg/Kg
Oxicodona
20 mg/Kg
En el gráfico de evidencia una similitud en el porcentaje de inhibición donde se demuestra que el extracto hidroalcohólico al 100 mg/Kg
y el paracetamol 300 mg/Kg muestra una inhibición significativa e equivalente.
38
4.3.1.1.1.
Comparaciones múltiples
Cuadro 6. Prueba de post hoc de Tukey de las contorsiones abdominales en ratones.
% INHIBICION DE CONTORSIONES
Subconjunto para alfa = 0,05
grupos de estudio
HSD
a
Tukey
N
1
1. Control positivo
8
0,0000%
2. Ex - EtOH 50 mg/Kg.
8
4. Ex - EtOH 200 mg/Kg.
8
3. Ex - EtOH100 mg/Kg.
8
73,3750%
5. Paracetamol 300mg/kg
8
75,8750%
6. Tramadol 40 mg/Kg
8
7. Oxicodona 20mg/Kg
8
Sig.
2
3
4
5
6
34,2500%
45,2500%
86,6250%
96,7500%
1,000
1,000
1,000
,157
1,000
1,000
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 8,000.
La prueba de Tukey nos evidencia que el extracto 100 mg/Kg y paracetamol 300 mg/Kg, Presentan una equivalencia de efecto para
inhibir las contorsiones abdominales en ratones con un p<0.05.
39
4.3.1.2.
Arcadas del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones.
Gráfico 2. Inhibición del número de arcadas inducida con ácido acético glacial 0,8%.
Control
positivo
Ex – EtOH
50 mg/Kg
Ex – EtOcH
100 mg/Kg
Ex – EtOH
200 mg/Kg
Paracetamol
300 mg/Kg
Tramadol
40 mg/Kg
Oxicodona
20 mg/Kg
En el grafico se observa que el extracto de 100 mg/Kg, 200 mg/Kg, mostraron un menor número de arcadas en comparación con
paracetamol 300 mg/Kg. Demostrando la hipótesis que presenta actividad analgésica.
40
4.3.1.2.1.
Comparaciones múltiples:
Cuadro 7. Prueba de post hoc de Tukey de las arcadas abdominales en ratones.
INH.ARCADAS
Subconjunto para alfa = 0.05
GRUPOS DE ESTUDIO
HSD
Tukeya
N
1
1 Control positivo
8
0,0000%
2 Ex - EtOH 50 mg/Kg.
8
5 Paracetamol 300mg/kg
8
4 Ex - EtOH 200 mg/Kg.
8
82,2500%
3 Ex - EtOH 100 mg/Kg.
8
85,6250%
6 Tramadol 40 mg/Kg
8
7 Oxicodona 20mg/Kg
8
Sig.
2
3
4
5
6
45,5000%
69,6250%
90,3750%
98,2500%
1,000
1,000
1,000
,273
1,000
1,000
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 8,000.
La prueba de Tukey acepta la hipótesis que el extracto de 100 mg/Kg y 200 mg/Kg. Presenta similitud en la actividad analgésicade las
arcadas, mostrando un porcentaje de inhibición estadísticamente significativo con un p<0.05.
41
4.3.2. Actividad Antiinflamatoria
4.3.2.1.
Porcentaje de inhibición de la inflamación.
Cuadro 6. Porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas de los ratones tratados.
Grupo de estudio
Peso de oreja
Peso de oreja
Porcentaje de
derecha(mg)
izquierda(mg)
inhibición.
Grupo control
37,92
37,98
0%
Ex – EtOH al 5% en crema
19,37
33,28
42%
Ex – EtOH al 10% en crema
12,22
34,8
65%
Ex – EtOH al 20% en crema
12,82
38,82
28%
Diclofenaco 1% en gel
12,82
38,82
67%
Clobetasol 0,05 % en crema
14,68
30,18
51%
4.2.1.1
Comparación del porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas
de los ratones tratados que presentan un efecto significativo.
En el Gráfico 3, se observa un porcentaje de inhibición de la inflamación
de las orejas tratadas con la crema formulada a base del extracto
hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg
“Pan de árbol” (5, 10 y 20%) comparando con el control positivo que
tiene un 0% de inhibición de la inflamación.
