Download Presentado por: Asesor
Document related concepts
Transcript
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA Actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. . Tesis para optar el Título Profesional de Químico Farmacéutico Presentado por: Br. Esteban Carhuallanqui, Vilma Vanessa. Br. Rodríguez Castro, Enma Yicet. Asesor: Dra. JUANA ELVIRA CHÁVEZ LIMA – PERÚ 2016 DEDICATORIA Esta tesis está dedicada principalmente a Dios por darme la vida, guiar mi camino espiritual y profesional en esta vida. A mis padres Estanislao Rodriguez y Justina Castro por su infinito amor y apoyo constante por enseñarme valores y motivarme con su espíritu luchador por mejorar cada día. Ustedes son parte de este logro, y su esfuerzo y empeño será reflejado en esta tesis. A mis hermanos: Rosa, Jesús, Antonio, Marcos y Cristina por ser mi fuerza y motivo para salir adelante y demostrarles que todo con perseverancia es posible de la mano de Dios. A mis profesores por enseñarme, aconsejarme e instruirme en el camino del estudio. Por su apoyo y comprensión en los momentos más duros sin pedir nada a cambio. Br. Rodríguez Castro, Enma Yicet. DEDICATORIA Doy gracias a Dios por darme la vida, sabiduría y entendimiento y por haber logrado uno de mis objetivos. Esta tesis está dedicada principalmente a mis padres, Rufino Esteban Humareda por darme la vida; Vilma Carhuallanqui Condor por ser siempre una mujer ejemplar y tenerme tolerancia, paciencia y brindarme sus consejos sabios. A mis hermanos Randy y Jhordy y decirles que el futuro de uno está en sus manos. A Jorge Rodríguez García por estar conmigo siempre acompañándome a escalar cada peldaño de mi vida y que mis logros también son sus logros. A mis profesores por brindarnos su enseñanza y conocimientos en nuestra vida profesional. Br. Esteban Carhuallanqui, Vilma Vanessa. RESUMEN El presente estudio tuvo como objetivo determinar la actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. La planta se recolecto en el departamento de Junín, fue macerada por 7 días en etanol/agua (70:30). Se realizó la prueba de solubilidad y el análisis cualitativo. Para determinar la actividad analgésica se empleó el modelo de contorsiones abdominales por ácido acético glacial al 0,8%. (Koster y Col. Modificado 1959), se utilizaron 64 ratones y los grupos evaluados fueron: control negativo (agua destilada), control positivo (ácido acético), extracto al 50, 100 y 200 mg/Kg y se comparó con paracetamol 300 mg/Kg, tramadol 40 mg/Kg, Oxicodona 20 mg/Kg. Para determinar el efecto antiinflamatorio se empleó el método de edema auricular por un agente irritante xilol al 6% diluido en acetona en el pabellón de la oreja del ratón (Cyted, 1995). Se usaron 42 ratones y los grupos de estudios fueron: blanco (xilol al 6%), crema al 5, 10 y 20%, comparando con el diclofenaco 1% en gel, clobetazol al 0,05% en crema. Se comprobó que existe actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. Palabras clave: Fosberg, “Pan de árbol”, actividad analgésica, antiinflamatoria. SUMMARY This study aimed to determine the analgesic and anti-inflammatory activity of the extract of a cream formulated on the basis of hydro-alcoholic extract from fresh leaves of breadfruit (Park.) Fosberg "bread tree" in mice. The plant was collected in the department of Junin, it was macerated for 7 days in ethanol / water (70:30). The solubility test and qualitative analysis. To determine the analgesic activity model writhes by glacial acetic acid 0.8% was used. (Col. Modified Koster 1959), 64 mice were used and were evaluated groups: negative control (distilled water), positive control (acetic acid) extract 50, 100 and 200 mg / kg and compared with 300 mg paracetamol / kg, 40 mg tramadol / Kg, Oxycodone 20 mg / Kg. To determine the anti-inflammatory effect the method of ear edema was employed by an irritant xylol 6% diluted in acetone in the pinna of the mouse (Cyted, 1995). The 42 mice were used and groups studies were: white (xylol 6%), cream 5, 10 and 20%, compared to 1% diclofenac gel clobetazol 0.05% cream. It was found that there analgesic and anti-inflammatory activity of the extract of a cream formulated on the basis of hydro-alcoholic extract from fresh leaves of breadfruit (Park.) Fosberg "bread tree" in mice. Keywords: Fosberg, "bread tree", analgesic, anti inflammatory. INDICE GENERAL Pág. RESUMEN SUMMARY I. INTRODUCCIÓN 1.1. Planteamiento del problema 1 1.2. Formulación del problema 2 1.3. Justificación del problema 2 1.4. Objetivos 2 1.5. 1.6. II. 1 1.4.1. Objetivo General 2 1.4.2. Objetivos Específicos 3 Variables 1.5.1. Variable dependiente 3 1.5.2. Variable independiente 3 Hipótesis 3 MARCO TEÓRICO 4 2.1. Antecedentes de la Investigación 4 2.1.1. Antecedentes internacionales 4 2.1.2. Antecedentes nacionales 5 Bases teóricas 7 2.2. 2.2.1. Inflamación 2.2.2. Dolor 11 2.2.3. Piel 16 2.2.4. Estudio botánico de la especie vegetal Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” 2.2.5. Flavonoides 18 24 III. PARTE EXPERIMENTAL 28 3.1. Diseño metodológico 28 3.1.1. Tipo de investigación 28 3.1.2. Diseño de la investigación 28 Materiales 28 3.2.1. Materiales para el estudio cualitativo 28 3.2.2. Materiales para el estudio farmacológico 29 3.2.3. Material biológico 29 3.2.4. Material vegetal 29 Muestra 29 3.3.1. Muestra vegetal. 29 3.3.2. Muestra biológico. 29 Métodos 30 3.2. 3.3. 3.4. 3.4.1. Preparación del extracto hidroalcohólico de Artocarpus IV. altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. 30 3.4.2. Prueba de solubilidad y análisis cualitativo. 30 3.4.3. Análisis farmacológico 31 RESULTADOS 4.1. Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. 4.2. 4.3. 34 34 Análisis Cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. 35 Análisis estadístico. 36 4.3.1. Actividad Analgésica 37 4.3.2. Actividad Antiinflamatoria 42 V. DISCUSIÓN 45 VI. CONCLUSIONES 49 VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 50 VIII. ANEXO 55 INDICE DE FIGURAS Pág. Figura 1. Reacción de la ciclooxigenasa 9 Figura 2. Conversión de la PGG2 en PGH2; reacción de la PG 9 hidroperoxidasa (PGH sintasa). Figura 3. Síntesis del TX2 a partir de PGH2 9 Figura 4. Ruta principal de la biosíntesis de las prostaglandinas. 10 Figura 5. Sitios de acción de inhibidores de la síntesis de prostaglandina 11 Figura 6. Escala analgésica del dolor según la O.M.S. 13 Figura 7. Esquema de las capas de la piel 17 Figura 8. Estructura química de un flavonoide 24 Figura 9. Ruta de la biosíntesis de flavonoides en las plantas 26 INDICE DE CUADROS Pág. Cuadro 1. Uso del paracetamol analgésico no opiáceo. 15 Cuadro 2. Uso de los analgésicos opiáceos 16 Cuadro 3. Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. Cuadro 4. Análisis Cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. Cuadro 5. 41 Porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas de los ratones tratados. Cuadro 9. 39 Prueba de post hoc de Tukey de las arcadas abdominales en ratones. Cuadro 8. 37 Prueba de post hoc de Tukey de las contorsiones abdominales en ratones. Cuadro 7. 35 Evaluación del promedio del número de Arcadas y contorsiones abdominales inducida con ácido acético 0,8%. Cuadro 6. 34 Prueba de post hoc de Tukey de la actividad antiinflamatoria 42 44 INDICE DE GRÁFICOS Pág. Gráfico 1. Inhibición del número de contorsiones inducida con ácido acético 0,8% con diferentes tratamientos. Gráfico 2. Inhibición del número de arcadas inducida con ácido acético 0,8%. Gráfico 3. 38 40 Porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas tratadas con la crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” frente a fármacos de referencia en 4 horas. 43 ABREVIATURAS Park: Parkinson PGs: Prostaglandinas COXs: Ciclooxigenasas PGI2: Prostaciclina LTs: Leucotrieno PAF: Factor activador plaquetario LPS: Lipopolisacarido bacteriano PGG2: Prostaglandina G2 PGH2 : Prostaglandina H2 TXA2 : Tromboxano AINE: Antiinflamatorio no esteroideo msnm: Metros sobre el nivel del mar ECA: Enzima convertidora en angiotensina PEP: Fosfoinolpiruvato PAL: Fenilalanina amonioliasa CNPB: Centro Nacional de Productos Biologicos INS: Instituto Nacional de Salud Ex: Extracto EtOH: Etanolico AN: Antinociceptivo COX-2: Ciclooxigensa - 2 OA: Osteoartritis AR: Artritis reumatoide. I. 1.1. INTRODUCCIÒN Planteamiento del problema: La búsqueda de principios activos para la elaboración de medicamentos ocupa un lugar importante en la investigación. El Perú es un país con una amplia diversidad de recursos vegetales, de las cuales muchas poseen propiedades terapéuticas no comprobadas científicamente. Estas plantas medicinales podrían ser utilizadas como complemento alternativo a diversas patologías; como para el tratamiento del dolor e inflamación. El dolor según la International Asociation for the Study of Pain (IASP) tiene una alta prevalencia y un gran impacto individual, familiar, laboral, social y económico, este aumenta con la edad llegando un 42,6% en mayores de 65 años, que padecen de dolor en las extremidades inferiores, también los jóvenes son más frecuentes de padecer dolores. Así mismo, la inflamación es una respuesta ante una agresión externa que está relacionado con el dolor. Se considera que el dolor, la fiebre y la inflamación, constituyen síntomas cardinales de las enfermedades, lo que ha propiciado la búsqueda sistematizada de sustancias que sean capaces de aliviar o desinflamar estas manifestaciones del organismo por alguna alteración fisiológica; como una experiencia desagradable que alerta al individuo cuando ocurre un daño tisular causado por estímulos químicos, térmicos o mecánicos.1 La presente investigación tiene como finalidad incentivar a la investigación de plantas medicinales y demostrar el usos tradicional en el dolor e inflamación de la especie vegetal Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”, a la que se atribuyen tradicionalmente muchas propiedades medicinales que aún no han sido estudiadas. Uno de los objetivos fundamentales de un Químico Farmacéutico es contribuir con la terapia del dolor e inflamación para mejorar la calidad de vida de las personas, por medio de la atención farmacéutica e investigación. Por lo que, en este trabajo se plantea demostrar el uso tradicional científicamente de la actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. 