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MICROORGANISMOS
TÉCNICA DEL AGOTAMIENTO DEL INÓCULO
La técnica de agotamiento del inóculo permite obtener colonias aisladas, a partir de una suspensión
bacteriana sembrada en una placa de Petri que contiene un medio nutritivo sólido adecuado.
MATERIAL
Mechero Bunsen, placa de Petri con agar nutritivo estéril, ansa de níquel-cromo, suspensión (o
cultivo) de Escherichia coli.
PROCEDIMIENTO
1. Encender el mechero Bunsen.
2. Marcar en la base o en los costados de la placa los puntos A, B, C y D.
3. En condiciones asépticas y sin perforar el agar, colocar en la superficie del medio (punto A) el
contenido recogido con el ansa en la suspensión. Este material es el inóculo inicial.
4. Flamear el ansa y distribuir el inóculo inicial en forma de líneas paralelas dentro del área que
corresponde a A.
5. Flamear al ansa y girar la placa para sembrar en el área correspondiente a B, en ángulo recto
respecto de las líneas paralelas ya hechas.
6. Flamear el ansa y girar la placa para sembrar en el área correspondiente a C, en ángulo recto a
las líneas paralelas previamente hechas.
7. Apagar el mechero.
8. Incubar las placas a 37ºC, con la tapa colocada hacia abajo.
9. Las colonias aisladas deben aparecer en la zona sembrada al final (región CD del esquema).
Guía 83
María Antonia Malajovich / Guías de actividades
Biotecnología: enseñanza y divulgación
http://www.bteduc.bio.br
MICROORGANISMOS / TÉCNICA DEL AGOTAMIENTO DEL INÓCULO
NUESTRO COMENTARIO
Se trata de un procedimiento de rutina en el aislamiento de bacterias de cultivos puros. Si este
fuera el objetivo conviene preparar una suspensión con una mezcla de dos especies que puedan
ser diferencias por el color de las colonias, utilizando por ejemplo Escherichia coli (colonias
blancas) y Micrococcus luteus (colonias amarillas).
Antes de iniciar el procedimiento verificar que la placa de Petri esté bien seca, porque la humedad
condensada sobre el medio arrastra las bacterias sobre la superficie de la placa, formándose una
mancha en vez de colonias aisladas (ver Guía Nº 81).
Guía 83
María Antonia Malajovich / Guías de actividades
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