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CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS, DICIEMBRE 3 AL 7, 2001
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA
DEPARTAMENTO DE FARMACIA
GUIA PARA EL RECONOCIMIENTO DE DROGAS VEGETALES
POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
Elaborado por:
GLORIA AMPARO VALENCIA P.
ALEJANDRO MARTINEZ M.
Medellín, Diciembre de 2001
Gloria Amparo Valencia P., y Alejandro Martínez M.
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CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS, DICIEMBRE 3 AL 7, 2001
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Práctica 1
RECONOCIMIENTO CROMATOGRÁFICO DE PLANTAS MEDICINALES
APROBADAS EN COLOMBIA
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DE AJENJO, Artemisia absinthium L., Asteraceae
Introducción
La droga la constituyen las hojas y flores. Las hojas contienen 0.3% de principios
amargos (absinthina y anabsinthina), mientras que las flores contienen un 0.15%.
Extracción
1 g. de droga pulverizada se extrae durante 10 minutos con 10 ml de Metanol a 60°C
sobre un baño de agua. La mezcla se filtra y el filtrado se evapora hasta un volumen
aprox. de 2 ml.
Fase estacionaria:
Fase móvil:
Revelador:
Rf
0.3-0.4
Sílica gel 60F-254
Cloroformo:Metanol 95:5
Liebermann-Burchard/UV 365 nm
SIJSTANCIA
Absinthina
COLOR
amarillo ocre
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DEL AJO, Allium sativum, Liliaceae
Introducción
El bulbo o diente contiene cisteína, cistina, sulfóxido de metionina, cicloaliína, aliína (=
sulfóxido de S-alilcisteína), y deoxialiína (=S-alil-cisteína), junto con otros aminoácidos
azufrados y sulfóxidos de cisteína.
Extracción
25 g. de dientes frescos finamente desmenuzados se extraen en frío (con ayuda de
hielo seco) con 2 porciones de 100 ml de metanol al 80%. Se purifica por cromatografía
en columna, controlando las fracciones con Reactivo de Ninhidrina.
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Fase estacionaria:
Fase móvil:
Revelador:
3
Sílica gel 60
n-Butanol : n-Propanol : Acido acético glacial : Agua
30
: 10
:
10
: 10
Ninhidrina
Rf
0.5
SUSTANCIA
Alicina
COLOR
Naranja
0.7
Aliína
Azul-violeta
RECONOCIMIENTO DE LA ALCACHOFA POR
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
Introducción
La droga la constituyen las hojas, las cuales contienen sesquiterpenlactonas como
cinaropicrina, grossheimina y cinarina; ácidos fenolcarboxilicos como 1,3dicafeoilquínico, clorogénico y neoclorogénico; y luteolina-7-O-glucósido, un flavonoide.
Extracción
1 g. de droga pulverizada se extrae durante 10 minutos con 10 ml de metanol a 60°C
sobre un baño de agua. La mezcla se filtra y se evapora hasta un volumen de aprox. 2
ml
Fase estacionaria:
Fase móvil:
Revelador:
Sílica gel 60F-254
Acetato de etilo:Acido fórmico:Acido acético:Agua
100
:
11
:
11 : 27
Polietilénglicol para productos naturales/UV 365 nm
Rf
0.7
SIJSTANCIA
Cinarina
COLOR
Azul fluorescente
0.6
Luteolina-7-0-gluc.
Amarillo
0.45
Acido clorogénico
Azul fluorescente
0.4
Rutina
Amarillo
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RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE LA
ALBAHACA, Ocimum basilicum, Lamiaceae
Introducción
La droga la constituyen las hojas, las cuales contienen 0.1-0.45% de aceite esencial. El
aceite esencial contiene principalmente metilchavicol 55% y linalool.
Extracción
a) Por arrastre con vapor de agua
Método oficial de la Farmacopea Europea III, pág. 62.
b) Con Diclorometano
1 g. de droga pulverizada se extrae por agitación durante 15 minutos con 10 ml de
diclorometano. El filtrado obtenido se evapora a sequedad. El residuo se disuelve en 1
ml de Tolueno, y se aplican 50-100 mL. en la placa cromatográfica.