El efecto del diclofenaco al 1% en gel comparado con el efecto de la
crema formulada a base del extracto al 10% presenta un 67% y 65%
respectivamente de inhibición de la inflamación. Por consiguiente, se
demuestra actividad antiinflamatoria efectiva de la crema formulada a
base del extracto al 10%.
42
Gráfico 3. Porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas tratadas con la crema formulada a base del extracto hidroalcohólico
de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” frente a fármacos de referencia en 4 horas.
Grupo
control
Clobetasol 0,05%
en crema
Diclofenaco
1% en gel
Ex – EtOH 10%
en crema
Ex – EtOH 20%
en crema
Ex – EtOH 5%
en crema
En el grafico se demuestra que la crema formulada a base del extracto al 10% presenta actividad antiinflamatoria, equivalente
al diclofenaco 1% en gel.
43
Cuadro 9. Prueba de post hoc de Tukey de la actividad antiinflamatoria.
% inhibición del edema en 4 horas.
Subconjunto para alfa = 0,05
grupos de estudio
HSD Tukeya
N
1
Grupo control
6
,1794
Ex – EtOH al l 20% en crema.
6
Ex – EtOH al 5% en crema.
6
Clobetasol al 0,05% en crema.
6
Ex – EtOH al 10% en crema.
6
64,7712
Diclofenaco al 1% en gel
6
66,7978
Sig.
2
3
4
5
27,6245
41,8930
51,4055
1,000
1,000
1,000
1,000
,816
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 6,000.
En el cuadro 10, se observa diferencia significativa en todos los grupos de estudio p<0,01. Compara cada uno de los grupos, nos
muestra equivalencia entre los grupos de estudio: Entre el extracto hidroalcohólico al 10% en crema y el diclofenaco al 1% en gel
44
V.
DISCUSÍÓN
El presente trabajo de investigación se evaluó la actividad antiinflamatoria y
analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.)
Fosberg “Pan de árbol” en ratones, para validar el uso de esta especie en la medicina
popular.
El extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg
“Pan de árbol” fue soluble en solventes polares como metanol, etanol, n-butanol,
cloroformo, acetato de etilo e insoluble en hexano, benceno, éter etílico, éter de
petróleo como se observa en el cuadro 3 y figura 10. Permitiendo la disolución de
principios activos en solventes polares, según Olga Lock de Ugaz O. en su libro análisis
fitoquimica.34, 37
El análisis cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus
altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”, confirman la presencia de metabolitos
secundarios: Flavonoides, compuestos fenólicos, taninos, alcaloides, carbohidratos,
azucares reductores, grupo amino libre, esteroides y/o triterpenos según se muestra en
el cuadro 4 y figura 11 mediante ensayos de precipitación y coloración como se
describe en el libro análisis fitoquimica de Lock de Ugaz O. El análisis cualitativo revela
la existencia de metabolitos secundarios confirmando su presencia en estudios
realizados por León Encalada Jacqueline en su estudio “Efecto hipoglucemiante del
extracto de las hojas de frutiPan (Artocarpus altilis) en ratas (Rattus novergicus) con
hipoglucemia inducida” y Mejia K, Rengifo sobre plantas medicinales de uso popular en
la amazonia peruana; donde la especie árbol de Pan presento esteroides, fenoles,
flavonoides, bases cuaternarias, triterpenos, etc.33,38
En el estudio de plantas medicinales iberoamericanas. Refiere que la actividad
analgésica de una sustancia se puede determinar mediante pruebas antonociceptivas
que se basan en la aplicación de un estímulo doloroso (analgésico) y la aparición de
cambios típicos observables en la conducta del animal. Esto no asegura que la
sensación dolorosa sea la misma en el animal que en el ser humano. Dichos estímulos
pueden ser de tipo mecánico, eléctrico o químico. En el presente estudio se emplea un
modelo de contorsiones abdominales inducida por un agente químico (ácido acético al
0,8%). Así mismo, se observaron cambios en la conducta del animal como arcadas y
contorsiones abdominales como respuesta al dolor.
45
Con el fin de evidenciar la acción analgésica del extracto ante la respuesta del
retorcimiento inducido por el ácido acético al 0,8% en ratones se empleó el modelo de
contorsiones abdominales inducido por ácido acético 0,8% de Koster y col. modificado.