1 1.2. Formulación del problema ¿Existe Actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones? 1.3. Justificación del problema: El presente trabajo de investigación pretende demostrar el uso tradicional científicamente de la especie vegetal Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”, que presenta actividad farmacológica como: Analgésico y antiinflamatorio. Así mismo, buscar un producto natural que disminuya las complicaciones del dolor e inflamación, presentes en nuestra sociedad. Existen muchos trabajos que han evaluado la actividad antiinflamatoria en extractos vegetales como en metabolitos secundarios aislados de fuentes naturales a través de diferentes modelos farmacológicos tanto in vivo como in vitro.2 Los flavonoides, metabolitos aromáticos, poseen una gran variedad de efectos biológicos en los que sobresale la actividad antiinflamatoria.3 Con los resultados obtenidos por medio de esta investigación, se podrá demostrar científicamente su uso tradicional como alternativa en el tratamiento para el dolor e inflamación, debido a su eficacia, menos reacciones adversas y costo relativamente bajo a un fármaco convencional a pesar de que sus compuestos biológicamente activos son desconocidos. 1.4. Objetivos 1.4.1. Objetivo General: Determinar la actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. 2 1.4.2. Objetivos Específicos: Realizar el análisis cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. Evaluar la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” a diferentes concentraciones (50, 100 y 200 mg/Kg) en ratones. Evaluar la actividad antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” a diferentes concentraciones (5, 10, 20 %) en ratones por vía tópica. 1.5. Variables 1.5.1. Variable dependiente: Actividad analgésica y antiinflamatoria. 1.5.2. Variable independiente: Extracto hidroalcohólico de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” 1.6. Hipótesis El extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” tiene actividad analgésica y la crema formulada actividad antiinflamatoria en ratones. 3 II. 2.1. MARCO TEORICO Antecedentes de la Investigación: 2.1.1. Antecedentes internacionales Pastorello M, Ciangherotti C, Varela M, et al. Venezuela en el año 2012.4 “Actividad antiinflamatorio y analgésico del extracto acuoso de la raíz de Ruellia tuberosa L.” Objetivo: Evaluar el posible efecto antiinflamatorio y analgésico del extracto acuoso de la raíz de Ruellia tuberosa L. en animales de experimentación. Método: Para determinar el efecto Antiinflamatorio de la raíz de Ruellia tuberosa L, se empleó el método de inducción del edema por carragenina en la pata trasera de la rata. Para evaluar el posible efecto analgésico se empleó el método de inducción de dolor visceral a través de la administración de un irritante químico ácido acético glacial 0,6%. Resultado: Ruellia tuberosa L. Inhibió el desarrollo de edema de la pata de la rata inducido por carragenina en un 38,7 y 31,5% a la 1 y 3 h, respectivamente. Asimismo, se observó una disminución en el número de contorsiones inducidas por el ácido acético glacial al 0,6% en ratones, con un efecto máximo de 85,7% de reducción a la dosis de 50 mg/Kg, superando al control positivo de ácido acetil salicílico (64,5%). Conclusión: El presente estudio permite demostrar que el extracto acuoso de la raíz de Ruellia tuberosa L. Posee una potente actividad analgésica y antiinflamatoria en animales de experimentación. Sánchez N, Bu Wong M, Pérez H, et al. En la Habana, Cuba. En el año 2012.5 “Efecto del zumo de Morinda citrifolia L. (noni) en modelos de analgesia”. Objetivo: Evaluar el efecto del zumo de Morinda citrifolia L. (noni) en diferentes modelos de analgesia. Método: Se utilizó el modelo de irritación peritoneal por ácido acético glacial al 0,6%, administrado por vía intraperitoneal a ratones OF1 y se cuantifico durante 30 minutos, el número de contorsiones o estiramientos. Además, se utilizó el modelo del plato caliente y de la retirada de la cola. Resultado: El ensayo de contorsiones inducida por ácido acético glacial al 0,6%, disminuyeron el número de contorsiones o estiramientos de manera dependiente de la dosis, pero significativo con la dosis de 900 y 1800 mg/Kg. En los 4 modelos de plato caliente y de retirada de la cola, solo la dosis más alta prolongó de manera estadísticamente significativa. Conclusión: Se evaluó el efecto analgésico del zumo de Morinda citrifolia L. (noni) en tres modelos. Adeyemi O, Aiqbe F, Uyaiabasi N. En Nigeria, en el año 2011. 6 “Actividad analgésica y antiinflamatoria del extracto acuoso del tallo y hojas de Asystasia gangetica (Linn) T. Anderson”. Objetivo: Evaluar la Actividad analgésica y antiinflamatoria del extracto acuoso del tallo y hojas de Asystasia gangetica (Linn) T. Anderson. Método: El efecto analgésico del extracto acuoso del tallo y hojas se evaluó en ratas y ratones utilizando el modelo de las contorsiones inducidas por ácido acético glacial, el método de la retirada de la cola y el modelo de placa caliente. Su efecto antiinflamatorio se evaluó en ratas utilizando el modelo de edema plantar inducido por carragenina y el modelo de edema en las orejas de los ratones inducido por xileno. Resultado: El extracto acuoso del tallo y hojas redujo el número de retorcimientos en la prueba de contorsiones inducido por ácido acético. El extracto (200 mg/Kg) produjo un efecto inhibidor significativo (p <0,05) comparable a la producida por 1 mg/Kg de dexametasona del modelo de edema en la oreja de ratón inducido por xileno. Conclusión: El extracto acuoso del tallo y hojas de Asystasia gangetica (Linn) T. Anderson, posee actividad analgésica y antiinflamatoria. 2.1.2. Antecedentes nacionales Condeso S, Cuba C, Del Águila C, et al. Perú en el año 2010. 7 “Exploración de la actividad Analgésica y Antiinflamatoria de las hojas de Maytenus Macrocarpa (chuchuhuasi) mediante el Test de Formalina”. Objetivo: Determinar la actividad analgésica y antiinflamatoria en ratas albinas, mediante el Test de Formalina. Método: Se administró formalina en la pata trasera de la rata, se observó las conductas de lamidas, y conteo del tiempo en dos fases. Resultado: Se observó un periodo de latencia máxima y tiempo de lamidas mínimo en la fase uno, de las hojas de Maytenus Macrocarpa (chuchuhuasi) a dosis de 750 mg/Kg, con 1000 mg/Kg fue de 126 y 8,5 segundos respectivamente. Conclusión: Se 5 confirmó la acción analgésica y antiinflamatoria de las hojas de Maytenus Macrocarpa (chuchuhuasi), a dosis de 750 y 1000 mg/Kg mediante el test de Formalina en ratas albinas, siendo más eficaz a dosis de 750 mg/Kg. Amorós A, García C, Hernández C, Sandoval A, et al. Perú en el año 2010.8 “Evaluación del Efecto Analgésico y Antiinflamatorio del Pan de árbol “Artocarpus Altilis” en animales de experimentación”. Objetivo: Evaluar los efectos antiinflamatorios y analgésicos en animales de experimentación. Método: Para el Efecto Antinflamatorio usaron 50 ratas albinas machos de 200 a 250 g de peso. Para el Efecto analgésico: Se emplearon 50 ratones. Se utilizó la técnica de contorsiones abdominales. Las dosis empleadas fueron de 500, 1000 y 1500 mg/Kg para ambas actividades. Resultado: El mejor Efecto Analgésico se observó a dosis de 1500 mg/Kg en relación al control. La dosis de 1500 mg/Kg presentó un buen efecto antiinflamatorio a partir de la primera hora de administración vía oral, superior a la observada con el Diclofenaco. Conclusión: Pan de árbol “Artocarpus altilis” tiene Efecto Analgésico a dosis dependiente y Efecto Antiinflamatorio superior al observado con el Diclofenaco a dosis de 1500 mg/Kg. Vargas C. En Lima, Perú. En el año 2007.9-10 “Estudio de la Actividad cicatrizante y Antiinflamatoria del extracto alcohólico de las hojas de Senna reticulata (Willd) H. Irwin & barneby (Retama)”. Objetivo: Determinar la actividad antiinflamatoria y cicatrizante en el extracto etanólico de las hojas de Senna reticulata (Willd) H. Irwin & barneby “Retama”. Método: Para la actividad Antiinflamatorio, se utilizó el modelo de edema auricular inducido por xilol (Cyted, 1995). Para la Actividad Cicatrizante se empleó el modelo de lesión inducida en el lomo de ratón (vaisberg y col, 1989). Resultado: El análisis de varianza del efecto antiinflamatorio en ratones al aplicar la crema con el extracto etanólico vía tópica, no presenta diferencias significativas entre las medias (p=0,646 >0,05) y según la prueba de Tukey para la actividad cicatrizante muestra diferencias significativas. Conclusión: El extracto etanólico de las hojas de Senna reticulata (Willd) H. Irwin & barneby “Retama”, no presenta actividad antiinflamatoria significativa por vía tópica. La crema con el 6 extracto etanólico al 20% de las hojas de “Retama”, presenta actividad cicatrizante. 2.2. Bases teóricas: 2.2.1. Inflamación.11 La inflamación fue descrita por Celsius en el año 10 antes de Cristo como enrojecimiento e inflamación con calor y dolor. El proceso inflamatorio puede ser provocado por numerosos estímulos como agentes biológicos, isquemia, interacciones antígeno - anticuerpo, lesiones térmicas o fisicoquímicas. Esta respuesta está acompañada con tumefacción (edema), rubor, calor, dolor espontaneo a la palpación y desorden de la función tisular. La inflamación ocurre en tres fases distintas, por diferentes mecanismos: 1. Una fase transitoria aguda, caracterizada por vasodilatación local, hiperemia activa e incremento en la permeabilidad capilar. 2. Una fase subaguda tardía, visiblemente caracterizada por un periodo de hiperemia pasiva, infiltración de leucocitos y fagocitos. 