Fase estacionaria:
Fase móvil:
Revelador:
Sílica gel 60
Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7
Vainillina- Acido sulfúrico
Rf
0.3
SUSTANCIA
Linalool
COLOR
Azul intenso
0.9
Metilchavicol
Rojo violeta
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE
LA HIERBABUENA,
Mentha viridis L., Lamiaceae
Introducción
La droga la constituyen las hojas y ramas jóvenes, las cuales contienen 1.2% de aceite
esencial. El aceite contiene principalmente L-carvona 42-67%, mentol, acetato de
dihidrocarveol, alcohol dihidrocuminílico, pineno, limoneno y felandreno.
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Extracción
1) Destilación por arrastre con vapor de agua
Se utiliza el método oficial de la Farmacopea Europea III pág. 62 con 50 g de muestra,
500 ml de agua, 2 horas de destilación a un flujo de 3-3.5 ml /min.
2) Extracción con diclorometano
Como se describió para la albahaca
Fase estacionaria:
Fase móvil:
Revelador:
Sílica gel 60
Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7
Vainillina-Acido sulfúrico
Rf
0.25
SUSTANCIA
Alcohol dihidrocumínico
COLOR
Azul intenso
0.46
Carvona
Rojo-Violeta
0.7
Acetato de dehidrocarveol
Azul intenso
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE
HINOJO, Foeniculum vulgare, Apiaceae
Introducción
La droga la constituyen los frutos, los cuales contienen 2-7% de aceite esencial. El
aceite esencial contiene principalmente anetol (50-80% en la variedad dulce, 60-80%
en la variedad vulgare), metilchavicol, safrol, anisaldehído y fenchona (0.4-0.8% en la
variedad dulce, 12-22% en la variedad vulgare).
Extracción
1) Destilación por arrastre con vapor de agua
Según el método oficial de la Farmacopea Europea III, pág. 62, utilizando 10 g. de
muestra, 200 ml de agua, 2 horas de destilación a una rata de 2-3 ml /min.
2) Extracción con diclorometano
Tal como se describió para la albahaca.
Fase estacionaria:
Sílica gel 60
Fase móvil:
Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7
Reveladores:
1.Vainillina-Acido sulfúrico
2. PMA-Permanganato de potasio
3. Acido sulfúrico concentrado
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Rf
0.6
SUSTANCIA
Fenchona
REVELADOR
3
COLOR
Azul oscuro
0.9
Anetol
1
2
3
Rojo-Violeta
Rojo-Pardo
Azul oscuro
6
Nota: La fenchona no se detecta en estas condiciones para el anís, lo que permite
diferenciar las dos plantas.
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DE LA MALVA, Malva sylvestris, Malvaceae
Introducción
La flor contiene la malvina, un pigmento que le confiere el color característico.
Extracción
1 g. de droga pulverizada se extrae por agitación durante 15 minutos con 6 ml de
Metanol:Acido Clorhídrico (9 partes de metanol, 1 parte de ácido al 25%). Se utilizan 25
ml del filtrado para la cromatografía.
Fase estacionaria:
Fase móvil:
Reveladores:
Rf
0.4
Sílica gel 60F-254
n-Butanol : Acido acético glacial : Agua
40
:
10
: 20
Ninguno
SUSTANCIA
Malvina (=Malvidin-3,5-diglucósido
COLOR
Violáceo
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DE LA MANZANILLA MATRICARIA, Matricaria chamomilla, Asteraceae
Introducción
La droga la constituyen las flores, las cuales contienen 0.5-1.5% de aceite esencial. El
aceite esencial a su vez contiene chamazuleno 0-15%, bisabolol 10-25%, bisabolol
óxidos A y B (ambos 10-25%), poliínas 1-40%, farneseno 15%.
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Extracción
a) Destilación por arrastre con vapor de agua
Según método oficial de la F. Eur. III pág. 62 con:
50 g de muestra, 500 ml de agua destilada de una solución de cloruro de sodio al 1%, 4
horas de destilación a 3-4 ml/minuto.
b) Extracción con Diclorometano
Tal como se ha descrito para la albahaca.
