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L ABORATORIO I
MICROBIOLOGIA
ESCUELA TÉCNICA ORT
4º QUÍMICA – 2014
Microbiología
La microbiología es la rama de la biología que se encarga del estudio de los
microorganismos
¿Qué son los microorganismos?
Son organismos de pequeño tamaño, observables únicamente al microscopio, este grupo
incluye a bacterias, hongos (levaduras y mohos), protozoos (ameba, Trypanosoma cruzi),
algas microscópicas y en algunos casos también suele considerarse dentro de este grupo a
los virus (entidades no celulares que se encuentran en el límite entre lo vivo y lo inerte).
Como los microorganismos y las partes que los componen son tan pequeños, se miden en
unidades poco familiares en la vida cotidiana, como los micrómetros y los nanómetros
Un micrómetro (μm) es igual a 0,000001 m que es lo mismo que 10-6m
Un nanómetro (nm) es igual a 0,000000001 m que es lo mismo que 10 -9m
Estos tamaños son imperceptibles al ojo humano, de manera que para la observación de
los mismos se utiliza el microscopio. Este es un instrumento que permite observar objetos
que son demasiado pequeños. El tipo más común y el primero que se inventó es el
microscopio óptico. Se trata de un instrumento óptico que contiene una o varias
lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto a observar.
El microscopio óptico tiene los siguientes Sistemas o partes:
1.- SISTEMA MECÁNICO:
a) Soporte
- Brazo
- Base ó pie
b) Tubo del ocular
c) Cabezal
d) Revolver
e) Platina
f) Tornillos de enfoque:
- Tornillo macrométrico
- Tornillo micrométrico
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2.- SISTEMA ÓPTICO:
a) Ocular
b) Objetivo
3.- SISTEMA DE ILUMINACIÓN:
a) Condensador
b) Diafragma
c) Fuente de Luz
Características del Microscopio Óptico
El microscopio óptico contiene una serie de lentes y utiliza luz visible como fuente de
iluminación. Un conjunto de lentes forman una imagen focal definida, cuyo tamaño es
muchas veces mayor que la muestra en sí. Este aumento se logra cuando los rayos
luminosos procedentes de la fuente de luz pasan atreves de un condensador, que tiene
lentes que dirigen los rayos de luz a través de la muestra, desde aquí los rayos pasan al
interior de la lente objetivo. La imagen vuelve a ser ampliada por el ocular.
El aumento total de la imagen se logra multiplicando el aumento del objetivo por el
aumento del ocular. Por ejemplo si el aumento del objetivo es 10X y el del ocular 10 X el
aumento total es 100
Resolución es la capacidad de las lentes de distinguir detalles finos o más específicamente
la capacidad de distinguir una distancia separada entre dos puntos. Por ejemplo si un
microscopio tiene resolución de 0,4 nm es capaz de distinguir dos puntos como objetos
separados si están al menos a 0,4 nm de distancia es decir que si los puntos se encuentran
a menos de 0,4 nm no se perciben como puntos separados.
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Trabajo Práctico Nº 1
Microscopía
Objetivos
Describir cada una de las partes del microscopio y aprender su funcionamiento.
Adquirir entrenamiento en la técnica de enfoque con en el microscopio óptico de distintos
tipos de preparados: coloreados y sin colorear.
Observar diferentes tipos de células para poder establecer comparaciones de tamaño
celulares.
Materiales
Porta objetos
Cubreobjetos
Preparados coloreados
Microscopios
Procedimiento
- luego de la explicación del docente realizar un preparado de:
 Células del epitelio bucal
 Catafila de cebolla
 Glóbulos rojos
 Muestra entregada por el docente
-A partir de una muestra coloreada en un portaobjeto, entregada por el docente, observar
en el microscopio óptico.
Resultados
Realizar un informe detallado, dibujando todo lo observado en cada uno de los preparados.
Cuestionario
Realizar un esquema alineando microorganismos de menor a mayor tamaño. Colocando el
aumento usado para la observación.
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Preparación de muestras para microscopia óptica
Como casi todos los microrganismos son incoloros, cuando se los observa a través de un
microscopio óptico estándar, a menudo es preciso prepararlos para la observación y una de
las maneras de hacerlo consiste en someterlos a una tinción (coloración).A continuación se
describen varios procedimientos de tinción:
Preparación de extendidos para la tinción
Antes de realizar una tinción se deben fijar los microorganismos al portaobjetos. El proceso
de fijación produce la muerte de los microorganismos y su adherencia al portaobjetos.
Cuando se debe fijar una muestra se extiende una película delgada del material que
contiene los microorganismos sobre la superficie del portaobjetos. Esta película