Este método no solo es fiable y simple, si no también permite evaluar la acción rápida
de la analgesia. Se encontró que el extracto a dosis de 100 mg/Kg reduce eficazmente
la onda de constricción y elongación que pasa caudalmente a lo largo de la pared
abdominal con torsión del tronco y extensión de la extremidad posterior en ratones
debido a la propiedad nociceptivo del ácido acético. El extracto a dosis de 100 mg/Kg
presento un porcentaje de inhibición de las contorsiones de 73,37% y de arcadas
85,62%, y estaba cerca a la producida por el paracetamol 300 mg/Kg, el medicamento
estándar que inhibió las contorsiones en un 75,87% y las arcadas en un 69,62%. Esto
corrobora que el extracto presenta actividad analgésica.35
Una vía útil de clasificación del dolor para la comparación de analgésicos es
distinguir entre el dolor visceral y somático. El dolor visceral es percibido como una
sensación difusa, mediada por fibras C polimodales. El dolor somático es localizado y
mediado por fibras delta A. La prueba de contorsiones por ácido acético representa un
tipo de dolor visceral, mientras que el de la cola ocurre como respuesta a un dolor
somático. El ensayo del plato caliente combina elementos de ambos tipos de dolor. 21
En el modelo de contorsiones abdominales inducidas por ácido acético, también
llamado modelo de dolor visceral, la inyección de ácido acético produce una
inflamación aguda en la zona peritoneal que conlleva a una reacción dolorosa, debido a
una estimulación de las fibras nociceptivas aferentes por la reducción local del pH y la
síntesis de mediadores inflamatorios.21 Así mismo, puede ocasionar lesión de las
membranas celulares peritoneales (test de contorsiones abdominales), generar la
liberación de prostaglandinas y de otros mediadores de la inflamación. 8
Se debe señalar que la especie vegetal Artocarpus altilis presenta flavonoides en el
análisis cualitativo y el estudio realizado por Mejia K y se sabe que los flavonoides y
triterpenos contribuyen con el efecto antiinflamatorio debido a la inhibición de la
prostaglandina sintetasa, reduciendo el nivel de prostaglandinas en el proceso
inflamatorio. Los flavonoides son compuestos químicos obtenidos del benzopireno a
quienes se les atribuye efectos farmacológicos muy variados: Antiinflamatorio,
antimicrobiano,
antialérgico,
hepatoprotector,
antitrombótico,
antineoplásico,
antiulceroso, antidiabético, expectorante, antihemorrágico, diurético y antiviral, muchos
46
de los cuales han sido comprobados In vitro e In vivo. 38 Validando su actividad
antiinflamatoria y analgésica en ratones.
El modelo de edema auricular inducido por Xileno en ratones es un modelo de
inflamación aguda preliminar y simple para la evaluación de agentes antiinflamatorios
potenciales.39 El edema auricular puede promover mediadores inflamatorios como la
histamina, cininas, fibrinolisina, fosfolipasa A2, entre otros. Estos mediadores inducen
el edema mediante la promoción de la vasodilatación y aumento de la permeabilidad
vascular.40,41 En el estudio se emplearon cremas formuladas a base del extracto
hidroalcohólico a diferentes concentraciones, siendo capaz de reducir la inflamación
causada por el xilol 0,6%, mejorando la permeabilidad vascular. La inflamación está
dada por la primera fase (los primeros 90 min), donde implica la liberación de histamina
y serotonina; la segunda fase (de 90-150 min) está creada por quinina y la tercera fase
(después de 180 min) está mediada por la prostaglandina.42 Los resultados de este
estudio sugieren que el extracto hidroalcohólico posiblemente actúan mediante la
inhibición de la liberación o acción de la histamina, la serotonina y la quinina y la
prostaglandina desarrollado en el edema por lo que el estudio se realiza después de 4
horas de aplicado el tratamiento antiinflamatorio. Se sabe que los procesos
inflamatorios agudos aumentan la permeabilidad vascular e inducen la migración de
leucocitos y la actividad reactivas: Peróxido de hidrogeno (H2O2), anión superóxido (O2) e hidroxilo (OH-).
En la actividad antiinflamatoria, se mostró un efecto eficaz de la crema formulada a
base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.)
