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Respuesta del pino (Pinus patula Schl. et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav) a la aplicación de micorrizas y un bioestimulante en suelos para revegetación de zonas mineras (Yanacocha – Cajamarca). 1 Manuel Roberto Roncal Rabanal y 2 Juan Guerrero Barrantes 1 Ing. M Sc. en Ciencias Ambientales. Docente de la Escuela Académico Profesional de Ingeniería Ambiental de la Universidad Nacional de Cajamarca. Cajamarca, Perú. 2 Ing. M Sc. Docente principal de la Universidad Nacional Agraria La Molina. Lima, Perú . Palabras clave: Micorriza, revegetación. Resumen: La presente investigación se realizo en las áreas de revegetación de la Mina Yanacocha ubicada en la cordillera oriental de Cajamarca, a 3965 metros de altitud, con los objetivos de: (1) determinar la taxonomía de los hongos micorríticos de pino (Pinus patula Schl. Et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pavón); (2) determinar el efecto de las micorrizas y el bioestimulante Humiforte, en el establecimiento de estas especies forestales. Los hongos micorríticos y las raicillas, fueron colectados de los bosques de pino de Aylambo, Porcón y Yanacancha Grande, en Cajamarca, luego fueron llevados a laboratorio para su análisis e identificación taxonómica y uso posterior en la preparación de inóculo micorrítico para cada especie. Los tratamientos, testigo (T1), micorriza (T2), humiforte (T3) y micorriza + humiforte (T4); fueron aplicados a cada especie forestal la noche anterior a la siembra. El bioestimulante humiforte al 2 0/00, fue foliartmente aplicado cada 30 días durante 9 meses. Los resultados obtenidos en esta investigación fueron satisfactorios, ya que por primera vez en el Perú se identificó y clasificó al hongo micorrítico del quinual el que pertenece al genero Cunninghamella sp.. Se clasificó también al hongo micorrítico del pino como Suillus luteus. El bioestimulante humiforte, rico en N P y K más aminoácidos libres, ha contribuido en el establecimiento de quinual con 86%; por el contrario, no se logro el establecimiento del pino sobre este tipo de suelo, debido a que esta especie forestal, no soporta suelos fuertemente ácidos y de poca profundidad. Se debe tener cuidado al utilizar inóculo de micorrizas, ya que estas, pueden actuar como patógenas si son agregadas en grandes cantidades. Abstract: The current investigation was carried out over the Yanacocha mine‘s areas of revegetation, which is located in the eastern mountains’ side of Cajamarca, at 3965 meters above sea level. This research was aimed to (1) determine the taxonomy of the mycorritic fungus commonly present in the pine tree (Pinus patula Schl. Et Cham) as well as in the quinual plant (Polylepis racemosa Ruiz & Pavon).; (2) determine the effect produced by these microorganisms in combination with the use of a bio stimulant named Humiforte over the establishment of the forest species previously mentioned. With this purpose, the mycorritic fungus and the small roots were collected from the pine forest of Aylambo, Porcon and Yanacancha Grande, all located in Cajamarca. Then, they were taken to the laboratory where the analysis for their identification and taxonomy was performed, using fungus investigation keys. Also, they were used to prepare the mycorritic inoculum for each species. There were four study treatments: the witness (T1), the mycorritic one (T2), the humiforte (T3) and the mycorritic one + humiforte (T4). The bio stimulant was foliately applied to the forest species with a dosage of 2 0/00, each 30 days during 9 months. The results obtained throughout this research were satisfactory, since the mycorritic fungus from quinual plant, belonging to the genera Cunninghamella sp., was identified and classified for the first time in Peru. At the same time, the mycorritic fungus from the pine tree was also classified as Suillus luteus. Furthermore, it was proved that the bio stimulant Humiforte, which is rich in N, P, K and free aminoacids, has contributed to the establishment of quinual plants by 86%. Conversely, the pine tree establishment