denominada extendido, se deja secar al aire. A continuación se pasa el portaobjetos varias
veces a través de la llama del mechero Bunsen con el lado del extendido hacia arriba.
Otra forma de fijar la muestra es cubrir con alcohol metílico durante 1 minuto.
Tinción simple: Una tinción simple es una solución acuosa o alcohólica de un colorante
básico único. El propósito de una tinción simple es destacar el microorganismo completo
para que se vean las formas y las estructuras celulares básicas.
Tinciones diferenciales: A diferencia de las tinciones simples las tinciones diferenciales
reaccionan de modo diferente con las distintas clases de bacterias y por lo tanto pueden
ser empleadas para establecer una distinción entre ellas. Las tinciones diferenciales
utilizadas con más frecuencia son la tinción de Gram y la tinción acido-alcohol resistencia.
Tinción de Gram: La tinción de Gram fue desarrollada por el bacteriólogo Hans Gram y es
uno de los procedimientos de tinción más útiles porque permite clasificar a las bacterias en
dos grandes grupos grampositivas y gramnegativas.
1) Un extendido fijado con calor se cubre con colorante violeta de genciana, como este
imparte su color a todas las células se denomina colorante primario.
2) Después de uno minutos, se escurre el exceso de colorante, se lava el extendido y
se lo cubre con lugol, al que denominaremos mordiente. Después de unos minutos
se lava el extendido, luego de esto tanto las bacterias grampositivas como
gramnegativas se verán de un color violeta oscuro.
3) A continuación se lava el portaobjetos con alcohol o con una solución alcohol –
acetona que llamaremos agente decolorante que elimina el color violeta de las
células de algunas especies pero no de otras.
4) Se elimina el agente decolorante y se tiñe el portaobjetos con safranina, un
colorante básico, luego se vuelve a lavar el extendido, se lo seca con papel
absorbente y se lo examina al microscopio
Tinción acido alcohol resistencia: otra tinción diferencial importante es la tinción de ácido –
alcohol resistencia que se fija a de modo firme solo a las bacterias que poseen ceras en las
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paredes celulares. Los microbiólogos utilizan esta tinción para identificar a todas las
bacterias del genero Mycobacterium que comprende a dos patógenos importantes
Mycobacterium tuberculosis el agente causal de la tuberculosis y Mycobacterium leprae el
agente causal de la lepra.
1) A un extendido fijado se le agrega rojo de carbolfucsina y se lo calienta suavemente
durante varios minutos.
2) Luego, se lo enfría y se lo lava con agua
3) Luego, el extendido se trata con alcohol acido un decolorante que elimina el color
rojo de las bacterias que no son acido alcohol resistentes
4) Luego se colorea el extendido con azul de metileno. Las bacterias que no son acido
alcohol resistentes aparecen azules y las que son ácido alcohol resistentes aparecen
en rojo después de la aplicación del azul de metileno.
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Trabajo Práctico Nº 2
Tinción de Gram
Objetivo:
Observar microscópicamente una célula bacteriana.
Materiales:
 Portaobjetos
 Colorantes
 Ansa rulo
 Aceite de inmersión
 Microscopio óptico
 yogur
Procedimiento:
Se realizará la tinción de Gram a un fijado realizado con yogur según la siguiente técnica:
Lavar cuidadosamente un portaobjetos con agua y detergente, enjuagar con alcohol y dejar
secar.
Colocar una gota de agua destilada en el centro del portaobjetos, tomar con un ansa parte
del material y homogeneizarlo en la gota de agua.
Dejar secar el extendido al aire
Fijarlo pasando el mismo tres veces por la llama del mechero (con el extendido hacia
arriba).
Cubrir el portaobjeto con el colorante Violeta de Genciana. Dejar actuar 2 minutos. Eliminar
el exceso de colorante, sacudiendo ligeramente el portaobjeto.
Cubrir el portaobjeto con lugol. Dejar actuar 1 minuto.
Enjuagar con decolorante (alcohol-acetona 1+1), hasta decoloración.
Lavar con agua.
Cubrir el portaobjeto con safranina. Dejar actuar 1 minuto.
Lavar con agua corriente.
Secar al aire.
Observar el preparado al microscopio, con el objetivo de inmersión a 100 X.
Retención del colorante por la célula:
Violeta = Gram (+)
Rosa intenso = Gram (-)
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Cuestionario:
1)
¿Por qué se fijan los extendidos bacterianos?
2)
¿Qué cambios químicos se producen durante el proceso de fijado?
3)
¿Cuál es la naturaleza química de los colorantes empleados?
4)
Describa un objetivo de inmersión y su importancia práctica.
5)