Fase estacionaria:
Fase móvil:
Revelador:
Sílica gel 60
Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7
Vainillina-Acido sulfúrico
Rf
0.2
SUSTANCIA
Oxidos A y B de bisabolol
COLOR
Amarillo/Verde
0.25
Alcohol terpenoide
Violeta
0.35
Bisabolol
Violeta
0.5-0.6
Poliínas
Pardo
0.95
Azuleno
Rojo violeta
0.99
Farneseno
Azul-Violeta
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DEL ROMERO, Rosmarinus officinalis, Lamiaceae
Introducción
Las hojas contienen 1-2% de aceite esencial, el cual contiene principalmente 1,8-cineol
15-30%, borneol 10-20%, acetato de bornilo, camfeno 5-10%, alfa- y beta-pineno.
Extracción
a) Destilación por arrastre con vapor de agua
Según método oficial de la Farm. Eur. III pág. 62.
b) Extracción con diclorometano
Tal como se describió para la albahaca.
Fase estacionaria:
Fase móvil:
Revelador:
Sílica gel 60
Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7
Vainillina-Acido sulfúrico
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Rf
0.25
SUSTANCIA
Borneol
COLOR
Azul oscuro
0.45
Cineol
Azul intenso
0.7
Acetato de bornilo
Azul intenso
0.99
Alfa- y beta-pineno
Violeta
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DE LA SABILA, Aloe vera, Liliaceae
Introducción
La droga la constituye el jugo desecado de las hojas el cual contiene 14-28% de
principios antracénicos tales como aloína, aloesinas A y B, aloinósidos A y B, etc.
Extracción
0.5 g. de droga pulverizada se extraen con 5 ml de Metanol, calentando durante 5
minutos sobre un baño de agua. El filtrado se aplica directamente sobre la placa
cromatográfica.
Fase estacionaria:
Fase móvil:
Sílica gel 60F-254
Acetato de etilo : Metanol : Agua
100 : 13.5 : 10
Reveladores:
1) Hidróxido de potasio/UV 365 nm
2) Poiietilénglicol PN/UV 365 nm
Rf
0.3
SUSTANCIA
Aloinósidos A y B
REVELADOR
1y2
COLOR
Amarillo
0.47
Aloína
1y2
Amarillo
0.95
Aloé-emodina
1
Rojo
---
1
Aloesinas A y B
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Azul fluorescente
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RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DE FLORES DE SAUCO, Sambucus nigra, Caprifoliaceae
Introducción
La droga la constituyen las flores, las cuales contienen glicósidos de quercetina 1.5-3%
como hiperósido, isoquercitrina y rutina.
Extracción
1 g. de droga pulverizada se extrae con 10 ml de metanol durante 5 minutos sobre un
baño de agua a aproximadamente 60 °C. El filtrado se utiliza para la cromatografía.
Fase estacionaria:
Fase móvil:
Sílica gel 60F-254
Acetato de etilo : Acido fórmico : Acido acético : Agua
100 :
11
:
11
: 27
Reveladores:
1) R. productos naturales/UV 365 nm
2) Polietilénglicol para productos naturales/UV 365 nm
Rf
0.4
SUSTANCIA
Rutina
COLOR
Amarillo
0.7
Isoquercitrina
Amarillo
0.9
Acido cafeico
Azul fluorescente
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DE HOJAS DE TORONJIL, Melissa officinalis, Lamiaceae
Introducción
Las hojas contienen 0.01-0.25% de aceite esencial, el cual está constituido
principalmente de citronelal 39%, citral 30%, citronelol, linalool, geraniol y cariofileno.
Extracción
a) Por arrastre con vapor de agua
Según el método oficial de la Farmacopea Europea III pág. 62, con:
40 g. de muestra, 400 ml de agua, destilando a 2-3 ml/min durante
2 horas.
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b) Extracción con Diclorometano
Como se describió para la albahaca.
Fase estacionaria:
Sílica gel 60
Fase móvil:
Cloroformo
Revelador:
Anisaldehído/Acido sulfúrico
Rf
0.7
SUSTANCIA
Citronelal
COLOR
Azul intenso
0.45
Citral
Azul violáceo
0.25-0.4
Geraniol, linalool y
Citronelol
Azul violáceo
RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DE RAICES DE VALERIANA, Valeriana officinalis, Valerianaceae
Introducción
La droga la constituyen las raíces o rizomas que contienen los valepotriatos como:
valtrato, isovaltrato, IVDH_valtrato, didrovaltrato y acevaltrato, cuya concentración
cambia de una variedad a otra. Además contiene 0.25% de aceite esencial en los
rizomas frescos, el cual contiene valerenal, valeranona y ácido valerénico.