3. Una fase proliferativa crónica, en el cual ocurre degeneración de tejidos, lesión endotelial y fibrosis.12 La inflamación es una respuesta a un estímulo específico, mediada por diferentes señales bioquímicas y fisiológicas. Los mediadores pertenecen a diferentes clases químicas como aminas biógenas (histaminas, serotonina), proteínas y péptidos (enzimas hidrolíticas, citoquinas, factores de crecimiento, factores activadores de colonia, factores de complemento, anticuerpos, quininas), especies reactivas de oxigeno (anión superóxido, hidroperóxido, radicales hidroxilos), y lípidos (factores activadores de plaquetas, prostanoides, leucotrienos). Estos mediadores inician, mantienen, agravan y modulan el curso inflamatorio.11 2.2.1.1. Las Prostaglandinas (PGs).11 Son una mezcla de ácidos liposolubles, conocidos por las siglas PG seguida de la letra E, F, A o B y un índice numérico que puede ser seguido de una letra griega. Las prostaglandinas son reguladores bien conocidos del crecimiento de la célula. Se sintetizan a partir del ácido 7 araquidónico por la acción de diferentes enzimas como las ciclooxigenasas (COXs).13 La vía por la cual el ácido araquidónico se metaboliza a eicosanoides depende del tejido, del estímulo y de la presencia de inductores o inhibidores endógenos y farmacológicos.14 Las prostaglandinas constituyen una parte de productos fisiológicamente activos del metabolismo del ácido araquidónico, permitio el descubrimiento del tromboxano A2 (TXA2), de la prostaciclina (PGI2) y de los leucotrienos (LTs).15 El sistema enzimático central de la biosíntesis de prostaglandinas es la prostaglandina G/H sintasa (PGS), bifuncional que cataliza la ciclación oxidativa de los ácidos grasos poliinsaturados. El ácido araquidónico proviene de los fosfolípidos de membrana por acción de la hidrolasa fosfolipasa A2. Este paso de rotura es el paso limitante de velocidad en la síntesis de prostaglandinas, y ciertos agentes que estimulan la producción de prostaglandinas lo hacen estimulando la actividad de la fosfolipasa A2. Existen dos formas de ciclooxigenasa (COX) o prostaglandina G/H sintasa (PGS). La COX - 1, o PGS - 1, es una enzima constitutiva que se encuentra en la mucosa gástrica, las plaquetas, el endotelio vascular y el riñón. La COX - 2, o PGS - 2 es inducible, y se genera en respuesta a la inflamación. La COX - 2 se expresa principalmente en macrófagos activados y en monocitos cuando son estimulados por el factor activador plaquetario (PAF), la interleuquina - 1, o el lipopolisacarido bacteriano (LPS), y en las células del musculo liso, células epiteliales ,endoteliales y neuronas. La inducción de la PGS - 2 es inhibida por los glucocorticoides. Las dos formas de PGS catalizan la oxigenación del ácido araquidónico a PGG 2 como la reducción de la PGG2 a PGH2.16 Los glucocorticoides atraviesan la membrana citoplasmática y interactúa con los receptores específicos en el citoplasma, produciendo un cambio en la conformación y facilitando su translocación al interior del núcleo celular afectando la transcripción de genes, por ende su acción no es inmediata y su efecto se observa en un tiempo mayor después de su administración. 8 Figura 1. Reacción de la ciclooxigenasa.16 Figura 2. Conversión de la PGG2 en PGH2; reacción de la PG hidroperoxidasa (PGH sintasa).16 Las prostaglandinas tienen una vida media muy corta. Poco después de su liberación son captadas rápidamente por células en donde son inactivadas, bien por oxidación del grupo hidroxilo en C-15 bien por β-oxidación a partir del extremo carboxilo de la cadena.16 Figura 3. Síntesis del TXB2 a partir de PGH2.16 9 Ó Figura 4. Ruta principal de la biosíntesis de las prostaglandinas.16 10 La producción de prostaglandina es inhibida por agentes antiinflamatorios esteroideos y no esteroideos. Los agentes no esteroideos (NSAID), bloquean la producción de prostaglandinas al inhibir irreversiblemente a la enzima ciclooxigenasa. hidrocortisona, Los fármacos prednisona y antiinflamatorios betametasona, esteroideos, bloquean la como la liberación de protaglandinas al inhibir la actividad de la fosfolipasa A 2, con lo cual interfieren en la movilización del ácido araquidónico. El paso limitante de la velocidad de la síntesis de prostaglandinas es la liberación de ácido araquidónico de los depósitos de los fosfolípidos de membrana en respuesta a la activación de la fosfolipasa A2.16 Inhibido por los antiinflamatorios esteroides Fosfolípidos Fosfolipasa A2 Acido araquidónico Ciclooxigenasa Prostaglandinas Inhibido por los antiinflamatorios no esteroideos. Figura 5. Sitios de acción de inhibidores de la síntesis de prostaglandinas.16 2.2.2. Dolor.17 La Asociación Internacional para el Estudio del Dolor define al dolor como "una experiencia sensitiva y emocional desagradable, asociada a una lesión tisular real o potencial". La percepción del dolor consta de un sistema neuronal sensitivo (nocioceptores) y unas vías nerviosas aferentes que responden a estímulos nocioceptivos tisulares; la nociocepción puede estar influida por otros factores (psicológicos). 11 2.2.2.1. Tipos de Dolor.17 1. Según su duración: a. Agudo: Limitado en el tiempo, con escaso componente psicológico. Constituyen la perforación de víscera, el dolor neuropático y el dolor musculo esquelético en relación a fracturas patológicas. b. Crónico: Ilimitado en su duración, se acompaña de componente psicológico. Es el dolor típico del paciente con cáncer. 2. Según su patogenia: a. Neuropático: Producido por estímulo directo del sistema nervioso central o por lesión de vías nerviosas periféricas. Se describe como punzante, quemante, acompañado de parestesias y disestesias, hiperalgesia, hiperestesia y alodinia. Ejemplo: La plexopatía braquial o lumbo - sacra post - irradiación, la neuropatía periférica post - quimioterapia y post radioterapia y la compresión medular. b. Nocioceptivo: Este tipo de dolor es el más frecuente y se divide en somático y visceral. c. Psicógeno: Interviene el ambiente psico - social que rodea al individuo. Es típico la necesidad de un aumento constante de las dosis de analgésicos con escasa eficacia. 3. Según la localización: a. Somático: Se produce por la excitación anormal de nocioceptores somáticos superficiales o profundos (piel, musculo esquelético, vasos, etc). Es un dolor localizado, punzante y que se irradia siguiendo trayectos nerviosos. El más frecuente es el dolor óseo producido por metástasis óseas. El tratamiento debe incluir un antiinflamatorio no esteroideo (AINE). b. Visceral: Se produce por la excitación anormal de nocioceptores viscerales. Este dolor es continuo y profundo. Asimismo puede irradiarse a zonas alejadas al lugar donde se originó. Frecuentemente se acompaña de síntomas neurovegetativos. Son ejemplos de dolor 12 visceral los dolores de tipo cólico, metástasis hepáticas y cáncer Pancreático. Este dolor responde bien al tratamiento con opioides. 4. Según el curso: a. Continuo: Persistente a lo largo del día y no desaparece. b. Irruptivo: Exacerbación transitoria del dolor en pacientes bien controlados con dolor de fondo estable. 5. Según la intensidad: a. Leve: Puede realizar actividades habituales. b. Moderado: Interfiere con las actividades habituales. Precisa tratamiento con opioides menores. c. Severo: Interfiere con el descanso. Precisa opioides mayores. 6. Según la farmacología: a. Responde bien a los opiáceos: Dolores viscerales y somáticos. b. Parcialmente sensible a los opiáceos: Dolor óseo (además son útiles los AINE) y el dolor por compresión de nervios periféricos (es conveniente asociar un esteroide). c. Escasamente sensible a opiáceos: Dolor por espasmo de la musculatura estriada y el dolor por infiltración - destrucción de nervios periféricos (responde a antidepresivos o anti convulsionantes). Figura 6. Escala analgésica del dolor según la O.M.S.17 13 Pacientes con dolor leve inician tratamiento con fármacos como el Paracetamol, ácido acetilsalicílico u otros analgésicos antiinflamatorios no esteroideos (primer escalón). Estos agentes presentan techo terapéutico: Una vez alcanzada la dosis máxima recomendada, el incremento de la dosis no produce mayor analgesia. La Sociedad Americana del Dolor recomienda que todos los regímenes analgésicos deben incluir un fármaco no opioide aunque el dolor sea suficientemente intenso como para añadir un analgésico opioide.17 El dolor moderado se puede beneficiar de un tratamiento con opioides menores como la codeína. Se utilizan conjuntamente con analgésicos no opioides, ya que pueden ser aditivos o sinergistas. Los opiáceos actúan a través de receptores en el sistema nervioso central, mientras que los analgésicos no opioides ejercen su acción en la periferia (segundo escalón).17 Los enfermos con dolor severo necesitan tratamiento con opioides mayores como la morfina, fentanilo y la oxicodona de liberación retardada (tercer escalón). Los agonistas puros (morfina, metadona y fentanilo) no tienen techo analgésico a diferencia de los agonistas parciales (buprenorfina).17 Cuando no se obtiene una analgesia adecuada con opioides sistémicos, debe considerarse el cuarto escalón que incluye procedimientos como la analgesia continua espinal o epidural, bloqueo de nervios periféricos, bloqueo simpático, etc.17 Los coadyuvantes aumentan la eficacia analgésica, se utilizan en el manejo de síntomas concurrentes que exacerban el dolor y para tipos específicos de dolor como el neuropático.17 2.2.2.2. Analgésicos no opiáceos.18 Son fármacos que se utilizan para el dolor leve y moderado. A pesar de que solamente algunos están indicados en analgesia, todo los AINES presentan acciones antiinflamatorias, analgésicas y antipiréticas, en mayor o menor grado, a dosis terapéuticas no han demostrado tolerancia y tienen efecto techo antialgico, por lo que aunque se 14 aumente la dosis por encima de las máximas, no se obtiene mayor analgesia y si se potencian sus efectos tóxicos.19 Como el paracetamol: Inhiben la síntesis de eucosanoides inhibiendo la enzima ciclooxigenasa responsable para la transformación del ácido araquidónico en PGG2 etapa indispensable en la formación de prostaglandinas, prostaciclina y tromboxano.19,20 El Paracetamol es un analgésico para aliviar dolores musculares, articulares, menstruales, de espalda, garganta, cefaleas y combate la fiebre, aunque a diferencia del ácido acetilsalicílico, no posee propiedades antiinflamatorias. En dosis adecuadas no suele presentar efectos secundarios. No altera la coagulación, ni la mucosa gástrica y por lo general, no produce reacciones alérgicas. No obstante, existen contraindicaciones para ciertos casos. Una sobredosis de paracetamol puede provocar daños importantes en el hígado, incluso puede llegar a ser mortal.20 Cuadro 1. Uso del paracetamol analgésico no opiáceo.21 Analgésico Dosis habitual Paracetamol 500 1000 mg Intervalo – 4-6 horas Dosis máxima Ventajas 4000 mg No tiene actividad antiinflamatoria. / día No causa gastropatía ni nefropatía. A dosis habitual no es hepatotóxico. 2.2.2.3. Analgésicos opioides.21 Los opiáceos son compuestos derivados del opio, del cual se ha aislado más de 20 alcaloides y el más activo es la morfina. La morfina y otros alcaloides naturales del opio han dado lugar a una gran cantidad de compuestos que comparten total o parcialmente sus propiedades analgésicas. Los opiáceos actúan interaccionando con receptores situados en el sistema nervioso central como en el periférico, pertenecientes al 15 sistema opioide endógeno que fisiológicamente a través de péptidos opioides endógenos, regulan la transmisión nociceptiva. analgésicos opioides son considerados medicamentos Los altamente efectivos para el control del dolor agudo, crónico no maligno y crónico oncológico.22 Cuadro 2. Uso de los analgésicos opiáceos.21 Opioide Tramadol Dosis T. inicial máxima 50 Clorhidrat mg Intervalo - 100 2 horas vía 1 hora Reacciones Adversas medicamentosas. 6 - 8 horas Menor constipación 6 horas sedación, y deprime o oral. escasamente el centro (opioide 100 - 150 respiratorio débil). mg tolerancia vía parenteral. lentamente y crea más que la morfina. Cardiotoxicidad: Aumenta la frecuencia cardiaca y la presión arterial. A altas dosis deprime la contractilidad. T. máximo: Tiempo en que tarda en alcanzar la concentración máxima. 