in this kind of soil was not achieved, since it seems not to resist its strong acidity and shallowness. Finally, the use of mycorritic inoculums should be done carefully, since they can act as pathogens if added in big quantities. Key words: Mycorrhiza, revegetation. Introducción En la explotación de minerales a tajo abierto, la remoción del suelo se da en todos sus niveles, incluso se acelera el proceso edafológico del horizonte “C”; se altera la textura y la estructura de los horizontes superficiales, la vida de macro y micro organismos; llegando incluso a la extinción paulatina de algunas especies propias del lugar, y a la ausencia temporal de otros; la cobertura vegetal original desaparece y sus aliados simbiontes y no simbiontes del sistema radicular, experimentan cambios en su forma de vida; algunos se enquistan, manteniendo la vida latente por varios años, hasta que se recupere la flora tradicional. En la actualidad, la ciencia y tecnología conducen ha utilizar diferentes prácticas de acondicionamiento de los suelos removidos por la explotación minera; destacando la recuperación de flora en base a especies nativas y foráneas de fácil prendimiento (Gardner, 2001), que permitirá obtener la cobertura vegetal con las especies tradicionales del lugar, en tiempos relativamente cortos. Científicamente se ha determinado que previo a una nueva plantación, principalmente de forestales, se debe tratar a las semillas botánica y vegetativa con bioestimulantes y organismos simbiontes para asegurar la germinación, establecimiento, crecimiento y desarrollo; es el caso del presente trabajo de investigación en el cual se ha aplicado hongos micorríticos y un bioestimulante (Humiforte) al quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav), como especie nativa, y al pino (Pinus patula Schl. et Cham) como planta introducida, con el propósito de recuperar la cobertura vegetal y lograr el restablecimiento de los macro y microecositemas del lugar . Por las razones anteriormente mencionadas, el presente trabajo tuvo los siguientes objetivos: (1) Determinar la morfofisiología y la categoría taxonómica de los hongos micorríticos de pino (Pinus patula Schl. et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav); y (2) Determinar de qué manera los hongos micorríticos y el bioestimulante (Humiforte) influyen en el desarrollo de las plántulas de pino (Pinus patula Schl. et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav), en suelos utilizados para la revegetación de zonas mineras en la CIA Minera Yanacocha, en Cajamarca. Materiales y Métodos Ubicación La presente investigación se realizó en campo y laboratorio; en el departamento de Cajamarca, provincia del mismo nombre. El campo experimental estuvo ubicado a 50 Km de la ciudad de Cajamarca, en el sector San José Sur de la Compañía Minera Yanacocha, a una altitud de 3965 m.s.n.m; y en el laboratorio de Fitopatología, de la Facultad de Ciencias Agrícolas y Forestales de la Universidad Nacional de Cajamarca, ubicada, en el km 2.5 de la Carretera Baños del Inca-Cajamarca; a una altitud de 2536 m.s.n.m, a una latitud sur de 7° 10’ y 78° 30’ de longitud oeste. Materiales Material vegetal: Plántulas de pino (Pinus patula Schl. et Cham), quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav); raicillas de plantas adultas de estas especies; y cuerpos fructíferos del hongo micorrítico del pino. Materiales de campo: Humiforte, cordel, yeso, wincha, vernier, pala, pico, bolsas de papel, asperjador, contómetro manual, suelo de las áreas de reclamación final de la Compañía Minera Yanacocha. Materiales de laboratorio. Medio de cultivo: Preparado universal con rodajas de papa (Solanum tuberosum L.), dextrosa y agar, que se obtiene de algas marinas (Gelidium corneum, Gracillaria sp., Pterocladia sp.) (PDA) (French & Hebert, 1980) y harina de trigo (Triticum aestivum L.); medio de cultivo específico para aislar hongos de la clase Basidiomycetes. Material de vidrio: Cajas petry, tubos de ensayo, erlemeders, vasos de diferente capacidad, porta y cubre objetos. Equipo de esterilización y asepsia: Autoclave, horno eléctrico, cámara