Extracción
0.2 g. de droga pulverizada se extraen con 5 ml de diclorometano durante 5 minutos a
unos 60 0C con agitación ocasional. El residuo de la filtración se lava con otros 2 ml de
diclorometano. Los extractos combinados se evaporan a sequedad, y el residuo de
disuelve en 0.2 ml de acetato de etilo. Se aplican en la cromatoplaca 10 microlitros de
esta solución.
Fase estacionaria:
Sílica gel 60
Fase móvil:
Tolueno : Acetato de etilo 75 : 25
Revelador:
HCl concentrado : Acido acético glacial 2 : 8
Rf
SUSTANCIA
COLOR
0.73
Valtrato/Isovaltrato
Azul
0.65
Didrovaltrato
Pardo
0.55
Acevaltrato
Azul
0.4
IVDH-Valtrato
Azul
<0.4
Valtrahidrinas
Azul
Origen
Productos de degradación
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Bibliografía
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2. Wagner, H., Bladt, S., Zgainski, E. M., Plant Drug Analysis. A Thin Layer
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3. Evans, W. C., Farmacognosia Trease-Evans, 13 edic., Interamericana McGraw-Hill,
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4. Harborne, J. B., Phytochemical Methods. A Guide to Modern Techniques of Plant
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5. Gattuso, M. A., Gattuso, S. J., Manual de Procedimientos para el Análisis de Drogas
en Polvo, UNR Editora, Cyted, Rosario (Argentina), 1999.
6. Ramírez, S., Fonnegra, R., Plantas Medicinales Aprobadas en Colombia,
Universidad de Antioquia, Medellín, 1999.
7. http://matematicas.udea.edu.co/~carlopez/laboratorio/pagelab.html
8. http://muiscas.udea.edu.co/~amart/indice.html
9. http://matematicas.udea.edu.co/~carlopez
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11. Martínez, A., Farmacognosia y Fitoquímica Experimental, Universidad de Antioquia,
Medellín, 1991.
12. Revistas especializadas: Phytochemistry, Planta Medica, Journal of Natural
Products, Journal of Food and Agricultural Chemistry, etc.
13. Bases de datos: Napralert
14. República de Colombia, Ministe rio de Salud, Decreto ley Nº 677, Ley del
medicamento de 1994.
15. Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials, World Health Organization,
Geneva, 1998.
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Pinzón ed., Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo,
Cyted, Santafé de Bogotá D. C., 2000.
17. CD Farmacognosia y Fitoquímica, versión 2.0, Alejandro Martínez y Gabriel J.
Arango, Universidad de Antioquia, Medellín, 2001.
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Práctica 2
DESARROLLO DE UN METODO CUANTITATIVO
POR CCF-UV
CUANTIFICACION DE RUTINA EN FLORES DE SAUCO Y EN PARTES AEREAS DE
PENSAMIENTO
Introducción
La rutina es un glicósido flavonoide que se encuentra ampliamente distribuido en
plantas y productos fitofarmacéuticos. Esta amplia distribución, junto con la facilidad en
su detección a nivel de laboratorio mediante la cromatografía en capa fina (CCF) y la
espectroscopia Ultravioleta (UV), la hacen un indicador adecuado para el
reconocimiento y el control de calidad de productos fitofarmacéuticos terminados o sus
materias primas vegetales correspondientes.
Procedimiento
· Preparar una solución estándar de rutina en metanol de concentración 100 ppm
· Tomar 1.2 ml de solución completar a 10 ml y determinar el espectro UV entre
200 y 400 nm.
· Seleccionar la longitud de onda de trabajo.
· Para obtener la curva de calibración, tomar alícuotas de la solución estándar y
llevar a 10 ml según la tabla siguiente. Leer absorbancias de cada solución a la
longitud de onda de trabajo. Realizar una curva de Absorbancia vs.
Concentración en ppm.