Fosberg “Pan de árbol”, en un modelo de inflamación local inducida por xilol 0,6% en el
pabellón auricular del ratón. Los resultados obtenidos del modelo de inflamación
inducida por xilol 0,6%, indicaron que la crema al 5%, 10%, 20% a base del extracto
hidroalcohólico provocaron una disminución de la inflamación del pabellón auricular
(oreja derecha), en un 41,89%; 64,77%; 27,62%; respectivamente. Los fármacos
antiinflamatorios (Diclofenaco al 1% en gel y Clobetasol al 0,05% en crema) indujeron
una inhibición de la inflamación 66,79%, 51,40%, respectivamente. Comparando los
porcentajes de inhibición de la inflamación se muestra una similitud significativa entre el
tratamiento con la crema al 10% a base del Extracto hidroalcohólico y Diclofenaco al
1% en gel. Por lo que se demuestra la actividad antiinflamatoria de las hojas frescas de
Artocarpus altilis (Park.) Fosberg. “Pan de árbol”.
47
Para evaluar la actividad antiinflamatoria una de las pruebas más utilizadas es el
modelo de edema auricular inducido por esteres de forbol como el 12-0tetradecanoylforbol-13-acetato (TPA). Sin embargo, en este estudio se realizó la
prueba de edema auricular inducido por xileno al 0,6%, porque ha demostrado tener
menor toxicidad, menor costo, y porque este solvente induce edema y permeabilidad
vascular, que se evidencia en un proceso inflamatorio agudo. Además, al aplicar el
xileno después de 15 minutos se observa el edema.
El xileno provoca la liberación de mediadores pro- inflamatorios de las neuronas
sensoriales que actúan sobre las células dianas periféricas, como los mastocitos y
otras células del sistema inmune, provocando una inflamación neurogenica
caracterizada por calor, enrojecimiento y edema. Los resultados de este trabajo
indicaron que la administración tópica de crema a base del extracto hidroalcohólico al
5, 10 y 20% disminuyeron la formación del edema, esto se puede deber a que los
compuestos presentes en las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan
de árbol” puedan estar bloqueando los mediadores de la inflamación como la
fosfolipasa, COX-2, histaminas o bloqueando proteínas del complemento, evitando con
ello la infiltración celular. Los antiinflamatorios AINES (diclofenaco) regulan la
modulación de prostaglandinas (PG), y son usados para tratar el dolor agudo e
inflamación crónica de la osteoartritis (OA) y medicamento de primera línea en la artritis
reumatoide (AR).17
48
VI.
CONCLUSIONES
1. Se evaluó la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas
frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” por el método de
contorsiones abdominales inducida por ácido acético al 0,8%. en ratones por
vía Intra peritoneal (I.P), mostrando una dosis efectiva a 100 y 200 mg/Kg con
un porcentaje de inhibición cercano al paracetamol a dosis de 300 mg/Kg.
2. Se evaluó la actividad antiinflamatoria de una crema formulada a base del
extracto Hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.)
Fosberg “Pan de árbol” a diferentes concentraciones en ratones por vía tópica,
mostrándose una dosis efectiva con la crema al 10%, cercano al diclofenaco al
1% en gel en ratones.
49
VII.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Aguilar A. Lo Esencial en Farmacología. Inflamación. 4to Edición: Elsevier
España; GEA consultoría editorial, S.L. 2013.
2. Newman D, Cragg G, Snader K. 2003. Natural products as sources of new
drugs over the period 1981 - 2002. J Nat Prod 66: 1022 - 1037.
3. Gerritsen M, Carley W, Ranges G, Shen C, et al. 1995. Flavonoids Inhibit
Cytokine-induced Endothelial Cell Adhesion Protein Gene Expression. Am J
Pathol 147: 278 - 292.
4. Pastorello M, Ciangherotti C, Varela M, et al. Actividad antiinflamatoria y
analgésica del extracto acuoso de la raíz de Ruellia tuberosa L”. Revista
Facultad de Farmacia [internet]. 2012 [citado 23 de noviembre de 2015]; Vol.