de flujo laminar, incubadora, refrigerador, cocina eléctrica. Equipo óptico: Lupa, microscopio estereoscopio, microscopio compuesto, cámara fotográfica. Reactivos: Alcohol de 96º, lactoglicerol, hidróxido de potasio al 10%, agua oxigenada al 10%, cloruro de hidrógeno al 10%. Material de gabinete: Libreta de apuntes, papel de escritorio, computadora. Metodología Análisis de suelos: Se tomaron muestras antes y después de concluido el trabajo de investigación, con la finalidad de determinar diferencias entre ellas. Colección de raicillas de pino (Pinus patula Schl. et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav.): De los bosques de pino y plantaciones naturales de quinual se extrajeron raicillas; considerando profundidades de 0.30 y 0.60 m, con el propósito de determinar formaciones micorríticas. Colección de cuerpos fructíferos del hongo moreno de los pinos: Se colectaron cuerpos fructíferos en diferentes estadíos de crecimiento y desarrollo, con el propósito de caracterizarlos morfofisiologicamente y proceder a su identificación taxonómica, siguiendo las claves de identificación de Alexopoulos de 1962, Alexopoulos & Mims de 1979 y Gusmán de 1977. Este material sirvió para prepara el inóculo micorriza, para ser aplicado en el sistema radicular de las plántulas de pino. Observación microscopica del micelio de los hongos micorríticos de pino (Pinus patula Schl. et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav.): El aislamiento de micelio puro del hongo moreno de los pinos, se obtuvo de cuerpos fructíferos y raicillas de pino asépticamente tratadas, las mismas que fueron observadas al microscopio con la finalidad de distinguir la presencia de fíbulas que es una característica somática que permite la categorización taxonómica del hongo. En medio de cultivo PDA (papa, dextrosa, agar), se multiplico el hongo micorrítico del quinual, del cual se extrajo porciones para ser observadas con microscopio, distinguiendo las características somáticas, que permitan su identificación y categorización taxonómica, siguiendo las claves de Barnnet & Hunter de 1986. Además, el micelio de este hongo, se utilizó para preparar el inóculo micorriza del quinual. Determinación de endo y ectomicorrizas: La endomicorriza en quinual, fue reconocida a través del proceso de Kormanik, et. al. 1980, en el que se utiliza hidróxido de potasio al 10%, agua oxigenada, ácido clorhídrico y lactoglicerol. El reconocimiento de la ectomicorriza en pino, se realizó observando la Red de Harting, con ayuda de un microscopio estereoscopio, y la diferenciación de los filamentos, se realizó con un microscopio compuesto. Instalación del experimento: Se utilizó el Diseño Bloque Completo Randomizado, para ambas especies forestales, distribuyendo los tratamientos en cuatro bloques. En la siembra, se consideró un distanciamiento de 2m entre planta y planta, para ambas especies; haciendo un total de 48 plantas por bloque, utilizando 12 plantas por tratamiento, en un área de 132 m 2 por bloque y 792 m2 por experimento, para cada especie. Los tratamientos en estudio fueron cuatro, tanto para el pino como para el quinual, y se los describe en la tabla 1. El experimento se instaló en el mes de febrero del año 2003, aprovechando las lluvias, para favorecer el establecimiento. Los plantones fueron transportados al campo definitivo, a raíz desnuda, previamente tratadas con la micorriza y el humiforte, según el tratamiento. La aplicación del bioestimulante Humiforte, fue con un asperjador; se utilizo 2 ml por cada litro de agua, y se aplicó cada 30 días. Tabla 1.Tratamientos en estudio de micorrización artificial y la aplicación del bioestimulante humiforte, para determinar la respuesta de las plántulas de pino (Pinus patula Schl. et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav) en áreas de experimentación de la Compañía Minera Yanacocha en Cajamarca. TRATAMIENTO DESCRIPCIÓN TESTIGO (T1) Plantones de pino y quinual sin inóculo de micorriza, y sin bioestimulante. MICORRIZA (T2) Plantones de pino y quinual con inóculo de micorriza. Plantones de pino y quinual con bioestimulante (humiforte). HUMIFORTE (T3) MICORRIZA + HUMIFORTE (T4) Plantones de pino y quinual con inóculo de micorriza, más bioestimulante (humiforte). Evaluación: Se analizaron las muestras de suelos y evaluó el porcentaje de establecimiento, el incremento en el diámetro del cuello de la planta, el número de hojas y se procedió hacer su análisis de varianza (ANVA) con sus respectivas pruebas de significación. Resultados y discusión Determinación de la morfofisiología y la categoría taxonómica de los hongos micorríticos de pino (Pinus patula Schl. et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav). Hongo micorritico del pino. Llamado también hongo moreno de los pinos, se lo encuentra en epocas de lluvia en bosques de pino de nuestra provincia. Posee un sombrero o pileus de color marrón amarillento; su estipite o pié es de forma cilíndrica y consistente de color marrón claro. Taxonomía. Reyno: Hongos. División: Amastigomycota Sub División: Basidiomycota Clase: Basidiomycetes Sub Clase: Holobasidiomycetidae II Orden: Agaricales Familia: Boletaceae Género: Suillus =Boletus Especie : Suillus luteus Figura 1. Cuerpos fructíferos o basidiocarpos del hongo moreno de los pinos Suillus luteus, para América y, Boletus edulis Bull ex Fr., para Europa. Hongo micorritico del quinual. A simple vista, se muestra como copos algodonosos de color blanco, sus hifas o filamentos, son cenocíticos, de crecimiento indefinido. Taxonomía. Reyno: Hongos. División: Amastigomycota Sub División: Zygomycotina Clase: Zygomycetes Orden: Mucorales Familia: Cunninghamellaceae Género: Cunninghamella sp. b a Figura 2. Estructura somática de Cunninghamella sp., hongo micorrítico del quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav); (a) filamentos ramificados en esporangióforos y (b) esporangio recubierto de esporas. Evaluación de los tratamientos en estudio Analisis de suelos: Existió un cambio en la concentración de pH, debido al contenido de arcilla y la descomposición de materia orgánica, pero no fue significativo quedando en un valor de 3.8. El contenido de materia orgánica, se elevó de un 4,8% a 6,8%; debido a que en el lugar donde se instaló el experimento, se sembró avena (Avena sativa), la que es cortada e incorporada al suelo. Hay una alta capacidad de intercambio catiónico (CIC). Porcentaje de prendimiento, diámetro de tallo y número de hojas, de pino (Pinus patula Schl. et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav). Porcentaje de prendimiento. Tabla 2. Tabla resumen, indicando el porcentaje de prendimiento de pino (Pinus patula Schl. et Cham) y quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav), con los cuatro tratamientos. EVALUACIONES (%) 0 DÍAS VIVAS MUERTAS VIVAS MUERTAS VIVAS MUERTAS VIVAS MUERTAS 455 DIAS MUERTAS 120 DIAS VIVAS 90 DIAS MUERTAS TESTIGO (T1) MICORRIZA (T2) HUMIFORTE (T3) MICORRIZA + HUMIFORTE (T4) 60 DIAS VIVAS TRATAMIENTOS 30 DIAS PINO QUINUAL PINO QUINUAL PINO QUINUAL 100 100 100 100 100 100 0 0 0 0 0 0 88 100 70 100 68 100 12 0 30 0 32 0 80 88 48 100 40 100 20 12 52 0 60 0 66 84 22 64 28 92 34 16 78 36 72 8 14 78 10 58 6 86 86 22 90 42 94 14 0 78 0 58 0 86 100 22 100 42 100 14 PINO 100 0 66 34 58 42 38 62 10 90 0 100 QUINUAL 100 0 100 0 100 0 72 28 64 36 64 36 Diámetro del tallo a nivel del cuello de la planta, en quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav). Tabla 3. Evaluación inicial, final, e incremento del diámetro del tallo a nivel del cuello de la planta, en quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav), para los tratamientos en estudio. PROMEDIO DE DIÁMETRO DE TALLO TRATAMIENTOS INICIAL (cm) FINAL (cm) INCREMENTO (cm) INCREMENTO (%) T1 0,895 2,115 1,220 136,313 T2 0,910 2,430 1,520 167,033 T3 0,795 2,010 1,215 152,830 T4 0,805 2,000 1,195 148,447 Tabla 4. Análisis de varianza, para el diámetro del tallo a nivel del cuello de la planta, en quinual. F tabular Fuentes de Suma de Cuadrado F GL F F variabilidad Cuadrados Medio Calculado 0.05 0.01 Bloques Tratamientos 3 3 0,07731875 0,02577292 1,83138416 0,50251875 0,16750625 11,9027387 Error 9 0,12665625 0,01407292 Total 15 0,70649375 CV 3,86 6,99 = 5,5 % Tabla 5. Prueba de significación de DUNCAN, para diámetro del tallo. TRT MEDIA T2 T1 T3 T4 2,4375 2,1150 2,0100 2,0000 SIGNIFICACIÓN a b b b Número de hojas de quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav) Tabla 6. Análisis de varianza, para el número de hojas en plantas de quinual. Fuentes de variabilidad Bloques Tratamientos Error Total Suma de Cuadrados 2056,786875 44426,34688 4273,525625 50756,65938 GL 3 3 9 15 Cuadrado F Medio Calculado 685,59562 1,443857172 14808,782 31,18713969 474,83618 F tabular F 0.05 F 0.01 3,86 CV = 8,62 % Tabla 7. Prueba de significación de DUNCAN, para número de hojas. TRT MEDIA T3 T1 T2 T4 318,63 280,40 235,18 177,28 SIGNIFICACIÓN a b c d Respuesta de las plantas de pino a los diferentes tratamientos. A los 455 días de instalado el experimento, las plantas de pino, no llegaron a prosperar, debido al escaso espesor de la capa arable del suelo, que no es favorable para la retención de humedad y que en el mejor de los casos llegó a tener 20 cm de grosor, no permitiendo el desarrollo adecuado del sistema radicular; otra causa de mortalidad corresponde a la acidez extrema del suelo, no tolerable por el pino. 6,99 Respuesta de las plantas de quinual al tratamiento con humiforte (T3). El mayor porcentaje de plantas establecidas fue de 86% (Tabla 2) y la media del número de hojas fue de 318,63 unidades por planta, que según la prueba de Duncan, es estadísticamente significativa frente a los otros tratamientos (Tabla 7). Referente al incremento del diámetro de tallo, este tratamiento ocupa el segundo lugar con 152,83% (Tabla 3), cuya media de 2,01 cm según la prueba de Duncan es estadísticamente idéntica a los tratamientos T1 y T4 (Tabla 5). La respuesta de las plantas ante el biocomplejo humiforte, se debe a que es un producto que aporta NPK, destacando la disponibilidad de nitrógeno (N) orgánico, bajo la forma de ácido aspártico, precursor de asparagina, que es una amida que se sintetiza y acumula en altas concentraciones en las células de las plantas. Respuesta de las plantas de quinual al tratamiento con micorriza (T2). Se obtuvo el menor porcentaje de establecimiento, obteniendo 58% (Tabla 2); lo que indica que el hongo micorritico ha tenido un comportamiento negativo, repercutiendo con el no desarrollo de los meristemos radiculares y los pelos absorbentes, debido a que este simbionte por un determinado tiempo se aprovecha de los metabolitos del sistema radicular (proteínas, vitaminas, carbohidratos, etc.). Por lo que se debe tener cuidado en realizar aplicaciones con cantidades adecuadas de inóculo, ya que este tipo de simbiosis se pueden convertir en parasitismo, terminando en patogénesis. Establecido el equilibrio fisiológico entre la planta y el hongo micorritico Cunninghamella sp., se asegura el normal funcionamiento fisiológico del hongo en beneficio nutricional de la planta, con la disponibilidad de P y K, que intervienen en el sistema radicular y la formación de carbohidratos como componentes de las células de los diferentes órganos de la planta; esta relación simbiótica se muestra significativamente con el incremento del diámetro del tallo en 167,033% (Tabla 3); demostrándose con la prueba de significación de Duncan, que es estadísticamente diferente a los tratamientos T1,T3 y T4, presentando una media de 2,4375 cm (Tabla 5). El número de hojas promedio es de 235,18 unidades por planta, corresponde al tercer lugar comparado con los otros tratamientos y estadísticamente significativo (Tabla7). Respuesta de las plantas de quinual al tratamiento testigo (T1). Tuvo un establecimiento de plantones de quinual, con 78% (Tabla 2), deducimos que se debe, a que es un forestal andino adaptado a la condiciones de los andes altos del Perú (2800 a 4800 metros de altitud), con requerimientos de suelos poco exigentes, y que durante el periodo de establecimiento ha existido condiciones favorables de humedad y temperatura del suelo, que han favorecido a la fisiología normal de crecimiento y desarrollo de pelos absorbentes y raicillas. Este tratamiento es significativo frente a los tratamientos T2 y T4, como se