2.2.3. Piel 23 La piel es el órgano sensorial primario encargado de registrar el dolor, la temperatura y la presión ejercida en la superficie corporal, protege a los tejidos y órganos situados debajo de ella para no ser expuestos al aire o al agua u otros agentes como las radiaciones solares, microorganismos patógenos. Los Dermatólogos, definen la piel como: “La piel humana proporciona al organismo protección mecánica frente a los agentes externos, por la resistencia de su estrato córneo y por el conjunto de fibras colágenas y elásticas que la integran. Está encargada de regular la absorción de 16 sustancias; interviene como barrera a nivel epidérmico, y regula el medio interno, manteniendo constante la temperatura y la composición fisicoquímica del cuerpo humano”. Desde afuera hacia dentro, se distinguen tres capas de tejido, cuyo origen embriológico es totalmente distinto, perteneciendo cada capa a una capa embriológica diferente: 1. La epidermis. 2. La dermis o corion. 3. El tejido subcutáneo o también denominado hipodermis o subcutis. Figura 7. Esquema de las capas de la piel.23 2.2.3.1. Componentes de la piel.23 1. Epidermis: Está formada por el epitelio plano estratificado queratinizado o cornificado, denominado “queratinocitos” especializado en sintetizar filamentos de queratina, proteína sulfatada que le proporcionan cierta rigidez, dureza y semi impermeabilidad. Dependiendo del espesor de la epidermis la piel es gruesa o delgada. La piel gruesa 17 se localiza en la palma de las manos y en las palmas de los pies. La piel delgada ocupa todo el resto de la cubierta corporal. 2. Dermis: Es el componente conjuntivo de la piel. Constituida por dos estratos de tejido conjuntivo de la piel. Está constituida por dos estratos de tejido conjuntivo fibroso unidos entre sí. El estrato más superficial se denomina papilar y el más profundo, reticular. 2.2.4. Estudio botánico de la especie vegetal Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” 2.2.4.1. Familia Moraceae (Moraceas).24 La familia se distribuye en las regiones tropicales y templadas de todo el mundo, siendo originaria de Indonesia y Polinesia, pero su diversidad se centra en los trópicos. La familia está con una asombrosa diversidad de estructuras inflorescencias complejas, síndrome de polinización, los sistemas de cría y formas de crecimiento en la familia ha complicado su taxonomía a nivel tribal y por debajo.25 La familia comprende aproximadamente 37 géneros y 1050 especies, incluyendo varias especies económica y ecológicamente importantes, como árbol de fruta de Pan (Artocarpus altilis), mora Turca (Broussonetta papynfera Vent.), y los higos (Ficus L).24 En Perú, de la familia Moraceae se conocen 19 géneros y 128 especies, la mayoría arbóreas y/o hemiepífitos. De las cuales dos especies endémicas en igual número de géneros. Se encuentran en la región Bosques Húmedos Amazónicos, entre los 115 y 220 m de altitud. Ambas especies endémicas se encuentran dentro del Sistema Nacional de Áreas Naturales Protegidas por el Estado.26 2.2.4.2. Genero Artocarpus. 24 En 1976, en el barco Bounthy, a cargo del capitán William Blight, los ingleses llevaban a las Antillas el “árbol de fruta de Pan”, que 18 trasladaban desde Polinesia. Este barco naufrago y el “árbol de fruta de Pan” no pudo llegar a América. En un segundo intento, el 1793, las plantas llegaron al fin a las Antillas donde se aclimataron y desde donde se extendieron a toda las regiones tropicales incluyendo parte de Ecuador. Artocarpus es un género Pantropical con numerosas especies nativas del bosque húmedo de Malasia, Indonesia, Filipinas y Melanesia. Mientras que solamente Artocarpus altilis y Artocarpus hetheropillus son ampliamente cultivadas fuera de sus áreas de distribución natural, muchas otras especies producen frutos comestibles y no moderables; y otros moderables de alta calidad.27 El género Artocarpus se conoce por producir un gran número de metabolitos secundarios y es específicamente rica en fenilproPanoides tales como flavonoides y flavonas. Artocarpus altilis (árbol de fruta de Pan), tiene más de 130 compuestos identificados en varios órganos del árbol, más de 70 de los cuales se derivan de la ruta de fenilproPanoides.24 Varios estudios han sugerido que las plantas son fuentes potenciales de agente antioxidante natural que juegan un papel importante en la salud humana, tales como la prevención de los daños oxidativos y reducir los riesgos de enfermedades crónicos. La especie Artocarpus altilis “árbol de fruta de Pan”, deriva su nombre por su sabor semejante al Pan, y porque en algunos países tropicales es usado como sustituto de este producto. Es un alimento energético con un porcentaje alto de carbohidratos (20 a 35 %), rico en calcio, hierro, fosforo y vitaminas C y B. Cuando se hace relación a los árboles que son una verdadera fuente de vida, se tiene que incluir, necesariamente al “árbol del Pan”, por su utilidad e importancia como: Alimento humano y animal, planta ornamental, medicinal, protectora de aguas y suelos, maderable, fuente de fibra, y como origen de tantos otros beneficios que le han dado visa de residente en muchos de los países tropicales del mundo. 28 19 2.2.4.3. Descripción botánica de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg. Los arboles de fruta de Pan son grandes entre 15 a 20 metros de altura y un diámetro a veces más de 0,60 m; de hojas perennes follaje persistente en el árbol durante todo el año; las hojas son alternas, con estipulas elípticas recortadas de siete a once lóbulos, de grandes dimensiones pueden llegar a tener de 30 a 90 cm de longitud. La cara superior de la hoja es glabra salvo en la proximidad de las nervaduras principales. El árbol tiene una corteza lisa, de color claro, pudiéndose volverse oscuro por la exposición al aire; y el tronco puede ser de hasta 1,2 m de diámetro, a veces crece hasta una altura de 4 m antes de ramificar. El látex está presente en todas las partes del árbol. Dos estipulas grandes encierran la yema terminal.29 División: Magnoliophyta. Clase: Magnoliopsida. Subclase: Hamamelididae. Orden: Urticales. Familia: Moraceae. Género: Artocarpus. Especie: Artocarpus altilis (Park.) Fosberg. Nombre Vulgar: Pan de árbol. Las hojas son gruesas y cortaceas con una parte superior de color verde oscuro brillante. La parte inferior es oscura con un nervio central elevado y venas profundas. Las hojas varían en tamaño y forma incluso en el mismo árbol, mayoritariamente van de ovaladas a obovadas. Las hojas son a veces suaves, pero a menudo están cubiertos de unos pocos a muchos pelos de color rojizo pálido, especialmente en el nervio central y las venas.29 El fruto es una estructura altamente especializada, un sincarpo, están unidas al eje de la fruta o núcleo de 1500 - 2000 flores. El núcleo contiene numerosos tubos de látex y haces vasculares grandes que se decoloran rápidamente en un pequeño corte, debido a la actividad 20 enzimática oxidativa. La mayor parte de la fruta se forma a partir del perianto persistente de cada flor. A medida que el fruto se desarrolla, el perianto crece vigorosamente y se convierte en carnoso en la madurez, que forma la porción comestible de la fruta. La corteza dura de la fruta se compone de cinco discos de siete lados, cada uno de la superficie de una flor individual. La corteza es generalmente teñida con exudaciones del látex en la madurez. Presenta pequeñas espinas en toda la corteza.29 2.2.4.3.1. Hábitat y distribución.24 Crece de manera óptima en las zonas Ecuatoriales y tropicales, pero pueden crecer en zona de climas templados con inviernos muy suaves. Se encuentra en tierras de alturas situadas por debajo de los 600 - 650 msnm, pero podría vivir hasta los 1,550 msnm sin dificultades, si se trata de una zona de clima cálido, en cuanto al régimen de irrigación, requiere un riego anual. La estación lluviosa del árbol de Pan debe ser el verano preferiblemente, y que el calor, combinado con la lluvia abundante y la humedad ayuda que la planta crezca. Las condiciones del suelo necesarias para el correcto crecimiento de las plantas son de arena, franco arenoso o franco. Esta planta crece mejor a temperatura 21 - 32 °C. El suelo debe ser neutral en condiciones, a un pH 7,4 a 6,1. 2.2.4.3.2. Etnofarmacología.24 Las flores se frotan en las encías alrededor de los dientes para aliviar el dolor. El Látex para el tratamiento de dolores de huesos y esguinces; enfermedades por hongos como la candidiasis. Se toma látex diluido internamente para tratar la diarrea, dolor de estómago y la disentería. Hojas machacadas para tratar hongos. Látex y el jugo de las hojas trituradas son a la vez tradicional utilizados en las islas del Pacífico para tratar infecciones del oído. 21 La raíz es un astringente y se usa como un purgante; macerado es utilizado como una cataplasma para enfermedades de la piel. La corteza se utiliza en varias islas del Pacífico para tratar el dolor de cabeza. Las hojas se usan en Taiwán para el tratamiento de las enfermedades del hígado y fiebres, y el extracto de las flores es eficaz para el tratamiento de edema de la oreja. Extractos de corteza mostraron fuerte actividad citotóxica contra las células de leucemia en cultivo de tejidos, y extractos de las raíces, tallo y cortezas mostraron alguna actividad antimicrobiana frente a bacterias Gram positivas. 2.2.4.3.3. Uso farmacologico.24 Actividades farmacológicas de Artocarpus antiinflamatoria, potente antifúngico, estudia el sexual, actividad antibacteriana, inmunomodulador, efectos altilis. comportamiento antidiabético, anticolinérgicos, Actividad actividad actividad quelante, evaluación nutricional como agente cosmético, inhibidores de la ECA, actividad antioxidante, toxicidad para las células cancerosas, Antihelmíntico, regulamiento de los estrógenos y la inhibición de la biosíntesis de melanina. El nombre genérico de la especies proviene de las palabras griegas "artos" (Pan) y 'karpos' (fruta) y los frutos se consumen y son llamados comúnmente árbol del Pan. Sinónimos de Artocarpus altilis son Artocarpus communis y Artocarpus incisos. Metabolitos de Artocarpus altilis, se encuentran en extractos de hojas, tallos, frutos y la corteza que contienen compuestos biológicamente activos utilizados en las diversas actividades.28 2.2.4.3.4. Componentes fitoquímicos de Artocarpus altilis.30 El género Artocarpus puede producir un gran número de metabolitos secundarios generalmente rica en fenilproPanoides, tales como flavonoides y flavonas. También produce compuestos fenólicos incluyendo flavonoides, y estilbenoides arylbenzofurons. Más de 130 compuestos se identifican en diversos órganos del 22 árbol de Artocarpus altilis, más de 70 de los cuales derivado de la vía fenilproPanoide. El extracto metanólico, acetato de etilo y éter de petróleo de hoja de Artocarpus altilis tiene esteroides, fitosteroles, gomas y resinas. Además, los otros constituyentes presentes en el extracto de hoja, 72,5% son aminoácidos, ácidos grasos 68,2% y 81,4% de carbohidratos, aminoácidos esenciales como cistina, arginina, histidina, leucina, lisina, treonina, metheonine, triptófano, sacarosa y ácidos grasos . Calcio, hierro y sodio son los minerales del Pan de árbol. 