75(1). Disponible en:
http://www.researchgate.net/profile/Israel_Anita/publication/271700399_Actividad_
antiinflamatoria_y_analgsica_del_extracto_acuoso_de_la_raz_de_Ruellia_tuberos
a_L/links/54cf64f50cf298d656636613.pdf
5. Sánchez N, Bu Wong M, Pérez H, et al. Efecto del zumo de Morinda citrifolia L.
(noni) en modelos de analgesia. Revista Cubana de Plantas Medicinales
[internet]. 2012 [citado el 3 de noviembre del 2011, acceso el 7 de abril del
2012];
vol.
17(3):
213-22.
Disponible
en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S102847962012000300002&script=sci_arttext&tlng=pt
6. Adeyemi O, Aiqbe F, Uyaiabasi N. Analgesic and antiinflammatory activities of
the aqueous stem and leaf extract of Asystasia gangetica (Linn) T. Anderson.
Rev. Pubmed [online]. 2011 [citado en abril del 2011, acceso en junio del 2011];
vol.
21(2):129
-34.
Disponible
en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=21913510%5Buid%5D&cmd=Details
Search
7. Condeso S, Cuba C, Del Águila C, et al. “Exploración de la actividad Analgésica
y Antiinflamatoria d las hojas de Maytenus Macrocarpa (chuchuhuasi) mediante
el Test de Formalina”. Rev. VII Jornada Cientifica San Martiniana. 2010 [citado 2
Dic.
2010,
acceso
4
Dic.
2010].
http://issuu.com/paok4/docs/libre_resumenes_vii_jcsm
50
Disponible
en:
8. Amorós A, García C, Hernández C, Sandoval A, et al. “Evaluación del Efecto
Analgésico y Antiinflamatorio del Pan de árbol “Artocarpus Altilis” en animales
de experimentación”. Rev. VII Jornada Científica San Martiniano. 2010 [citado 2
Dic.
2010,
acceso
4
Dic.
2010].
Disponible
en:
http://issuu.com/paok4/docs/libre_resumenes_vii_jcsm
9. Vargas C. Estudio de la Actividad cicatrizante y Antiinflamatoria del extracto
alcohólico de las hojas de Senna reticulata (Willd) H. Irwin & barneby “Retama”.
Rev. UNMSM [internet]. Programa Cybertesis Perú. 2007 [citado el 2007,
acceso el 29 de junio del 2010].
Disponible en: http://cybertesis.unmsm.edu.pe/handle/cybertesis/2585
10. Cyted. Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo.
Manual de técnicas de investigación. Proyecto X-I Búsqueda de principios
activos en plantas medicinales. 1995:81-3.
11. Gomez H, Gomez K, Medina J. Actividad antiinflamatorio de productos
naturales. Boletín latinoamericano y del caribe de plantas medicinales y
aromáticas
2011.
10
(3):
182
–
217.
Acceso
en:
http://www.redalyc.org/pdf/856/85618379003.pdf
12. Fridovich I. 1997. Superoxide anion radical, superoxide dismutases, and related
matters. J Biol Chem 272: 18515 - 18517.
13. Nelson N. 1974. Prostaglandin nomenclature. J Med Chem 17: 911 - 918.
14. Smith W, Garavito R, DeWitt D. 1996. Prostaglandin endoperoxide H synthases
(cyclooxygenase)-1 and 2. J Biol Chem 271: 33157 - 33160.
15. Bergström S, Ryhage R, Samuelsson B y Sjövall J. 1963. Prostaglandins and
related factors.15. The structures of prostaglandin E1, F1a, and F1b. J Biol
Chem 238: 3555 - 3564.
16. Thomas M. Bioquímica. 4ta Edición. Barcelona: Editorial Reverté, S. A; 2004.
Disponible en:
https://books.google.com.pe/books?id=p3DCb9lTLx8C&pg=PA770&dq=prostaglan
dinas&hl=es419&sa=X&ved=0CBsQ6wEwAGoVChMI86mFiMj6yAIVyu4mCh3ung
21#v=onepage&q&f=false
17. Puebla F. Tipos de dolor y escala terapéutica de la O.M.S.: Dolor iatrogénico.
Oncología
(Barcelona).
marzo
de
2005;
28(3):33-7.
http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S037848352005000300006
51
Disponible
en:
18. Velásquez L. Farmacología Básica y Clínica. Fármacos Antiinflamatorios No
Esteroideos y otros Analgésicos e antipiréticos, 18a Edición, Buenos Aires,
Madrid; Médico Panamericano; 2008.