¿Qué sucede en cada paso de la coloración de Gram, tanto en bacterias Gram (+)
como en Gram (-)?
6)
¿Qué factor puede influir en los resultados de esta tinción?
7)
¿Qué importancia práctica tiene la coloración de Gram para el bacteriólogo?
8) En una tinción de Gram podría omitirse un paso y aun así sería posible la
diferenciación entre células grampositivas y gramnegativas ¿cuál es ese paso?
9) ¿Qué tipo de morfología presentaron las bacterias del yogur?
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Tamaño morfología y disposición de las células bacterianas
Las bacterias presentan tres formas básicas: la esférica o de coco, la de bastoncillo o bacilo
y la de espiral
Los cocos suelen ser esféricos. Cuando los cocos se dividen para reproducirse pueden
permanecer unidos unos a otros.
Los bacilos se dividen solamente a través de su eje más corto, de manera que hay menos
agrupamientos de bacilos que de cocos.
Las bacterias espirales nunca aparecen rectas y pueden tener una o más vueltas.
Distribución de los microorganismos
Los microorganismos se encuentran en los más diversos ambientes y materiales
cumpliendo funciones beneficiosas o perjudiciales. Esa ubicuidad de los Microorganismos es
algo que debemos tener en mente para tomar las precauciones pertinentes e impedir que
éstos vayan a interferir en el trabajo que estemos realizando sea en una farmacia, un
laboratorio o incluso en la cocina de nuestra casa.
Aunque no podemos ver a los microorganismos a simple vista, cuando los cultivamos en un
medio adecuado, sí podemos ver manifestaciones de su crecimiento, por ejemplo, todos
nosotros hemos visto el crecimiento algodonoso y coloreado de mohos sobre alimentos,
cueros, etc.
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Trabajo Práctico Nº 3
Distribución de los microorganismos en el medio ambiente
Objetivos:
 Demostrar la presencia de microorganismos en el medio ambiente
 Describir las características morfológicas que presenta un cultivo microbiano a
simple vista
 Clasificar los diversos caracteres culturales de los microorganismos
Materiales:
 3 placas de Petri
 Agar nutritivo estéril y/o CLDE
 Hisopos de algodón
 Mechero
 Ansa rulo
Procedimiento:
1 Exposición al aire:
Dejar expuesta al aire libre durante 30 minutos una caja de Petri destapada conteniendo el
medio. Tapar e incubar la placa invertida en estufa a 37º C por 24 / 48 Hs.
2 Siembra con hisopo:
Tomar el hisopo, humedecerlo con agua y pasarlo sobre la piel o dientes o mesa del
laboratorio, etc. Abrir la caja de Petri y con el hisopo en posición oblicua, depositarlo muy
suavemente sobre la superficie del medio en forma de zig-zag.
Tapar la caja e incubarla invertida en estufa a 37º C por 24 / 48 Hs.
3 Siembra con ansa:
Sobre el agar de una placa estriar con el ansa suavemente en forma de zig-zag el material
de una muestra bacteriana entregada por el docente.
Tapar la caja e incubarla invertida en estufa a 37º C por 24 / 48 Hs.
Resultados:
Al cabo de la incubación, elegir distintos tipos de colonia de cada placa y describirlas. Para
examinarlas, es conveniente utilizar una lupa (si se trabaja con bacterias patógenas, las
cajas deben permanecer cerradas).
Describir y dibujar las colonias elegidas, de acuerdo con la guía de reconocimiento.
Guía de reconocimiento:
1 Forma
Circular
Puntiforme
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Irregular
Filamentosa
Rizoide
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2 Superficie
Se llama superficie a la parte superior de la colonia en contacto con la atmósfera.
Pulida: lisa y regular
Áspera: pequeñas irregularidades
Anillos concéntricos
Radiada
3 Elevación
Es la diferencia de nivel entre la superficie de la colonia y el medio de cultivo.
Difusa
Plana
Elevada
Convexa
Umbilicada
Mamelonar
Lobulado
Erosionado
Filamentoso
Enrulado
4 Borde
Es la periferia de la colonia
Entero
Ondulado
5 Cromogénesis: Refiere al color de la colonia. Se clasifican en pigmentadas o no
pigmentadas.
6 Olor: El olor de las colonias puede ser frutal, ácido, etc.
7 Diámetro
Es el diámetro aproximado en mm
Cuestionario:
1 ¿Cuál es la fuente de los microorganismos encontrados en el aire y en la superficie del
laboratorio?
2 ¿Qué es una colonia bacteriana?
3 ¿Una colonia bacteriana continúa incrementando su diámetro por incubación prolongada?
Explique.
4 ¿Qué importancia práctica tienen los microorganismos del aire para la persona que
trabaja en un laboratorio de bacteriología?
5 ¿Cuál es la finalidad de incubar con la placa invertida?
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Trabajo Práctico Nº 4
Tinción de Gram en colonias
Objetivo:
Observar microscópicamente una célula bacteriana.
Materiales:

Portaobjetos

Colorantes

Ansa rulo

Aceite de inmersión

Microscopio óptico
Procedimiento:
Se realizará la tinción de Gram a cada uno de los distintos tipos de colonias aisladas en el
trabajo práctico Nº 3, según la siguiente técnica:
 Lavar cuidadosamente un portaobjetos con agua y detergente, enjuagar con alcohol y
dejar secar.
 En caso de partir de una colonia proveniente de un medio sólido, colocar una gota de
agua destilada en el centro del portaobjetos, tomar con un ansa parte del material y
homogeneizarlo en la gota de agua.
 Si se trata de un cultivo en medio líquido, agitar el caldo y tomar una gota del mismo
con un ansa rulo y extenderlo directamente sobre el portaobjeto seco.

Dejar secar el extendido al aire
 Fijarlo pasando el mismo tres veces por la llama del mechero (con el extendido hacia
arriba).
 Cubrir el portaobjeto con el colorante Violeta de Gram. Dejar actuar 2 minutos.
Eliminar el exceso de colorante,sacudiendo ligeramente el portaobjeto.

Cubrir el portaobjeto con lugol. Dejar actuar 1 minuto.

Enjuagar con decolorante (alcohol: acetona 1+1), hasta decoloración.

Lavar con agua.

Cubrir el portaobjeto con safranina. Dejar actuar 1 minuto.

Lavar con agua corriente.