2.2.4.3.5. Actividad biológica de Artocarpus altilis. A. Agente antioxidante. Horng - Huey et al. (2013). Evaluó las actividades antioxidantes de flavonoides aislados de la corteza de Artocarpus altilis incluyendo sus efectos inhibidores sobre la tirosinasa de champiñón y la biosíntesis de melanina in vitro. Concluyeron que estos flavonoides son adecuados como antioxidantes y blanquean la piel. Sin embargo, nuevas investigaciones son requeridos para determinar sus mecanismos de acción.31 B. Agente antimicrobiano Chinmay et al. (2013). Investigó la actividad antimicrobiano de extractos de hojas Artocarpus altilis en diferente medios de solvente (éter de petróleo, metanol y acetato de etilo). Se concluyó que el extracto de metanol de la hoja Artocarpus altilis tiene mayor actividad antimicrobiana, mientras que el éter de petróleo y acetato de etilo mostraron mejor efectividad a bajas concentraciones.32 23 2.2.5. Flavonoides 2.2.5.1. Estructura molecular de las flavonas Es el término genérico con que se identifica a compuestos polifenolicos caracterizados por una estructura química basada en un esqueleto C6 C3 - C6, esto es un anillo bencénico unido a una cadena propánica y esta a su vez a otro anillo bencénico.33 Figura 8. Estructura química de un flavonoide.33 Dependiendo del grado de saturación y patrón de sustitución de grupos funcionales en la estructura base, da lugar a flavonoides con designaciones comunes como flavonoides, flavonas, chalconas, auronas, isoflavonoides, etc.; así como a sus derivados glicosidados que portan moléculas de azucares e incluso derivados ácidos de azucares. Suelen encontrarse también parcialmente polimerizados dando lugar a dímeros, trímeros, etc; hasta formar complejos multienlazados como los taninos condensados.33 Estos compuestos se encuentran de manera natural en los alimentos que consumimos, particularmente en los vegetales. En general el sabor que aportan a los alimentos suele ser amargo llegando incluso a provocar sensaciones de astringencia dependiendo de lo condensado que sean los taninos.33 24 2.2.5.2. Distribución de los flavonoides.33 Los flavonoides se encuentran en todo los vegetales superiores al estado libre y de glucósidos. Por hidrolisis se desdoblan en materias colorantes como flavonicas y en azucares (glicosidos pigmentarios) constituyendo la mayor parte de los colorantes amarillos de las flores, hojas y frutos. 2.2.5.3. Características de los flavonoides.33 Los flavonoides o bioflavonoides son pigmentos vegetales no nitrogenados. Su función dentro del mundo de las plantas parece ser la de atraer a los polinizadores hacia las flores o los animales que comen los frutos con la intensión de que puedan dispensar mejor las semillas. Muchas veces los flavonoides son la respuesta adaptativa de las plantas a la intensa radiación ultravioleta. Estos componentes protegen a las plantas de los efectos nocivos de estos rayos solares. Algunos dan color amarillo y el nombre general a principios fue Queflavus en latín significa “amarillo”. De este nombre deriva la palabra Flavonoide. 2.2.5.4. Biosíntesis Proceden del metabolismo secundario de los vegetales a través de la ruta del ácido shikimico (anillo B y C) y la ruta de los policeticos (anillo A). 25 Figura 9. Ruta de biosíntesis de flavonoides en las plantas. 33 26 La vía del ácido shikimico se inicia en los plastos por condensación de dos productos fotosintéticos, 4 - P con el fosfoenolpiruvato (PEP), y por diversas modificaciones se obtiene el ácido shikimico, del cual derivan directamente algunos fenoles en los vegetales. La vía del ácido shikimico normalmente prosigue, y la incorporación de una segunda molécula de PEP conduce a la formación de fenilalanina. La vía sintética de los flavonoides comienza cuando la fenilalanina, por acción de la enzima fenilalanina amonioliasa (PAL) se transforma en acido cinámico, que luego es transformado en acido p - cumarinico por incorporación de un grupo hidroxilo a nivel de anillo aromático, y la acción de una CoA ligasa lo transforma en cumaril - SCoA, el precursor de la mayoría de los fenoles de origen vegetal, entre los que se encuentran los flavonoides. 2.2.5.5. Flavonoides y salud.33 Los flavonoides o bioflavonoides son pigmentos naturales presentes en los vegetales y que nos protegen del daño de los oxidantes; la polución ambiental, con la presencia de minerales tóxicos; las sustancias químicas presentes en los alimentos: Colorantes, conservantes, etc; como el organismo humano no puede producir estas sustancias químicas debemos obtenerlas de la alimentación o en forma de suplementos. No son considerados por los nutricionistas como vitaminas, sin embargo los Flavonoides actúan protegiendo la salud: Limitan la acción de los radicales libres (oxidantes) reduciendo el riesgo de cáncer y enfermedades cardiacas, mejoran los síntomas alérgicos y de artritis, aumenta la actividad de la vitamina C, refuerzan los vasos sanguíneos, bloquean la progresión de las cataratas y la degeneración macular. 27 III. 3.1. PARTE EXPERIMENTAL Diseño metodológico. 3.1.1. Tipo de investigación: Según Nivel o Alcance: Experimental básico. Según Estrategia: Prospectivo. Según Tendencia: Transversal. Según Propósito: Aplicada. 3.1.2. Diseño de la investigación 3.2. Experimental. Materiales 3.2.1. Materiales para el estudio cualitativo Tubos de ensayo 13 x 10 mL. Gradilla de metal. Pipeta de 1, 2, 5 y 10 mL. Beacker 250 mL y 1L. Cocinilla eléctrica modelo: SB302 Stuart Equipment, serie: CB302. Propipeta de goma. Baqueta de vidrio. Espátula de metal. Asperjador con bombilla. Cubas cromatográficas 10 x 10 cm y 25 x 25 cm. Probeta de 100 mL. Balanza analítica (Modelo: Sartorius; Serie: TE2145). Estufa (Modelo: Memmert). CamPana extractora (Modelo: KtPeru; Serie: CL - 1000). Espectrofotómetro UV- Visible a 280 nm (Modelo: BioSpec mini. Serie: A11S146000028). Lámpara UV (Modelo 4305M/MH). 28 3.2.2. Materiales para el estudio farmacológico: Balanza para pesar ratones. Jaulas de plástico para ratones. Sonda orogástrica N°18 para ratones. Placa petri de vidrio. Sacabocado 6 mm de diámetro. Balanza analítica (Modelo: Sartorius; Serie:TE2145) 3.2.3. Material biológico: Ratones cepa BalB/C53/CNPB 3.2.4. Material vegetal: Extracto hidroalcohólico de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. 3.3. Muestra 3.3.1. Muestra vegetal. Se utilizó 4 Kg de hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” del Departamento de Junín, Provincia Chanchamayo, Distrito Pichanaki. Las hojas fueron sometidas a una limpieza, eliminación de partículas extrañas, se lavó con agua a presión y posteriormente con alcohol al 70%. Se protegió de la radiación solar directa, polvo, etc. Se pesó todo el material recolectado, obteniendo un peso de 4 Kg. Posteriormente se realizó una maceración hidroalcohólico por 7 días. 3.3.2. Muestra biológico. Se emplearon 120 ratones albinos Balb/C53/CNPB de 25 - 30 g de peso corporal provenientes del Bioterio del Instituto Nacional de Salud en Chorrillos (INS), con 7 días de aclimatación, (12 horas de luz y 12 horas de oscuridad). 29 3.4. Métodos 3.4.1. Preparación del extracto hidroalcohólico de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. Se pesaron 4 Kg de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” y se macero en alcohol etílico al 70 % durante 7 días, con agitación diaria, en un frasco de vidrio color ámbar. Posteriormente, se realizó el filtrado por gravedad de la solución para eliminar el solvente y obtener un extracto seco, primero con gasa y luego con papel filtro rápido y lento hasta obtener una solución transparente. El filtrado se colocó en una fuente de vidrio para evaporar el alcohol y obtener el extracto seco utilizando para ello secadoras eléctricas. Se dejó concentrar la muestra en la estufa por 5 días. Finalmente, se coloca el extracto en un frasco pequeño color ámbar protegido de la luz y la humedad. Obteniéndose un rendimiento de extracto seco de 300 g. 3.4.2. Prueba de solubilidad y análisis cualitativo. 3.4.2.1. Prueba de solubilidad Se tomó 20 mg del extracto de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” y se colocó en 11 tubos de ensayo para añadir a cada uno 1 mL de disolvente de diferente polaridad. 3.4.2.2. Análisis cualitativo Se pesó 20 mg de extracto de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”, se solubilizo en su solvente soluble metanol. Se colocó 1 mL del extracto y se colocó gotas del reactivo, donde se identificó los metabolitos primarios y secundarios por coloración y precipitación.34 30 3.4.3. Análisis farmacológico 3.4.3.1. Actividad analgésica. Se utilizó el método de Koster y Col. Modificado.35 Modelo de contorsiones abdominales por ácido acético glacial al 0,8%. Se usaron 64 ratones albinos de cepa BalB/C53/CNPB de 25 - 30 g de peso corporal; 24 horas antes de realizar el experimento se retiró el alimento. Se distribuyó de forma aleatoria en 8 grupos de 8 ratones. Grupos experimentales: 1. Control negativo. Agua destilada 2. Control positivo. Ácido acético glacial al 0,8% 3. Ex - EtOH 50 mg/Kg. 4. Ex - EtOH 100 mg/Kg. 5. Ex - EtOH 200 mg/Kg. 6. Paracetamol 300 mg/Kg. 7. Tramadol 40 mg/Kg. 8. Oxicodona 20 mg/Kg. Se indujo un efecto protector, por sonda nasogástrica (vía oral), 60 minutos antes de administrar el irritante ácido acético glacial 0,8% por vía Intraperitoneal a dosis de 0,1mL por cada 10g de peso corporal. Seguidamente, Se cuantificó las contorsiones abdominales y arcadas durante 20 minutos. La contorsión abdominal es la contracción de la musculatura abdominal con una elongación y estiramiento de las extremidades posteriores. Las arcadas son movimientos violentos del estómago, que inducen al vomito. Los resultados se expresaron como porcentaje de actividad anti nociceptiva (% AN). % AN = 100 – Contorsiones de los ratones con tratamiento * 100 Contorsiones de los ratones sin tratamiento 31 3.4.3.2. Actividad antiinflamatoria. Se utilizó el método de edema auricular por un agente irritante xilol al 6% diluido en acetona. Esta técnica consistió en la inducción de inflamación por la aplicación de xilol, agente irritante produciendo un daño neuronociceptivo en el pabellón de la oreja del ratón. La evaluación se determinó por la medición de la respuesta inflamatoria que se traduce por el aumento de peso en el área lesionada por el agente químico.8,36 Se usaron 42 aproximadamente ratones 25 - albinos 30 g de de cepa peso BalB/C53/CNPB corporal. Se de distribuyó aleatoriamente 6 grupos de 6 ratones por grupo de estudio, empleando la guía de manejo y cuidado de animales de laboratorio. Grupos experimentales: 1. Grupo control: Xilol al 6% 2. Ex - EtOH 5% en crema. 