Alícuota (ml)
0.6
0.9
1.2
1.5
1.8
Volumen final
(ml)
10.0
10.0
10.0
10.0
10.0
Absorbancia a
360 nm
Concentración de rutina
(ppm)
La gráfica muestra una curva de calibración obtenida experimentalmente con una
solución estándar de rutina de concentración aproximada a 100 ppm.
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Curva de calibración de estándar de rutina
0,9
Absorbancia a 360 nm
0,8
0,7
y = 0,0352x + 0,037
2
R = 0,9906
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0
5
10
15
20
25
Concentración en metanol (ppm)
2. Extracción de la droga
· 1 g de droga seca y en polvo (pesar con balanza de precisión ± 1 diezmilésima
de gramo), se extrae con 10 ml de metanol, con agitación, calentamiento en
baño de agua a 60°C, durante 10 minutos. Filtrar, lavar el filtrado dos veces con
10 ml de metanol (preferiblemente caliente), evaporar a sequedad y pesar el
extracto obtenido.
3. Separación mediante CCF
· Redisolver el extracto en 2 ml de metanol caliente y sembrar una banda en una
cromatoplaca de sílica gel GF-254 (20x10 cm, 1 mm espesor de capa),
colocando al lado una aplicación del estándar de rutina disuelto en metanol.
Evaporar a sequedad el resto de extracto y pesar para determinar por diferencia
el peso de extracto sembrado en CCF.
· Desarrollar en la mezcla Acetato de etilo/Acido fórmico/Acido acético/Agua
100:11:11:2.7.
· La rutina se observa con un rf aproximado de 0.3, de color amarillo.
· Retirar la placa luego de desarrollar, dejarla secar en un extractor de vapores y
analizarla con una lámpara UV a 254 nm.
· Demarcar la banda correspondiente a la rutina en la muestra, raspar y extraer
con metanol caliente 3 veces (porciones de 5 a 10 ml). Los filtrados se
concentran a sequedad y se redisuelven en 3 ml de metanol, medidos con
exactitud.
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4. Lectura espectrofotométrica y cuantificación
· Leer absorbancia a 360 nm y determinar concentración mediante interpolación
con la curva de calibración.
· Determinar el porcentaje de rutina en la muestra y comparar con lo reportado
para muestras auténticas.
CUANTIFICACION DE RUTINA EN UN JARABE DE SAUCO
Introducción
La rutina es un glicósido flavonoide que se encuentra ampliamente distribuido en
plantas y productos fitofarmacéuticos. Esta amplia distribución, junto con la facilidad en
su detección a nivel de laboratorio mediante la cromatografía en capa fina (CCF) y la
espectroscopia Ultravioleta (UV), la hacen un indicador adecuado para el
reconocimiento y el control de calidad de productos fitofarmacéuticos terminados o sus
materias primas vegetales correspondientes. En este caso se propone un método de
cuantificación en un jarabe.
Procedimiento
· Preparar una solución estándar de rutina en metanol de concentración 100 ppm
· Tomar 1.2 ml de solución completar a 10 ml y determinar el espectro UV entre
200 y 400 nm.
· Seleccionar la longitud de onda de trabajo.
· Para obtener la curva de calibración, tomar alícuotas de la solución estándar y
llevar a 10 ml según la tabla siguiente. Leer absorbancias de cada solución a la
longitud de onda de trabajo. Realizar una curva de Absorbancia vs.
Concentración en ppm.
Alícuota (ml)
0.6
0.9
1.2
1.5
1.8
Volumen final
(ml)
10.0
10.0
10.0
10.0
10.0
Absorbancia a
360 nm
Concentración
de rutina (ppm)
2. Extracción de la droga
· A partir de la información dada en la etiqueta por el fabricante tomar un volumen
equivalente a 1 g de droga seca y en polvo (medir exactamente con material
volumétrico). Evaporar a sequedad con ayuda de vacío y calentando a 60°C. El
residuo se extrae con 10 ml de metanol, con agitación, calentamiento en baño
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de agua a 60°C, durante 10 minutos. Filtrar, lavar el filtrado dos veces con 10 ml
de metanol (preferiblemente caliente), evaporar a sequedad y pesar el residuo
obtenido.