19. Katzung B, Masters S, Trevor A. Farmacologia Basica y Clinica [CD-ROM].12
a
edición. China: Mcgraw-hill interamericana; 2013. 1 CD-ROM.
20. Goodman y Gilman. Las bases farmacológicas de la terapia. Editorial Mc Graw
Hill
Interamericana,
11a
edición
p.p
1371
-1387.2007.
file:///C:/Users/User/Downloads/DialnetEfectoHipolipidemicoDelExtractoAcuoso
DeLasHojasDeA-4657874%20(3).pdf
21. López A, Iturralde F, Clerencia M, et al. Dolor. Capítulo 71. Madrid. 2000. Pp 7174.
22. Smith H. Peripherally acting opioids. Pain physician. 2008 mar:11(2 suppl): pp.
121-132.
23. Merino J, Noriega M. Fisiología General. Tema 11, La piel: Estructura y
funciones. Universidad de Cantabria. Acceso en: http://ocw.unican.es/cienciasde-la-salud/fisiologia-general/materiales-de-clase-1/bloque-ii/Tema%2011Bloque%20II-La%20Piel.%20Estructura%20y%20Funciones.pdf.
24. Medina M. Evaluación antimicrobiana y aislamiento de metabolitos secundarios
de la especie Artocarpus altilis (Parkinson) Fosberg. “árbol de fruta de Pan” de
la provincia de Zamora Chinchipe. Área biológica. Universidad católica de Loja.
Ecuador, 2014.
25. Nyree J, Zerega M, Nur S, et al., Phylogenny and recircumscription of
artocarpeae (Moraceae) whit a focus on Artocarpus. The american society of
plant Taxonomists. Systematic Botany, 2010. 35(4): 766-782.
26. Caceres P. El libro rojo de las plantas endémicas del Perú: Moraceae
endémicas del Perú. Facultad de ciencias biológicas UNMSM. Rev. Perú biol.
13(2): 921-925. 2006.
27. Parrota J, Artocarpus altilis (S. Park) Fosb. Mulberry family. International
institute of tropical Forestry. Puerto Rico: 1994. Department of aagriculture,
Forest Service.
28. Gómez J. Estudio y análisis de la fruta de Pan y propuesta gastronómica.
Universidad tecnológica equinoccial. Quito: Facultad de Turismo y preservación
ambiental hotelería y gastronomía.
29. Ragone D. Breadfruit. Artocarpus altilis (Parkinson) Fosberg. Promoting the
conservation and use of underutilized and neglected crops. Roma, Italia: 1997.
52
Institute of plant genetic and crop plant research, gatersleben / international
plant genetic Resources Institute.
30. Japtap U, Bapat V. Artocarpus: a review of its traditional uses, phytochemestry
and pharmacology. Journal of ethnopharmacology, 2010: 142-146.
31. Horng K, Wen L, Cheng T, Chun L, et al. Prenylated flavonoids from Artocarpus
altilis: Antioxidant activities and inhibitory effects on melanin production.
Phytochemestry:
the
international
Journal
of
plant
chemestry,
plant
biochemestry and molecular biology. 2013; 78 – 88: [online] Available from:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12012169 [Accessed 3rd February 2014].
32. Chinmay P, Monalisa M, Anath B, et al,. Phytoconstituent screening and
comparative assessment of antimicrobial potentiality of Artocarpus altilis fruit
extracts. International journal of pharmacy and pharmaceutical sciences. 2013;
5(3): 1.
33. León J. “Efecto hipoglicemiante del extracto de las hojas de frutiPan (Artocarpus
Altilis) en ratas (rattus novergicus) con hiperglicemia inducida”. Rev. Scientia
Agropecua [internet]. 2013 [citado el 30de abril 2013, acceso 05 de agosto
2013]; Vol.4: 275 -283.Disponible en:
http://dspace.espoch.edu.ec/bitstream/handle/123456789/1594/56T00282.pdf?seq
uence=1
34. Lock de Ugaz O. Investigación Fitoquímica. 2da Edición. Fondo Editorial
Pontificia Universidad Católica del Perú. Lima. Perú pp. 7-10. 1994.