3. Ex - EtOH 10% en crema. 4. Ex - EtOH 20% en crema. 5. Diclofenaco 1% en gel. 6. Clobetasol 0,05% en crema Las orejas izquierdas recibieron solo el agente irritante Xilol al 6%, 5 veces en la cara interna y externa de las orejas del ratón. Las orejas derechas recibieron el agente irritante en la cara interna y externa con un hisopo estéril. Después de 20 minutos solo las orejas derechas recibieron tratamiento con las cremas de los extractos de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” de diferentes concentraciones (5%, 10% y 20%), un antiinflamatorio como Diclofenaco en gel al 1% y un glucocorticoides como Clobetasol crema 0,05% menos el grupo control. Cuatro horas después de la aplicación de las sustancias antiinflamatorias a ensayar, se procedió a sacrificar a los animales por dislocación cervical. Luego, con un sacabocado de 6mm de diámetro se procedió a cortar una porción del centro de ambas orejas y se colocó en una luna de reloj para pesarlas por separado (oreja derecha y oreja izquierda). Anotando los 32 respectivos pesos. La evaluación se determinó por la medición de la respuesta inflamatoria que se traduce por el aumento de peso. La actividad antiinflamatoria se expresó como porcentaje de inhibición del edema calculado: Delta de peso (mg) = ∆ peso = (peso oreja inflamada - peso oreja no inflamada) % de inhibición del edema = 100 - ∆ peso del extracto *100 ∆ peso control 3.4.3.3 3.4.3.4 Formulación de la crema: - Alcohol cetílico 4% (agente espesante, emoliente) - Acido esteárico 2 % (emoliente, emulgente) - Alcohol cetoesteárico 6% (agente emulsificante) - Vaselina líquida 1,5 % (emoliente y protector dermatológico) - Glicerina 4% (emoliente) - Agua destilada csp 100 % Preparación de la crema: Se procedió a preparar la fase oleosa (ácido esteárico, vaselina liquida, glicerina) a una temperatura de ebullición a 80°C en un beacker de 500 mL y en otro beacker la fase acuosa (alcohol cetílico, alcohol cetoesteárico), se mezcló la fase acuosa en la fase oleosa y se completó con agua, hasta formar una emulsión completa sin grumos con constante agitación. Posteriormente, para finalizar se concentraciones en potes de 100g. 33 colocó el extracto a diferentes IV. 4.1. RESULTADOS Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. Cuadro 3. Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. N° SOLVENTES NOMENCLATURA RESULTADO 1 Agua destilada H2O + 2 Etanol EtOH + 3 Metanol MeOH ++ 4 n–butanol n-buOH + 5 Cloroformo CHCl3 + 6 Acetato de etilo EtoAc + 7 Hexano Hex - 8 Acetona Me2CO + 9 Benceno Bz - 10 Éter etílico Et2O - 11 Éter de petróleo Ep - Leyenda: Soluble (++) Insoluble (-) Parcialmente soluble (+) Mediante la prueba de solubilidad (cuadro 3) realizada al extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” (Figura 10), se evidencia que es parcialmente soluble en etanol, n - butanol, cloroformo, acetato de etilo y acetona, agua destilada, e insoluble en hexano, benceno, éter etílico y éter de petróleo. Sin embargo, los resultados muestran una mayor solubilidad en metanol del extracto hidroalcohólico. En el extracto hidroalcoholico se puede obtener la presencia de glicosidos o agliconas muy hidroxiladas y en menos polares flavonas altamente metoxiladas. Sin embargo, los flavonoides tienen características generales de ser solubles en metanol por su carácter fenólico. 34 4.2. Análisis Cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. Cuadro 4. Análisis Cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. N° 1 ENSAYO AlCl3 METABOLITO ESPECIFICACIÓN RESULTADO Flavonoides Fluorescencia con halo + amarillo en la luz ultravioleta visible a λ 250 nm (UV). 2 3 FeCl3 Shinoda Compuestos Coloración rojo - vino fenólicos (compuestos fenólicos). Flavonoides Color amarillo, naranja, + + carmelita o rojo intenso. 4 Gelatina/ Taninos Precipitado blanco lechoso. + NaOH 1% 5 Dragendorff Alcaloides Precipitado anaranjado. + 6 Mayer Alcaloides Opalescencia, turbidez, + precipitado blanco. 7 Popoff Alcaloides Precipitado amarillo. - 8 Wagner Alcaloides Precipitado marrón o café + oscuro. 9 Fehling A y B Azucares Precipitado rojo. + reductores 10 Ninhidrina Grupo amino libre Azul o violeta. - 11 Liberman- Esteroides y/o Rojo, rosado, violeta. + burchard terpenos Salkowski Esteroides Rojo o amarillo. + 12 Leyenda: Presencia (+) Ausencia (-) 35 Basado en las pruebas generales de coloración y precipitación (figura 11), se determinó la presencia de los siguientes metabolitos (cuadro 4). Realizado al extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”. Se evidencia la presencia de flavonoides, alcaloides, esteroides terpenicos, azucares reductores y no hay presencia de grupo amino libre. La actividad antiinflamatoria puede atribuirse a los flavonoides y alcaloides. Pero en este caso se determinó una mayor presencia de flavonoides. 4.3. Análisis estadístico. Se realizó el análisis de varianza (ANOVA) con el programa IBM SPSS Statistics Base versión 22. Para determinar si existía diferencia significativa, en el estudio de la actividad analgésica del extracto y antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. 36 4.3.1. Actividad Analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. Cuadro 5. Evaluación del promedio del número de arcadas y contorsiones abdominales inducida con ácido acético glacial 0,8%. GRUPO DE ESTUDIO PROMEDIO DEL N° PROMEDIO % INHIBICION DEL N° CONTORSIONES % INHIBICION ARCADAS CONTORSIONES ARCADAS 36,88 43,75 0% 0% Ex - EtOH 50 mg/Kg. 24,25 23,88 34% 45% Ex - EtOH 100 mg/Kg. 9,88 6,38 73% 85% Ex - EtOH 200 mg/Kg. 20,13 7,75 45% 82% Paracetamol 300mg/kg 9,00 13,38 76% 69% Tramadol 40 mg/Kg 4,88 4,25 87% 90% Oxicodona 20mg/Kg 1,13 0,88 97% 98% Control positivo (ácido acético glacial al 0,8%) Se evaluó el promedio del número de contorsiones y arcadas. Hallándose un porcentaje de inhibición de arcadas y contorsiones. Mostrándose un porcentaje de inhibición significativo en el extracto hidroalcohólico de 100 mg/Kg con un 73%, similar al paracetamol 300 mg/Kg con un 76%. Mostrando su efectividad. 37 4.3.1.1. Contorsiones del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. Gráfico 1. Inhibición del número de contorsiones inducida con ácido acético glacial 0,8% con diferentes tratamientos. Control positivo Ex – EtOH 50 mg/Kg Ex – EtOcH 100 mg/Kg Ex – EtOH 200 mg/Kg Paracetamol 300 mg/Kg Tramadol 40 mg/Kg Oxicodona 20 mg/Kg En el gráfico de evidencia una similitud en el porcentaje de inhibición donde se demuestra que el extracto hidroalcohólico al 100 mg/Kg y el paracetamol 300 mg/Kg muestra una inhibición significativa e equivalente. 38 4.3.1.1.1. Comparaciones múltiples Cuadro 6. Prueba de post hoc de Tukey de las contorsiones abdominales en ratones. % INHIBICION DE CONTORSIONES Subconjunto para alfa = 0,05 grupos de estudio HSD a Tukey N 1 1. Control positivo 8 0,0000% 2. Ex - EtOH 50 mg/Kg. 8 4. Ex - EtOH 200 mg/Kg. 8 3. Ex - EtOH100 mg/Kg. 8 73,3750% 5. Paracetamol 300mg/kg 8 75,8750% 6. Tramadol 40 mg/Kg 8 7. Oxicodona 20mg/Kg 8 Sig. 2 3 4 5 6 34,2500% 45,2500% 86,6250% 96,7500% 1,000 1,000 1,000 ,157 1,000 1,000 Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 8,000. La prueba de Tukey nos evidencia que el extracto 100 mg/Kg y paracetamol 300 mg/Kg, Presentan una equivalencia de efecto para inhibir las contorsiones abdominales en ratones con un p<0.05. 39 4.3.1.2. Arcadas del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones. Gráfico 2. Inhibición del número de arcadas inducida con ácido acético glacial 0,8%. Control positivo Ex – EtOH 50 mg/Kg Ex – EtOcH 100 mg/Kg Ex – EtOH 200 mg/Kg Paracetamol 300 mg/Kg Tramadol 40 mg/Kg Oxicodona 20 mg/Kg En el grafico se observa que el extracto de 100 mg/Kg, 200 mg/Kg, mostraron un menor número de arcadas en comparación con paracetamol 300 mg/Kg. Demostrando la hipótesis que presenta actividad analgésica. 40 4.3.1.2.1. Comparaciones múltiples: Cuadro 7. Prueba de post hoc de Tukey de las arcadas abdominales en ratones. INH.ARCADAS Subconjunto para alfa = 0.05 GRUPOS DE ESTUDIO HSD Tukeya N 1 1 Control positivo 8 0,0000% 2 Ex - EtOH 50 mg/Kg. 8 5 Paracetamol 300mg/kg 8 4 Ex - EtOH 200 mg/Kg. 8 82,2500% 3 Ex - EtOH 100 mg/Kg. 8 85,6250% 6 Tramadol 40 mg/Kg 8 7 Oxicodona 20mg/Kg 8 Sig. 2 3 4 5 6 45,5000% 69,6250% 90,3750% 98,2500% 1,000 1,000 1,000 ,273 1,000 1,000 Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 8,000. La prueba de Tukey acepta la hipótesis que el extracto de 100 mg/Kg y 200 mg/Kg. Presenta similitud en la actividad analgésicade las arcadas, mostrando un porcentaje de inhibición estadísticamente significativo con un p<0.05. 41 4.3.2. Actividad Antiinflamatoria 4.3.2.1. Porcentaje de inhibición de la inflamación. Cuadro 6. Porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas de los ratones tratados. Grupo de estudio Peso de oreja Peso de oreja Porcentaje de derecha(mg) izquierda(mg) inhibición. Grupo control 37,92 37,98 0% Ex – EtOH al 5% en crema 19,37 33,28 42% Ex – EtOH al 10% en crema 12,22 34,8 65% Ex – EtOH al 20% en crema 12,82 38,82 28% Diclofenaco 1% en gel 12,82 38,82 67% Clobetasol 0,05 % en crema 14,68 30,18 51% 4.2.1.1 Comparación del porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas de los ratones tratados que presentan un efecto significativo. En el Gráfico 3, se observa un porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas tratadas con la crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” (5, 10 y 20%) comparando con el control positivo que tiene un 0% de inhibición de la inflamación. El efecto del diclofenaco al 1% en gel comparado con el efecto de la crema formulada a base del extracto al 10% presenta un 67% y 65% respectivamente de inhibición de la inflamación. Por consiguiente, se demuestra actividad antiinflamatoria efectiva de la crema formulada a base del extracto al 10%. 