3. Separación mediante CCF
· Redisolver el residuo en 2 ml de metanol caliente y sembrar una banda en una
cromatoplaca de sílica gel GF-254 (20x10 cm, 1 mm espesor de capa),
colocando al lado una aplicación del estándar de rutina disuelto en metanol.
· Desarrollar en la mezcla Acetato de etilo/Acido fórmico/Acido acético/Agua
100:11:11:2.7.
· La rutina se observa con un rf aproximado de 0.3, de color amarillo.
· Retirar la placa luego de desarrollar, dejarla secar en un extractor de vapores y
analizarla con una lámpara UV a 254 nm.
· Demarcar la banda correspondiente a la rutina en la muestra, raspar y extraer
con metanol caliente 3 veces (porciones de 5 a 10 ml). Los filtrados se
concentran a sequedad y se redisuelven en 3 ml de metanol, medidos con
exactitud.
4. Lectura espectrofotométrica y cuantificación
· Leer absorbancia a 360 nm y determinar concentración mediante interpolación
con la curva de calibración.
Figura 1. Espectro UV de rutina en metanol
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CUANTIFICACION DE ANETOL EN SEMILLAS DE ANIS E HINOJO
Introducción
El anetol es un fenilpropano que se encuentra distribuido en varias plantas aromáticas.
Esta amplia distribución, junto con la facilidad en su detección a nivel de laboratorio
mediante la cromatografía en capa fina (CCF) y la espectroscopia Ultravioleta (UV), la
hacen un indicador adecuado para el reconocimiento y el control de calidad de
productos fitofarmacéuticos terminados o sus materias primas vegetales
correspondientes.
Procedimiento
· Preparar una solución estándar de anetol en metanol de concentración 100 ppm
· Tomar 1.2 ml de solución completar a 10 ml y determinar el espectro UV entre
200 y 400 nm.
· Seleccionar la longitud de onda de trabajo.
· Para obtener la curva de calibración, tomar alícuotas de la solución estándar y
llevar a 10 ml según la tabla siguiente. Leer absorbancias de cada solución a la
longitud de onda de trabajo. Las absorbancias deben estar en el rango de 0.3 a
0.8, si no es así se deberán preparar diluciones calculando absorbancias de 0.3,
0.4, 0.5, 0.6 y 0.7. Realizar una curva de Absorbancia vs. Concentración en
ppm.
Alícuota (ml)
Volumen final
(ml)
10.0
10.0
10.0
10.0
10.0
Absorbancia a
360 nm
Concentración
de rutina (ppm)
2. Extracción de la droga
· 1 g de droga seca y en polvo (pesar con balanza de precisión ± 1 diezmilésima
de gramo), se extrae con 10 ml de diclorometano, con agitación, durante 15
minutos. Filtrar, lavar el filtrado dos veces con 10 ml de diclorometano, evaporar
a sequedad y pesar el extracto obtenido.
Gloria Amparo Valencia P., y Alejandro Martínez M.
CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS, DICIEMBRE 3 AL 7, 2001
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3. Separación mediante CCF
· Redisolver el extracto en 1 ml de tolueno y sembrar una banda en una
cromatoplaca de sílica gel GF-254 (20x10 cm, 1 mm espesor de capa),
colocando al lado una aplicación del estándar de anetol disuelto en tolueno ó
diclorometano. Evaporar a sequedad el resto de extracto no sembrado y pesar.
Por diferencia determinar el peso de extracto sembrado.
· Desarrollar en la mezcla Tolueno/Acetato de etilo 93:7.
· Retirar la placa luego de desarrollar, dejarla secar en un extractor de vapores y
analizarla con una lámpara UV a 254 nm. El anetol se observa a un Rf
aproximado de 0.95.
· Demarcar la banda correspondiente al anetol en la muestra, raspar y extraer con
diclorometano 3 veces (porciones de 5 a 10 ml). Los filtrados se concentran a
sequedad y se redisuelven en 3 ml de metanol, medidos con exactitud.
4. Lectura espectrofotométrica y cuantificación
· Leer absorbancia a 360 nm y determinar concentración mediante interpolación
con la curva de calibración.
· Determinar el porcentaje de anetol en la muestra y comparar con lo reportado
para muestras auténticas.
Figura 2. Espectro UV de anetol en metanol
Gloria Amparo Valencia P., y Alejandro Martínez M.