muestra en la prueba de significación de Duncan para número de hojas, con una media de 280,4 hojas promedio por planta (Tabla 7). En la prueba de significación de Duncan para el diámetro de tallo, este tratamiento es estadísticamente idéntico a los tratamientos T3 y T4 (Tabla 5), pero numéricamente diferente, llegando a un incremento de 136,313% (Tabla 3). Respuesta de las plantas de quinual al tratamiento micorriza más humiforte (T4). Se obtuvo un porcentaje de establecimiento de 64% (Tabla 2); esto se debe a que la planta en el periodo de tiempo que dura el establecimiento no aprovecha en forma eficiente los nutrientes orgánicos e inorgánicos que proporciona el humiforte. El hongo micorrítico es el mayor beneficiado, porque dispone con mayor eficiencia los nutrientes que contiene el humiforte, haciéndolos no disponibles por las células del sistema radicular. Además la acción micorritica del hongo disminuye por el principio de “función perezosa”, debido a que se desarrolla bajo las mismas condiciones que en un medio de cultivo sintético. El incremento promedio del diámetro del tallo, es estadísticamente igual a los tratamientos T1 y T3 (Tabla 5), aunque numéricamente diferente alcanzando un incremento de 148,447% (Tabla 3). Con relación al número de hojas con este tratamiento se consigue la menor formación de hojas promedio por planta, con 177,28 unidades, debido a que los nutrientes del humiforte son aprovechados por el hongo, no facilitando la apertura de los meristemos foliares, es estadísticamente diferente a los otros tratamientos (Tabla 7). Conclusiones 1. Suillus luteus, como hongo micorritico del pino (Pinus patula Schl. Et Cham), morfológicamente se caracteriza por presentar un basidiocarpo constituido por un sombrero = pileo esponjoso, de color café claro a oscuro; pié = estípite consistente y fibroso; la zona esporifera, se muestra en pequeñas celdas de color amarillo cremoso. Taxonomicamente corresponde al Reyno Hongos; División Amastigomycota; Sub División Basidiomycota; Clase Basidiomycetes; Sub Clase Holobasidiomycetidae II; Orden Agaricales; Familia Boletaceae; Género Suillus =Boletus. 2. El hongo micorritico del quinual (Polylepis racemosa Ruiz & Pav), morfológicamente en medio de cultivo PDA, se caracteriza por presentar micelio algodonoso de color blanco, conformado por hifas cenocíticas , esporangióforos solitarios, los mismos que pueden crecer formando verticilos, en cuya parte superior se forma el esporangio algo esférico tapizado de esterigmas que soportan esporas ovoides y esféricas hialinas. Taxonomicamente pertenece al Reyno Hongos; División Amastigomycota; Sub División Zygomycotina; Clase Zygomycetes; Orden Mucorales; Familia Cunninghamellaceae; Género Cunninghamella sp. 3. El bioestimulante Humiforte, es adecuado para el establecimiento de quinual en suelos utilizados para la revegetación de zonas mineras, en la CIA. Yanacocha Cajamarca. 4. La sobredosis de inóculo de micorriza en plantones de quinual, producen antagonismo, que conducen al parasitismo y patogénesis en el hospedero. Recomendaciones 1. Se recomienda realizar estudios de identificación de la especie micorritica Cunninghamella. 2. La utilización de la especie forestal Pinus patula Schl. Et Cham, en suelos utilizados para la revegetación de zonas mineras en la CIA Yanacocha en Cajamarca, no es recomendable, ya que, esta especie necesita de suelos profundos, no muy ácidos, además de nutrientes disponibles en el suelo. 3. La especie forestal Polylepis racemosa Ruiz & Pav, es recomendable, ya que es una especie nativa, que soporta condiciones adversas de clima, calidad y profundidad de suelo. 4. Se recomienda la disposición de una capa de suelo de por lo menos 30 cm de espesor, en la áreas de reclamación final en Yanacocha-Cajamarca, para asegurar de una manera mas confiable el establecimiento de especies forestales. 5. Se recomienda la utilización del bioestimulante vegetal humiforte, en futuras plantaciones de quinual. Referencias bibliográficas Alexopoulos, C. J. 1962. Introductory Mycology. Second edition. 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