35. Koster R, Anderson M, and de Beer EJ (1959) Acetic acid for analgesic
screening. Fed Proc 18:412.
36. Villena C, Arroyo J. Efecto antiinflamatorio del extracto hidroalcohólico de
Oenothera rosea (yawar socco) en ratas con inducción a la inflamación aguda y
crónica. Ciencia e investigación - Facultad de Farmacia y Bioquímica - UNMSM.
2012; 15(1):15-9.
37. Domínguez X. Métodos de Investigación Fitoquímica. 3a ed. Limusa. México,
1985. p. 2009-238.
38. Mejia, Kember, Rengifo, et al. Plantas medicinales de uso popular en la
amazonia peruana. Rev. Agencia española de cooperación internacional. 2da
Edición.
Lima.
Perú.
2000.
Disponible
en:
http://www.iiap.org.pe/Upload/Publicacion/L017.pdf
39. Cheng
W,
Li
J,
You
immunomodulatoryactivities
T,
of
Hu
the
C,
2005.
extracts
53
from
Anti-inflammatory
the
inflorescence
and
of
Chrysanthemum indicum Linne.J. Ethnopharmacol. 3 de octubre de 2005;
101(1-3):334-7.
40. Li Y, Xian Y, Ip S, et al., 2011. Anti-inflammatory activity of patchouli alcohol
isolated from Pogostemonis Herba in animal models. Fitoterapia 82, 1295-1301
41. Xu Q, Wang Y, Guo S, et al. Actividad antiinflamatorio y analgésico del extracto
acuoso de la inflorescencia masculina de Flos populi, Populus tomentosa Carr.
o Populus canadensis Moench (familia Salicaceae). Rev. Pubmed [online]. 2014
[citado 7 Feb. 2014, acceso 28 Mar. 2014]; vol.152 (3):540-5. Disponible en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24508857
42. Di R, Giroud P, Willoughby D. Study of the mediators of acute inflammatory
response induced in rats in different sites by carrageenan and turpine. J Pathol
1971; 104(1): 15-29.
54
VIII. ANEXO
FOTO NO 1
DESCRIPCIÓN TAXONOMICA
FOTO NO 2
HOJA FRESCA DE Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “ Pan de árbol ”
55
FOTO NO 3
FOTO NO 4
SELECCIÓN DE LA MUESTRA VEGETAL
FOTO NO 5
FOTO NO 6
SECADO DE LA MUESTRA VEGETAL
56
FOTO NO 7
FOTO NO 8
MACERACION DE LA MUESTRA VEGETAL
FOTO NO 9
FOTO NO 10
FILTRACION DE LA MUESTRA VEGETAL
FOTO NO 11
FOTO NO 12
OBTENCION DEL EXTRACTO HIDROALCÓHOLICO
57
FOTO NO 13
EXTRACTO HIDROALCOHOLICO
FOTO NO 14
FOTO NO 15
REACTIVOS PRUEBA DE SOLUBILIDAD
PRUEBA DE SOLUBILIDAD
FOTO NO 16
PRUEBA DE SOLUBILIDAD DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICOS DE LAS
HOJAS FRESCAS DE Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”
58
FOTO NO 17
FOTO NO 18
ANÁLISIS CUALITATIVO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICOS DE LAS HOJAS
FRESCAS de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”
FOTO NO 19
ACTIVIDAD ANALGÉSICA
FOTO NO 20
MUESTRA VEGETAL
FOTO NO 21
RATONES RAZA ALBINOS BALB/C53/CNPB DE 25-30G
59
FOTO NO 22
FOTO NO 23
ADMINISTRACION POR ZONDA NASOGASTRICA
FOTO NO 24
EVALUACIÓN DE LAS ARCADAS POR ÁCIDO ACÉTICO 0,8%
FOTO NO 25
EVALUACIÓN DE LAS CONTORSIONES ABDOMINALES POR ÁCIDO ACÉTICO
0,8%
60
FOTO NO 26
MUESTRA VEGETAL ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA
FOTO NO 27
FOTO NO 28
TRATAMIENTO INFLAMACIÓN POR XILOL AL 0,6%
TRATAMIENTO
OREJA
DE RATÓN
FOTO NO 29
FOTO NO 30
PORCIÓN DE OREJA
PESO DE OREJA DE RATÓN
61