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MUTACIONES EN LA PROTEÍNA V DEL RUBULAVIRUS PORCINO REVELAN UNA POSIBLE
ATENUACIÓN NATURAL
Rivera-Benítez, JF1., Cuevas-Romero, S1., Blomström, A-L2., Ramliden, M2., Hernández-Baumgarten, E3.,
Hernández-Jaúregui, P3., Ramírez-Mendoza, H4*. & Berg, M2.
1
CENID-MA-INIFAP, México; 2Uppsala University SLU-Sweden; 3Investigador Independiente, México; 4FMVZUNAM, México
*email: [email protected]
INTRODUCCIÓN
La enfermedad del ojo azul (EOA) en cerdos, es
considerada una de las enfermedades más importantes
que afectan la porcicultura de la región centro-occidente
del país. Esta enfermedad ha tomado gran importancia
derivado de las pérdidas económicas que ocasiona por
la presencia de brotes esporádicos en granjas infectadas.
Durante los últimos años se ha reportado la presencia de
variantes genéticas del Rubulavirus porcino (PorPV),
basado en la secuencia del gen HN, misma que se ha
asociado con la virulencia y patogenicidad del virus. El
reporte de variaciones en la expresión de la proteína V del
RVP, ha sido asociado a estados de persistencia viral en
estudios in vitro de células infectadas (1). Bajo
condiciones naturales se ha identificado en algunos virus
del género Rubulavirus, el efecto antagónico de la proteína
V, para la síntesis del interferón en respuesta a la infección
viral (2). La mutación en el dominio antagonista del
mecanismo de señalización del interferón, podría
modificar la virulencia del PorPV en cerdos mantenidos en
zonas endémicas de la EOA. El objetivo de este trabajo fue
realizar el análisis molecular del marco de lectura abierto
V, insertado en el gen P del RVP, en cerdos
persistentemente infectados bajo condiciones naturales
MATERIAL Y MÉTODOS
Se seleccionaron cinco granjas de producción porcina
seropositivas a PorPV. Se obtuvieron muestras de
hembras persistentemente infectadas, procedentes de
dos granjas del estado de Michoacán y dos del estado de
Jalisco, además una granja de Guanajuato. En estas
granjas se presentaban casos clínicos esporádicos,
serología positiva y baja mortalidad en lechones. Las
hembras presentaban serología positiva, sin cuadros
clínicos asociados, solamente en un caso se observó
opacidad corneal unilateral (Mich/2013). Se obtuvieron
muestras de sangre para la separación de células
mononucleares periféricas, mediante un gradiente de
ficoll. Se realizó la extracción de ARN empleando
TRIzol, de acuerdo al protocolo indicado por el
fabricante. El diseño de primers específicos, se llevó a
cabo, empleando las secuencias reportadas en la base de
datos del GenBank. La síntesis de ADNc y la
amplificación por PCR del gen se realizó empleando
paquetes comerciales (Promega, USA). Las muestras
amplificadas fueron purificadas y enviadas a
secuenciación a Macrogen Europe, Netherlands, las
secuencias fueron editadas y ensambladas con el
programa SeqMan (Lasergene 9.1, DNASTAR).
RESULTADOS
Se logró la amplificación del gen P en las cinco granjas
analizadas, se obtuvo en una de ellas, la amplificación
del gen completo de la proteína V del PorPV. Las
secuencias fueron analizadas mediante un alineamiento
múltiple empleando como secuencia consenso, la cepa
LPMV/1984. Los resultados del alineamiento indican
un 99% de similitud entre las secuencias analizadas. En
la traducción, en una de las muestras se observó que
existen mutaciones, específicamente en el dominio
antagonista del interferón (Fig. 1).
Figura 1. Secuencia de aminoácidos del extremo carboxilo
terminal de la proteína V del PorPV. Se ilustra en color
gris, el dominio antagonista para la síntesis de interferón;
en color naranja se ilustran las mutaciones modifican este
dominio.
DISCUSIÓN
Las variaciones genéticas detectadas en la secuencia de
aminoácidos de la proteína V del PorPV, pueden
modificar la respuesta antiviral en animales
persistentemente infectados, permitiendo una mejor
respuesta inmunológica del cerdo infectado (2). La
mutación se registró a nivel del residuo de arginina
(R181), del dominio carboxilo terminal de la proteína V,
que corresponde a un sitio altamente conservado. Este
aislamiento también presentó la falta de expresión de la
proteína C del PorPV, misma que co-interacciona con la
proteína V, para regular la respuesta antiviral del cerdo. La
ausencia del dominio antagonista de interferón de la
proteína V y de la expresión de la proteína C, en cerdos
persistentemente infectados de forma natural, sugiere
una estrategia de poca adaptación viral, con la presencia
de mutantes defectivas del PorPV, que aparentemente
no interfieren con la respuesta inmune del cerdo, pero
que se mantienen de forma silenciosa circulando en la
población porcina de la granjas infectadas. Con los
resultados obtenidos se concluye que existen variantes
genéticas del Rubulavirus porcino, con mutaciones en la
proteína V del virus, y no expresión de la proteína C,
que actualmente circulan en la población porcina con
cierto grado de atenuación. Se requieren estudios
experimentales, para comprobar la posible atenuación
del PorPV.
REFERENCIAS
1. Hertner, et al., 1998; Arch Virol. 143: 425-439.
2. Hagmaier et al., 2007; J Gen Virol. 88: 956-966.
Proyecto financiado por PAPIIT IN 208814-3.