42 Gráfico 3. Porcentaje de inhibición de la inflamación de las orejas tratadas con la crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” frente a fármacos de referencia en 4 horas. Grupo control Clobetasol 0,05% en crema Diclofenaco 1% en gel Ex – EtOH 10% en crema Ex – EtOH 20% en crema Ex – EtOH 5% en crema En el grafico se demuestra que la crema formulada a base del extracto al 10% presenta actividad antiinflamatoria, equivalente al diclofenaco 1% en gel. 43 Cuadro 9. Prueba de post hoc de Tukey de la actividad antiinflamatoria. % inhibición del edema en 4 horas. Subconjunto para alfa = 0,05 grupos de estudio HSD Tukeya N 1 Grupo control 6 ,1794 Ex – EtOH al l 20% en crema. 6 Ex – EtOH al 5% en crema. 6 Clobetasol al 0,05% en crema. 6 Ex – EtOH al 10% en crema. 6 64,7712 Diclofenaco al 1% en gel 6 66,7978 Sig. 2 3 4 5 27,6245 41,8930 51,4055 1,000 1,000 1,000 1,000 ,816 Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 6,000. En el cuadro 10, se observa diferencia significativa en todos los grupos de estudio p<0,01. Compara cada uno de los grupos, nos muestra equivalencia entre los grupos de estudio: Entre el extracto hidroalcohólico al 10% en crema y el diclofenaco al 1% en gel 44 V. DISCUSÍÓN El presente trabajo de investigación se evaluó la actividad antiinflamatoria y analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” en ratones, para validar el uso de esta especie en la medicina popular. El extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” fue soluble en solventes polares como metanol, etanol, n-butanol, cloroformo, acetato de etilo e insoluble en hexano, benceno, éter etílico, éter de petróleo como se observa en el cuadro 3 y figura 10. Permitiendo la disolución de principios activos en solventes polares, según Olga Lock de Ugaz O. en su libro análisis fitoquimica.34, 37 El análisis cualitativo del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”, confirman la presencia de metabolitos secundarios: Flavonoides, compuestos fenólicos, taninos, alcaloides, carbohidratos, azucares reductores, grupo amino libre, esteroides y/o triterpenos según se muestra en el cuadro 4 y figura 11 mediante ensayos de precipitación y coloración como se describe en el libro análisis fitoquimica de Lock de Ugaz O. El análisis cualitativo revela la existencia de metabolitos secundarios confirmando su presencia en estudios realizados por León Encalada Jacqueline en su estudio “Efecto hipoglucemiante del extracto de las hojas de frutiPan (Artocarpus altilis) en ratas (Rattus novergicus) con hipoglucemia inducida” y Mejia K, Rengifo sobre plantas medicinales de uso popular en la amazonia peruana; donde la especie árbol de Pan presento esteroides, fenoles, flavonoides, bases cuaternarias, triterpenos, etc.33,38 En el estudio de plantas medicinales iberoamericanas. Refiere que la actividad analgésica de una sustancia se puede determinar mediante pruebas antonociceptivas que se basan en la aplicación de un estímulo doloroso (analgésico) y la aparición de cambios típicos observables en la conducta del animal. Esto no asegura que la sensación dolorosa sea la misma en el animal que en el ser humano. Dichos estímulos pueden ser de tipo mecánico, eléctrico o químico. En el presente estudio se emplea un modelo de contorsiones abdominales inducida por un agente químico (ácido acético al 0,8%). Así mismo, se observaron cambios en la conducta del animal como arcadas y contorsiones abdominales como respuesta al dolor. 45 Con el fin de evidenciar la acción analgésica del extracto ante la respuesta del retorcimiento inducido por el ácido acético al 0,8% en ratones se empleó el modelo de contorsiones abdominales inducido por ácido acético 0,8% de Koster y col. modificado. Este método no solo es fiable y simple, si no también permite evaluar la acción rápida de la analgesia. Se encontró que el extracto a dosis de 100 mg/Kg reduce eficazmente la onda de constricción y elongación que pasa caudalmente a lo largo de la pared abdominal con torsión del tronco y extensión de la extremidad posterior en ratones debido a la propiedad nociceptivo del ácido acético. El extracto a dosis de 100 mg/Kg presento un porcentaje de inhibición de las contorsiones de 73,37% y de arcadas 85,62%, y estaba cerca a la producida por el paracetamol 300 mg/Kg, el medicamento estándar que inhibió las contorsiones en un 75,87% y las arcadas en un 69,62%. Esto corrobora que el extracto presenta actividad analgésica.35 Una vía útil de clasificación del dolor para la comparación de analgésicos es distinguir entre el dolor visceral y somático. El dolor visceral es percibido como una sensación difusa, mediada por fibras C polimodales. El dolor somático es localizado y mediado por fibras delta A. La prueba de contorsiones por ácido acético representa un tipo de dolor visceral, mientras que el de la cola ocurre como respuesta a un dolor somático. El ensayo del plato caliente combina elementos de ambos tipos de dolor. 21 En el modelo de contorsiones abdominales inducidas por ácido acético, también llamado modelo de dolor visceral, la inyección de ácido acético produce una inflamación aguda en la zona peritoneal que conlleva a una reacción dolorosa, debido a una estimulación de las fibras nociceptivas aferentes por la reducción local del pH y la síntesis de mediadores inflamatorios.21 Así mismo, puede ocasionar lesión de las membranas celulares peritoneales (test de contorsiones abdominales), generar la liberación de prostaglandinas y de otros mediadores de la inflamación. 8 Se debe señalar que la especie vegetal Artocarpus altilis presenta flavonoides en el análisis cualitativo y el estudio realizado por Mejia K y se sabe que los flavonoides y triterpenos contribuyen con el efecto antiinflamatorio debido a la inhibición de la prostaglandina sintetasa, reduciendo el nivel de prostaglandinas en el proceso inflamatorio. Los flavonoides son compuestos químicos obtenidos del benzopireno a quienes se les atribuye efectos farmacológicos muy variados: Antiinflamatorio, antimicrobiano, antialérgico, hepatoprotector, antitrombótico, antineoplásico, antiulceroso, antidiabético, expectorante, antihemorrágico, diurético y antiviral, muchos 46 de los cuales han sido comprobados In vitro e In vivo. 38 Validando su actividad antiinflamatoria y analgésica en ratones. El modelo de edema auricular inducido por Xileno en ratones es un modelo de inflamación aguda preliminar y simple para la evaluación de agentes antiinflamatorios potenciales.39 El edema auricular puede promover mediadores inflamatorios como la histamina, cininas, fibrinolisina, fosfolipasa A2, entre otros. Estos mediadores inducen el edema mediante la promoción de la vasodilatación y aumento de la permeabilidad vascular.40,41 En el estudio se emplearon cremas formuladas a base del extracto hidroalcohólico a diferentes concentraciones, siendo capaz de reducir la inflamación causada por el xilol 0,6%, mejorando la permeabilidad vascular. La inflamación está dada por la primera fase (los primeros 90 min), donde implica la liberación de histamina y serotonina; la segunda fase (de 90-150 min) está creada por quinina y la tercera fase (después de 180 min) está mediada por la prostaglandina.42 Los resultados de este estudio sugieren que el extracto hidroalcohólico posiblemente actúan mediante la inhibición de la liberación o acción de la histamina, la serotonina y la quinina y la prostaglandina desarrollado en el edema por lo que el estudio se realiza después de 4 horas de aplicado el tratamiento antiinflamatorio. Se sabe que los procesos inflamatorios agudos aumentan la permeabilidad vascular e inducen la migración de leucocitos y la actividad reactivas: Peróxido de hidrogeno (H2O2), anión superóxido (O2) e hidroxilo (OH-). En la actividad antiinflamatoria, se mostró un efecto eficaz de la crema formulada a base del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol”, en un modelo de inflamación local inducida por xilol 0,6% en el pabellón auricular del ratón. Los resultados obtenidos del modelo de inflamación inducida por xilol 0,6%, indicaron que la crema al 5%, 10%, 20% a base del extracto hidroalcohólico provocaron una disminución de la inflamación del pabellón auricular (oreja derecha), en un 41,89%; 64,77%; 27,62%; respectivamente. Los fármacos antiinflamatorios (Diclofenaco al 1% en gel y Clobetasol al 0,05% en crema) indujeron una inhibición de la inflamación 66,79%, 51,40%, respectivamente. Comparando los porcentajes de inhibición de la inflamación se muestra una similitud significativa entre el tratamiento con la crema al 10% a base del Extracto hidroalcohólico y Diclofenaco al 1% en gel. Por lo que se demuestra la actividad antiinflamatoria de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg. “Pan de árbol”. 47 Para evaluar la actividad antiinflamatoria una de las pruebas más utilizadas es el modelo de edema auricular inducido por esteres de forbol como el 12-0tetradecanoylforbol-13-acetato (TPA). Sin embargo, en este estudio se realizó la prueba de edema auricular inducido por xileno al 0,6%, porque ha demostrado tener menor toxicidad, menor costo, y porque este solvente induce edema y permeabilidad vascular, que se evidencia en un proceso inflamatorio agudo. Además, al aplicar el xileno después de 15 minutos se observa el edema. El xileno provoca la liberación de mediadores pro- inflamatorios de las neuronas sensoriales que actúan sobre las células dianas periféricas, como los mastocitos y otras células del sistema inmune, provocando una inflamación neurogenica caracterizada por calor, enrojecimiento y edema. Los resultados de este trabajo indicaron que la administración tópica de crema a base del extracto hidroalcohólico al 5, 10 y 20% disminuyeron la formación del edema, esto se puede deber a que los compuestos presentes en las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” puedan estar bloqueando los mediadores de la inflamación como la fosfolipasa, COX-2, histaminas o bloqueando proteínas del complemento, evitando con ello la infiltración celular. Los antiinflamatorios AINES (diclofenaco) regulan la modulación de prostaglandinas (PG), y son usados para tratar el dolor agudo e inflamación crónica de la osteoartritis (OA) y medicamento de primera línea en la artritis reumatoide (AR).17 48 VI. CONCLUSIONES 1. Se evaluó la actividad analgésica del extracto hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” por el método de contorsiones abdominales inducida por ácido acético al 0,8%. en ratones por vía Intra peritoneal (I.P), mostrando una dosis efectiva a 100 y 200 mg/Kg con un porcentaje de inhibición cercano al paracetamol a dosis de 300 mg/Kg. 2. Se evaluó la actividad antiinflamatoria de una crema formulada a base del extracto Hidroalcohólico de las hojas frescas de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” a diferentes concentraciones en ratones por vía tópica, mostrándose una dosis efectiva con la crema al 10%, cercano al diclofenaco al 1% en gel en ratones. 