Download DIRECCIÓN DE INVESTIGACIONES

REDSIUDES
Red de Semilleros de Investigación
De la Universidad de Santander
DOLLY
Institución /Nombre del
Semillero/
Programa Académico/Nivel de BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO CLÍNICO
Formación
EVALUACIÓN DE POLIMORFISMOS DE NUCLEÓTIDO SIMPLE EN
Título del Proyecto
REGIÓN PROMOTORA DEL GEN DE IL-10 Y EL PERFIL DE
CITOCINAS CIRCULANTES EN PACIENTES CON CÁNCER.
GÁSTRICO.
Denny Cárdenas, Massiel Paparoni, Jenny Gallego.
Autor(es)
Massiel Paparoni, Jenny Gallego.
Ponente(s)
E-mail
de dos)
Contacto
(máximo
[email protected]
CATEGORIA
Propuesta de Investigación
(seleccionar una)
investigación en Curso
Investigación Terminada
X
Ciencias Agrarias
Ciencias Biológicas y del Mar
(seleccionar una)
Ciencias de la Salud y el Deporte
X
Ciencias Exactas y de la Tierra
Ciencias Humanas
Ciencias Sociales
Navales y de Seguridad
Ingenierías
Lingüística, Artes y Letras
1. TITULO. EVALUACIÓN DE POLIMORFISMOS DE NUCLEÓTIDO SIMPLE EN REGIÓN
PROMOTORA DEL GEN DE IL-10 Y EL PERFIL DE CITOCINAS CIRCULANTES EN PACIENTES CON
CÁNCER.
Área de la investigación
REDSIUDES
Red de Semilleros de Investigación
De la Universidad de Santander
2. INTRODUCCIÓN. Aproximadamente el 80% de todos los casos de neoplasia a nivel mundial se presentan en
países en vía de desarrollo, destacándose el cáncer gástrico como el quinto más frecuente, el tercero más mortal
en hombres (353.500 fallecimientos/año en 2008) y el cuarto en mujeres (202.900 fallecimientos/año en 2008)
según las estadísticas de la International Agency for Research on Cancer (IARC) (1-3). En Colombia, ésta
neoplasia es la quinta más frecuente pero la primera en mortalidad en ambos sexos; el departamento Norte de
Santander se encuentra dentro de los 10 primeros en tasa de mortalidad con 163/4364 (3,74%) por ésta causa,
especialmente en población mayor de 50 años (2).
Diversas variaciones puntuales como Polimorfismo de Nucleótido Simple (SNP) en las secuencias de
promotores génicos o en genes como tal, presentes en la población humana, se han correlacionado al riesgo de
desarrollar neoplasias. Se ha referido un incremento en los niveles plasmáticos de IL-10 e IL-6 y disminución
de IFN- e IL-12, asociado mal pronóstico, en pacientes con diversas neoplasias como carcinoma pulmonar,
colorrectal, hepatocelular, pancreático, renal, melanoma maligno, Linfoma No-Hodgkin B (LNH-B) y
carcinoma gástrico (4), con un aumento particularmente en los niveles de IL-10 para éste último (5, 6).
Una de éstas, C592A, se caracteriza por sobreexpresión de IL-10 y ha sido descrita previamente en asociación al
riesgo de desarrollar LNH-B (7), además en pacientes VIH+ coinfectados con Virus de Hepatitis C (HCV)
padeciendo cirrosis como complicación (8), así como en otras patologías (9) incluyendo cáncer gástrico (10). En
éste sentido, se desconoce la utilidad de la detección de SNPs en promotores de genes de ésta citocina
inmunorreguladora (IL-10) en cuanto a la clasificación pronostica de pacientes con cáncer gástrico en nuestro
medio, teniendo en cuenta además el nivel de ésta citocina circulante detectada en plasma. De manera muy
interesante, si bien se han involucrado citocinas proinflamatorias o inmunoestimuladoras (por ejemplo IL-1β, IL6 y TNF-) en la oncogénesis asociada a inflamación, por otra parte, se considera que la protección de las
células tumorales frente al ataque de la respuesta inmune (característico de un ambiente inmunosupresor) es
manejado por citocinas anti-inflamatorias (por ejemplo IL-10), hecho que altera la respuesta antitumoral,
concretamente en el axis: IL-12-IFN--HLA-DR (4) y que se vería reflejado en una deficiente actividad de
linfocitos T efectores.
