Download MF34 - 10encuentroBiotecnologia - Instituto Politécnico Nacional

MODIFICACIÓN GENÉTICA DE LÍNEAS CELULARES DE MAMÍFEROS PARA LA PRODUCCIÓN
DE ANTICUERPOS RECOMBINANTES E INMUNOCOMPLEJOS EN TRATAMIENTO DE CÁNCER.
Juan Sebastian Herrera-Noreña1*;Noé Valentín Durán-Figueroa1; Jesús Agustín Badillo-Corona1.
1Instituto
Politécnico Nacional, Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología, Laboratorio de Biotecnología Molecular.
Av. Acueducto La Laguna Ticomán, Ciudad de Mexico, Del. Gustavo A. Madero. C.P. Gustavo A. Madero. C.P. 07340
[email protected]; [email protected]; [email protected]
Palabras clave: Anticuerpos; Cáncer cervicouterino; Inmunocomplejo; Virus del Papiloma Humano.
Introducción
El cáncer de cuello uterino es la principal causa de la
mortalidad por tumores malignos entre las mujeres de 20 a
40 años de edad en América Latina (Capote, 2015). La
infección de las células epiteliales cervicales por ciertos
tipos del virus del papiloma humano (VPH) es el principal
agente causal de tipo de cáncer (Smith, y otros, 2003).
Desde hace poco se ha venido planteando el uso de
anticuerpos recombinantes como proteínas terapéuticas
que pueden ser utilizados en vacunas contra el VPH
pueden significar el principio de la erradicación del cáncer
de cuello de útero a nivel mundial. (Frenzel, Hust, &
Schirrmann, 2013). Es por lo cual en este trabajo se
propone el diseño de vectores de expresión génica para la
producción
de
anticuerpos
recombinantes
e
inmunocomplejos usando líneas celulares de mamífero.
Metodología
Etapa 1
•Diseño y construccion In Silico de los vectores
•Transformacion y seleccion de bacterias transformadas.
Etapa 2
•Estandarizacion de la cotransfeccion de celulas CHO
•Seleccion de las lineas celulares transformadas
Etapa 3
•Purificacion de los anticuerpos
•Evaluar la funcionalidad.
Resultados y Discusión
Fig 1. Esquema que resume la estrategia de construccion de los vectores.
Fig. 2. PCR confirmatoria de las secuencias de la cadena pesada y la
cadena ligera. Carril 1 control negativo, Carril 2 región constante de la
cadena pesada, Carril 3 región constante y variable de la cadena pesada,
carril 4 marcador de peso molecular, Carril 5 región constante de la
cadena ligera, Carril 5 región constante y variable de la cadena ligera,
Carril 5 control pBSK. Gel de agarosa al 1%.
Conclusiones
Hasta la fecha se ha logrado construir el vector que tiene la
información que codifica para la cadena ligera en el vector
pCGFree, y la cadena pesada en el pBSK y se ha
confirmado por secuenciación. Igualmente se ha logrado
estandarizar el protocolo de transfección de las líneas
celulares CHO. Falta por estandarizar protocolo de
cotransfección de ambos vectores y el diseño del vector del
inmunocomplejo.
Agradecimientos
Al Instituto Politécnico Nacional; Becarios del programa de
becas de Estimulo Institucional de Formación de
investigadores (BEIFI); Proyecto SIP 2016320 y al Consejo
Nacional de Ciencia y Tecnología (Conacyt).
Referencias

Capote, L. N. (2015). Epidemiology of cervical cancer in
Latin America. Ecancer Medical Science, 1-14.

Frenzel, A., Hust, M., & Schirrmann, T. (2013).
Expression of recombinant antibodies. Frontiers in
Immunology, 4(217), 1-20.

Smith, J., Green, J., Berrington, A., Appleby, P., Peto,
J., Plummer, M., & Franceschi, S. (2003). Cervical
cancer and use of hormonal contraceptives: a
systematic review. THE LANCET, 361, 1-9.

Smith, R., Baptiste, D. M., Brooks, D., & Doroshenk, M.
(2015). Cancer Screening in the United States, 2015: A
Review of Current American Cancer Society Guidelines
and Current Issues in Cancer Screening. A Cancer
Journal for Clinicians, 65, 30-54.