49 VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Aguilar A. Lo Esencial en Farmacología. Inflamación. 4to Edición: Elsevier España; GEA consultoría editorial, S.L. 2013. 2. Newman D, Cragg G, Snader K. 2003. Natural products as sources of new drugs over the period 1981 - 2002. J Nat Prod 66: 1022 - 1037. 3. Gerritsen M, Carley W, Ranges G, Shen C, et al. 1995. Flavonoids Inhibit Cytokine-induced Endothelial Cell Adhesion Protein Gene Expression. Am J Pathol 147: 278 - 292. 4. Pastorello M, Ciangherotti C, Varela M, et al. Actividad antiinflamatoria y analgésica del extracto acuoso de la raíz de Ruellia tuberosa L”. Revista Facultad de Farmacia [internet]. 2012 [citado 23 de noviembre de 2015]; Vol. 75(1). Disponible en: http://www.researchgate.net/profile/Israel_Anita/publication/271700399_Actividad_ antiinflamatoria_y_analgsica_del_extracto_acuoso_de_la_raz_de_Ruellia_tuberos a_L/links/54cf64f50cf298d656636613.pdf 5. Sánchez N, Bu Wong M, Pérez H, et al. Efecto del zumo de Morinda citrifolia L. (noni) en modelos de analgesia. Revista Cubana de Plantas Medicinales [internet]. 2012 [citado el 3 de noviembre del 2011, acceso el 7 de abril del 2012]; vol. 17(3): 213-22. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S102847962012000300002&script=sci_arttext&tlng=pt 6. Adeyemi O, Aiqbe F, Uyaiabasi N. Analgesic and antiinflammatory activities of the aqueous stem and leaf extract of Asystasia gangetica (Linn) T. Anderson. Rev. Pubmed [online]. 2011 [citado en abril del 2011, acceso en junio del 2011]; vol. 21(2):129 -34. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=21913510%5Buid%5D&cmd=Details Search 7. Condeso S, Cuba C, Del Águila C, et al. “Exploración de la actividad Analgésica y Antiinflamatoria d las hojas de Maytenus Macrocarpa (chuchuhuasi) mediante el Test de Formalina”. Rev. VII Jornada Cientifica San Martiniana. 2010 [citado 2 Dic. 2010, acceso 4 Dic. 2010]. http://issuu.com/paok4/docs/libre_resumenes_vii_jcsm 50 Disponible en: 8. Amorós A, García C, Hernández C, Sandoval A, et al. “Evaluación del Efecto Analgésico y Antiinflamatorio del Pan de árbol “Artocarpus Altilis” en animales de experimentación”. Rev. VII Jornada Científica San Martiniano. 2010 [citado 2 Dic. 2010, acceso 4 Dic. 2010]. Disponible en: http://issuu.com/paok4/docs/libre_resumenes_vii_jcsm 9. Vargas C. Estudio de la Actividad cicatrizante y Antiinflamatoria del extracto alcohólico de las hojas de Senna reticulata (Willd) H. Irwin & barneby “Retama”. Rev. UNMSM [internet]. Programa Cybertesis Perú. 2007 [citado el 2007, acceso el 29 de junio del 2010]. Disponible en: http://cybertesis.unmsm.edu.pe/handle/cybertesis/2585 10. Cyted. Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo. Manual de técnicas de investigación. Proyecto X-I Búsqueda de principios activos en plantas medicinales. 1995:81-3. 11. Gomez H, Gomez K, Medina J. Actividad antiinflamatorio de productos naturales. Boletín latinoamericano y del caribe de plantas medicinales y aromáticas 2011. 10 (3): 182 – 217. Acceso en: http://www.redalyc.org/pdf/856/85618379003.pdf 12. Fridovich I. 1997. Superoxide anion radical, superoxide dismutases, and related matters. J Biol Chem 272: 18515 - 18517. 13. Nelson N. 1974. Prostaglandin nomenclature. J Med Chem 17: 911 - 918. 14. Smith W, Garavito R, DeWitt D. 1996. Prostaglandin endoperoxide H synthases (cyclooxygenase)-1 and 2. J Biol Chem 271: 33157 - 33160. 15. Bergström S, Ryhage R, Samuelsson B y Sjövall J. 1963. Prostaglandins and related factors.15. The structures of prostaglandin E1, F1a, and F1b. J Biol Chem 238: 3555 - 3564. 16. Thomas M. Bioquímica. 4ta Edición. Barcelona: Editorial Reverté, S. A; 2004. Disponible en: https://books.google.com.pe/books?id=p3DCb9lTLx8C&pg=PA770&dq=prostaglan dinas&hl=es419&sa=X&ved=0CBsQ6wEwAGoVChMI86mFiMj6yAIVyu4mCh3ung 21#v=onepage&q&f=false 17. Puebla F. Tipos de dolor y escala terapéutica de la O.M.S.: Dolor iatrogénico. Oncología (Barcelona). marzo de 2005; 28(3):33-7. http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S037848352005000300006 51 Disponible en: 18. Velásquez L. Farmacología Básica y Clínica. Fármacos Antiinflamatorios No Esteroideos y otros Analgésicos e antipiréticos, 18a Edición, Buenos Aires, Madrid; Médico Panamericano; 2008. 19. Katzung B, Masters S, Trevor A. Farmacologia Basica y Clinica [CD-ROM].12 a edición. China: Mcgraw-hill interamericana; 2013. 1 CD-ROM. 20. Goodman y Gilman. Las bases farmacológicas de la terapia. Editorial Mc Graw Hill Interamericana, 11a edición p.p 1371 -1387.2007. file:///C:/Users/User/Downloads/DialnetEfectoHipolipidemicoDelExtractoAcuoso DeLasHojasDeA-4657874%20(3).pdf 21. López A, Iturralde F, Clerencia M, et al. Dolor. Capítulo 71. Madrid. 2000. Pp 7174. 22. Smith H. Peripherally acting opioids. Pain physician. 2008 mar:11(2 suppl): pp. 121-132. 23. Merino J, Noriega M. Fisiología General. Tema 11, La piel: Estructura y funciones. Universidad de Cantabria. Acceso en: http://ocw.unican.es/cienciasde-la-salud/fisiologia-general/materiales-de-clase-1/bloque-ii/Tema%2011Bloque%20II-La%20Piel.%20Estructura%20y%20Funciones.pdf. 24. Medina M. Evaluación antimicrobiana y aislamiento de metabolitos secundarios de la especie Artocarpus altilis (Parkinson) Fosberg. “árbol de fruta de Pan” de la provincia de Zamora Chinchipe. Área biológica. Universidad católica de Loja. Ecuador, 2014. 25. Nyree J, Zerega M, Nur S, et al., Phylogenny and recircumscription of artocarpeae (Moraceae) whit a focus on Artocarpus. The american society of plant Taxonomists. Systematic Botany, 2010. 35(4): 766-782. 26. Caceres P. El libro rojo de las plantas endémicas del Perú: Moraceae endémicas del Perú. Facultad de ciencias biológicas UNMSM. Rev. Perú biol. 13(2): 921-925. 2006. 27. Parrota J, Artocarpus altilis (S. Park) Fosb. Mulberry family. International institute of tropical Forestry. Puerto Rico: 1994. Department of aagriculture, Forest Service. 28. Gómez J. Estudio y análisis de la fruta de Pan y propuesta gastronómica. Universidad tecnológica equinoccial. Quito: Facultad de Turismo y preservación ambiental hotelería y gastronomía. 29. Ragone D. Breadfruit. Artocarpus altilis (Parkinson) Fosberg. Promoting the conservation and use of underutilized and neglected crops. Roma, Italia: 1997. 52 Institute of plant genetic and crop plant research, gatersleben / international plant genetic Resources Institute. 30. Japtap U, Bapat V. Artocarpus: a review of its traditional uses, phytochemestry and pharmacology. Journal of ethnopharmacology, 2010: 142-146. 31. Horng K, Wen L, Cheng T, Chun L, et al. Prenylated flavonoids from Artocarpus altilis: Antioxidant activities and inhibitory effects on melanin production. Phytochemestry: the international Journal of plant chemestry, plant biochemestry and molecular biology. 2013; 78 – 88: [online] Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12012169 [Accessed 3rd February 2014]. 32. Chinmay P, Monalisa M, Anath B, et al,. Phytoconstituent screening and comparative assessment of antimicrobial potentiality of Artocarpus altilis fruit extracts. International journal of pharmacy and pharmaceutical sciences. 2013; 5(3): 1. 33. León J. “Efecto hipoglicemiante del extracto de las hojas de frutiPan (Artocarpus Altilis) en ratas (rattus novergicus) con hiperglicemia inducida”. Rev. Scientia Agropecua [internet]. 2013 [citado el 30de abril 2013, acceso 05 de agosto 2013]; Vol.4: 275 -283.Disponible en: http://dspace.espoch.edu.ec/bitstream/handle/123456789/1594/56T00282.pdf?seq uence=1 34. Lock de Ugaz O. Investigación Fitoquímica. 2da Edición. Fondo Editorial Pontificia Universidad Católica del Perú. Lima. Perú pp. 7-10. 1994. 35. Koster R, Anderson M, and de Beer EJ (1959) Acetic acid for analgesic screening. Fed Proc 18:412. 36. Villena C, Arroyo J. Efecto antiinflamatorio del extracto hidroalcohólico de Oenothera rosea (yawar socco) en ratas con inducción a la inflamación aguda y crónica. Ciencia e investigación - Facultad de Farmacia y Bioquímica - UNMSM. 2012; 15(1):15-9. 37. Domínguez X. Métodos de Investigación Fitoquímica. 3a ed. Limusa. México, 1985. p. 2009-238. 38. Mejia, Kember, Rengifo, et al. Plantas medicinales de uso popular en la amazonia peruana. Rev. Agencia española de cooperación internacional. 2da Edición. Lima. Perú. 2000. Disponible en: http://www.iiap.org.pe/Upload/Publicacion/L017.pdf 39. Cheng W, Li J, You immunomodulatoryactivities T, of Hu the C, 2005. extracts 53 from Anti-inflammatory the inflorescence and of Chrysanthemum indicum Linne.J. Ethnopharmacol. 3 de octubre de 2005; 101(1-3):334-7. 40. Li Y, Xian Y, Ip S, et al., 2011. Anti-inflammatory activity of patchouli alcohol isolated from Pogostemonis Herba in animal models. Fitoterapia 82, 1295-1301 41. Xu Q, Wang Y, Guo S, et al. Actividad antiinflamatorio y analgésico del extracto acuoso de la inflorescencia masculina de Flos populi, Populus tomentosa Carr. o Populus canadensis Moench (familia Salicaceae). Rev. Pubmed [online]. 2014 [citado 7 Feb. 2014, acceso 28 Mar. 2014]; vol.152 (3):540-5. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24508857 42. Di R, Giroud P, Willoughby D. Study of the mediators of acute inflammatory response induced in rats in different sites by carrageenan and turpine. J Pathol 1971; 104(1): 15-29. 54 VIII. ANEXO FOTO NO 1 DESCRIPCIÓN TAXONOMICA FOTO NO 2 HOJA FRESCA DE Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “ Pan de árbol ” 55 FOTO NO 3 FOTO NO 4 SELECCIÓN DE LA MUESTRA VEGETAL FOTO NO 5 FOTO NO 6 SECADO DE LA MUESTRA VEGETAL 56 FOTO NO 7 FOTO NO 8 MACERACION DE LA MUESTRA VEGETAL FOTO NO 9 FOTO NO 10 FILTRACION DE LA MUESTRA VEGETAL FOTO NO 11 FOTO NO 12 OBTENCION DEL EXTRACTO HIDROALCÓHOLICO 57 FOTO NO 13 EXTRACTO HIDROALCOHOLICO FOTO NO 14 FOTO NO 15 REACTIVOS PRUEBA DE SOLUBILIDAD PRUEBA DE SOLUBILIDAD FOTO NO 16 PRUEBA DE SOLUBILIDAD DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICOS DE LAS HOJAS FRESCAS DE Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” 58 FOTO NO 17 FOTO NO 18 ANÁLISIS CUALITATIVO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICOS DE LAS HOJAS FRESCAS de Artocarpus altilis (Park.) Fosberg “Pan de árbol” FOTO NO 19 ACTIVIDAD ANALGÉSICA FOTO NO 20 MUESTRA VEGETAL FOTO NO 21 RATONES RAZA ALBINOS BALB/C53/CNPB DE 25-30G 59 FOTO NO 22 FOTO NO 23 ADMINISTRACION POR ZONDA NASOGASTRICA FOTO NO 24 EVALUACIÓN DE LAS ARCADAS POR ÁCIDO ACÉTICO 0,8% FOTO NO 25 EVALUACIÓN DE LAS CONTORSIONES ABDOMINALES POR ÁCIDO ACÉTICO 0,8% 60 FOTO NO 26 MUESTRA VEGETAL ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA FOTO NO 27 FOTO NO 28 TRATAMIENTO INFLAMACIÓN POR XILOL AL 0,6% TRATAMIENTO OREJA DE RATÓN FOTO NO 29 FOTO NO 30 PORCIÓN DE OREJA PESO DE OREJA DE RATÓN 61