3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN. El presente estudio propone establecer el haplotipo
derivado del análisis de variantes tipo SNP como G1082A, C819T y C592A de la secuencia promotora del gen
de IL-10, ya que el haplotipo GCC, podría constituir un genotipo con producción incrementada de ésta citocina
en pacientes con cáncer gástrico en nuestro medio. Adicionalmente, medir los niveles circulantes no sólo de IL10 sino también de TNF- e IFN- en suero de pacientes con cáncer gástrico de nuevo diagnóstico, para conocer
el perfil de citocinas asociadas a ésta patología en conjunto con el análisis de genotipos de riesgo asociados a
sobreproducción de IL-10.
Teniendo en cuenta lo anterior, la pregunta de investigación planteada es la siguiente: ¿Existe un incremento en
el nivel de IL-10 circulante, respecto a otras citocinas y en consistencia con un genotipo asociado a
sobreproducción de IL-10 en pacientes con carcinoma gástrico de San José de Cúcuta?
El presente trabajo se justifica en la necesidad de conocer algunas de las características diferenciales de tipo
genético e inmunológico de los pacientes con carcinoma gástrico, respecto a población sana o control, que
permitan establecer a futuro marcadores de riesgo, así como de impacto pronóstico en los pacientes con el
mismo diagnóstico, que además sirvan como modelo para su estudio y aplicación en otras neoplasias.
REDSIUDES
Red de Semilleros de Investigación
De la Universidad de Santander
4. OBJETIVOS.
GENERAL. Determinar el haplotipo individual según variantes de Polimorfismo de Nucleótido Simple (SNP)
de la región promotora de IL-10, conjuntamente con el perfil de citocinas circulantes: IL-10, TNF- e IFN- en
pacientes con carcinoma gástrico del municipio de San José de Cúcuta, respecto a población sana.
ESPECÍFICOS. Para la realización del presente trabajo de investigación, se tendrán en cuenta los siguientes
objetivos específicos.
1.
2.
3.
Determinar el haplotipo -1082(G/A), -819(C/T) y -592(C/A) de región promotora del gen de IL-10
humana mediante RFLP, en pacientes con carcinoma gástrico y controles sanos.
Cuantificar el nivel de citocinas IL-10, TNF- e IFN-, mediante inmunoensayo ELISA, en suero de
pacientes con carcinoma gástrico de distinto grupo pronóstico, respecto a controles sanos.
Analizar la asociación del haplotipo de región promotora del gen de IL-10 y el nivel circulante de IL10, TNF- e IFN-, con la existencia del diagnóstico de carcinoma gástrico y su estadío de avance,
mediante análisis estadístico de regresión logística.
5. REFERENTE TEORICO
REDSIUDES
Red de Semilleros de Investigación
De la Universidad de Santander
6. METODOLOGIA. Estudio Descriptivo, de corte transversal.
Población-Muestra: Pacientes con diagnóstico confirmado de Cáncer Gástrico (ambos géneros, mayores de 20
años), procedentes del Hospital Universitario Erasmo Meoz (HUEM), y un grupo control de población sana,
relacionada por género y edad.
Técnicas de recolección de datos:
1. Obtención de datos de pacientes: diagnóstico y clasificación, a través de la revisión de historias
clínicas.
2. Recolección de muestras de sangre: una de sangre total en tubos con EDTA (extracción de ADN y
análisis genómico), y otra de sangre sin anticoagulante para obtención de suero (cuantificación de
citocinas IL-10, TNF-α, IFN-γ).
3. Extracción de ADN genómico humano. Se realizará el aislamiento de ADN a partir de muestras de
sangre total mediante un kit comercial.
