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Establecimiento de cultivos de callo y células en suspensión de Tamarindus indica L. Francelvia Pérez-Hernández1, Jesús Hernández-Ramírez1, Leticia Buendía-González2 y Juan Orozco-Villafuerte1 1Facultad de Química, 2Facultad de Ciencias, Universidad Autónoma del Estado de México, Campus El Cerrillo Piedras Blancas, Carretera Toluca-Ixtlahuaca Km 15.5, C.P 50200, Toluca, Estado de México, México. E-mail: [email protected] Palabras clave: Tamarindus indica, cultivo de tejidos vegetales, producción de metabolitos secundarios Introducción El Tamarindo (Tamarindus indica L.) es una especie vegetal utilizada tradicionalmente en México como materia prima en el procesamiento de dulces y bebidas; diversos estudios fitoquímicos han evidenciado que es una buena fuente de antioxidantes, los cuales se pueden encontrar en el fruto, semillas y hojas. De Caluwé y Halamová (2010). El presente trabajo tuvo como objetivo establecer cultivos de callo y células en suspensión de T. indica, productores de compuestos fenólicos. Metodología Se sembraron semillas de T. indica en medio de cultivo MS suplementado con sacarosa, carbón activado, ácido cítrico, ácido ascórbico y diferentes concentraciones y combinaciones de reguladores de crecimiento vegetal (BAP, Kinetina y 2,4-D). Una vez desarrolladas las plántulas in vitro (Fig. 1a), se tomaron como fuente de explantes los hipocótilos y epicótilos, cotiledones y hojas, los cuales fueron sembrados en medio de cultivo MS fresco, suplementado con la misma combinación y concentración de reguladores de crecimiento vegetal ensayados en la germinación. Todos los cultivos se incubaron por 25 días. Trascurrido el tiempo de incubación, se cuantificó la formación de callo en los diferentes tratamientos. Se seleccionó el tratamiento que presento la mayor formación de callo friable y la totalidad de los callos formados se resembraron en este tratamiento con la finalidad de generar suficiente biomasa para los siguientes experimentos y análisis. A partir de los callos generados, se establecieron cultivos de células en suspensión. Los cultivos líquidos se mantuvieron en agitación constante a 120 rpm, a una temperatura de 25 °C bajo un fotoperiodo de 16 horas luz y 8 horas de oscuridad. Parte de la biomasa producida (células en suspensión) se cosecho y liofilizó para posteriormente someter dicha biomasa a una extracción metanólica. Al extracto obtenido se le determinó la presencia y concentración de compuestos fenólicos totales. Resultados y Discusión El porcentaje de germinación obtenido en el tratamiento control carente de reguladores de crecimiento, fue del 100%, mientras que los porcentajes registrados por los cultivos suplementados con los diferentes reguladores del crecimiento ensayados, variaron entre un 40 a un 80%. Lo cual indica que la presencia de los reguladores inhibe en diferente magnitud el proceso germinativo. El efecto de los reguladores también se pudo observar en la morfología de las plántulas obtenidas. Con respecto a la inducción de callogénesis, el medio de cultivo suplementado con la combinación de 1 mg/L de BAP y 2,4-D, fue el que registro la mayor cantidad de callo, mientras que los hipocótilos fueron la mejor fuente de explante para este propósito (Fig. 1b). A partir del callo generado se establecieron cultivos en suspensión. La cinética de crecimiento de los cultivos se obtuvo a partir del registro de las variables peso fresco y seco. Los cultivos alcanzaron la fase estacionaria de crecimiento a los 17 días de incubación. 1a 1b Fig. 1 a) Plántula de T. indica generada in vitro; b) hipocótilos con presencia de callo. Una vez terminado el tiempo de incubación de los cultivos en suspensión, la biomasa se cosecho y se sometió a un análisis cuantitativo para determinar la producción de compuestos fenólicos totales. Los resultados obtenidos indican que los cultivos están produciendo 3.16 mg EAG/mL de extracto. Conclusiones Se estableció un protocolo que permitió generar cultivos de callo y células en suspensión de Tamarindus indica productores de compuestos fenólicos. Agradecimientos Los autores agradecen al CONACyT por el financiamiento de este trabajo a través del proyecto CB-2011/167564. Referencias De Caluwé, E. Halamová, K., 2010 “Tamarindus indica L. – A review of traditional uses, phytochemistry and pharmacology”. AFRIKA FOCUS, Vol. 23, Nr. I pp.53-83.