4. Genotipificación del haplotipo para tres variantes tipo polimorfismos de nucleótido simple (SNP). La
determinación de los polimorfismos se realizará mediante la técnica PCR-RFLP, empleando los
procedimientos descritos por Saberi, 2012; Liu, 2011 y Wu, 2003. El proceso comprende una
amplificación de los genes que contienen los polimorfismos a través de PCR, empleando cebadores,
seguida de una digestión con enzimas de restricción y finalmente la visualización de los fragmentos de
ADN mediante electroforesis en gel de agarosa.
5. Cuantificación de citocinas circulantes. Empleo de un kit de ELISA para determinación de la
concentración de IL-10, TNF-α, IFN-γ a partir de suero humano, de pacientes y controles sanos.
7. RESULTADOS (esperados). Los resultados obtenidos en base a la ejecución del presente trabajo permitirán
en primer lugar describir las características genéticas relacionadas a la expresión de IL-10, de los pacientes con
diagnóstico de cáncer gástrico en nuestra región, así como su relación con los niveles detectables en sangre
periférica para ésta misma citocina, además del ambiente de otras moléculas de función pro-inflamatoria, que
nos conduzcan finalmente a determinar la posible existencia de asociación de un perfil predominantemente
supresor rico en IL-10, soportado por un genotipo consistente y asociable a la clasificación pronostica de los
pacientes, bajo el supuesto de que éste incremento pueda ser un marcador de mal pronóstico.
8. CONCLUSIONES. No aplica.
REDSIUDES
Red de Semilleros de Investigación
De la Universidad de Santander
9. BIBLIOGRAFIA.
1.
Jemal A, Bray F, Center MM, Ferlay J, Ward E, Forman D. Global cancer statistics. CA: a Cancer Journal for
Clinicians. 2011;61(2):69-90.
2.
Daza Duque DE. Cáncer gástrico en Colombia entre 2000 y 2009. 2012.
3.
Bray F, Ren J-S, Masuyer E, Ferlay J. Global estimates of cancer prevalence for 27 sites in the adult population in
2008. International Journal of Cancer. 2012;132(5):1133-45.
4.
Lippitz BE. Cytokine patterns in patients with cancer: a systematic review. The lancet oncology. 2013;14(6):e218e28.
5.
Ren Z, Pang G, Clancy R, Li LC, Lee CS, Batey R, et al. Shift of the gastric T-cell response in gastric carcinoma.
Journal of gastroenterology and hepatology. 2001;16(2):142-8.
6.
Morisaki T, Katano M, Ikubo A, Anan K, Nakamura M, Nakamura K, et al. Immunosuppressive cytokines (IL-10,
TGF-b1) genes expression in human gastric carcinoma tissues. Journal of surgical oncology. 1996;63(4):234-9.
7.
Lan Q, Zheng T, Rothman N, Zhang Y, Wang SS, Shen M, et al. Cytokine polymorphisms in the Th1/Th2 pathway
and susceptibility to non-Hodgkin lymphoma. Blood. 2006;107(10):4101-8.
8.
Corchado S, Márquez M, de Oca MM, Romero-Cores P, Fernández-Gutiérrez C, Girón-González J-A. Influence of
Genetic Polymorphisms of Tumor Necrosis Factor Alpha and Interleukin 10 Genes on the Risk of Liver Cirrhosis in HIVHCV Coinfected Patients. PLoS One. 2013;8(6):e66619.
9.
Sung Y-K, Park B, Shin H, Kim L, Kim S-Y, Bae S-C. Interleukin-10 gene polymorphisms are associated with the
SLICC/ACR Damage Index in systemic lupus erythematosus. Rheumatology. 2006;45(4):400-4.
10.
Kamangar F, Abnet CC, Hutchinson AA, Newschaffer CJ, Helzlsouer K, Shugart YY, et al. Polymorphisms in
inflammation-related genes and risk of gastric cancer (Finland). Cancer Causes & Control. 2006;17(1):117-25.