Secar al aire.
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 Observar los distintos preparados al microscopio, con el objetivo de inmersión a 100
X.
 Relacionar lo observado al microscopio con la descripción morfológica hecha en el
Trabajo Nº 2
Resultados:
Los resultados se deben expresar según la siguiente clasificación:
Morfología:
Cocos
Diplococos (de a 2)
Streptococos (en cadena)
Stafilococos (en racimos)
Bacilos
Cocobacilos
Retención del colorante por la célula:
Violeta = Gram (+)
Rosa intenso = Gram (-)
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Trabajo práctico Nº 5
Aislamiento de cultivos puros. Método por estría
Objetivo:
Obtener colonias puras a partir de una mezcla de dos tipos de bacterias.
Materiales:
Suspensión de mezcla bacteriana entregada por el docente.
3 placas de Petri.
Medio CLDE.
Ansa rulo.
Procedimiento:
Preparar tres cajas de Petri con medio CLDE.
Estriar la mezcla bacteriana con un ansa esterilizada a la llama del mechero, en las placas
conteniendo el medio sólido de acuerdo al siguiente esquema y sin re cargar el ansa:
Incubar las cajas invertidas en estufa a 37º C 24 / 48 Hs.
Examen del crecimiento bacteriano:
Examinar las colonias obtenidas después del período de incubación sin abrir la caja, y
describirlas según la Guía de Reconocimiento del práctico Nº 1.
Seleccionar colonias morfológicamente diferentes de las placas examinadas. Las cajas
deben conservarse para su utilización en el práctico siguiente.
En caso de no obtener colonias aisladas, o una sola variedad de ellas, se procederá a un
nuevo re aislamiento.
Cuestionario:
1 ¿Qué origina cada colonia visible en el agar?
2 Establezca la diferencia entre célula bacteriana y colonia.
3 ¿Cuál es la forma más común de las colonias separadas?
4 ¿Cuál es la ventaja de los medios sólidos sobre los líquidos en el aislamiento de los
microorganismos?
5 ¿Cuál es la ventaja del medio CLDE con respecto al agar nutritivo?
6 ¿Cuál es la importancia de cada uno de los componentes en el agar nutritivo y en el
medio CLDE?
7 ¿Es el agar agar un nutriente? ¿Lo reemplazaría por gelatina ? Explique.
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Trabajo Práctico Nº 6
Análisis bacteriológico de aguas
Introducción:
La búsqueda directa de los microorganismos patógenos causantes de enfermedades
hídricas no se realiza con frecuencia en los exámenes bacteriológicos de aguas. Estas
bacterias son de vida precaria fuera del organismo animal; casi siempre llegan a los cursos
de agua en forma intermitente y en reducido número. Esto provoca que su investigación,
ya de por sí laboriosa, pocas veces de resultados satisfactorios.
La corriente es determinar la calidad higiénica del agua en una forma directa, como es la
investigación de bacterias típicas del intestino humano o animal. Este es un método
seguro, relativamente rápido y de extrema sensibilidad. Una muestra de agua que
contenga bacterias de origen intestinal indica la existencia de una contaminación fecal, y
por lo tanto la posibilidad de contener bacterias patógenas intestinales, lo cual es
potencialmente peligroso.
Entre las bacterias de origen intestinal se han elegido como indicadores de contaminación
las que integran el grupo coliforme, es decir, bastones Gram (-) no esporulados que
fermentan lactosa con producción de ácido y gas,
Parte1: Análisis cuantitativo
Determinación de bacterias aerobias totales
Objetivo:
Determinar cuantitativamente la cantidad de bacterias aerobias totales mediante el método
de recuento en profundidad.
Materiales:
3 cajas de Petri
Agar nutritivo o agar recuento estéril
3 tubos estériles
Pipetas de 1 y 10 ml estériles
Agua destilada estéril
Muestra de agua
Procedimiento:
Se efectúan tres diluciones a partir de una muestra de agua contaminada empleando agua
destilada estéril. Deben utilizarse tubos de ensayo y pipetas estériles.
Si se trata de aguas poco contaminadas, se utilizará la muestra original y dos diluciones de
1/5 y 1/10.
Si se trata de aguas muy contaminadas, se realizarán 3 diluciones sucesivas de 1/10 cada
una, para obtener tres muestras cuyas concentraciones finales sean 1/10, 1/100 y 1/1000.
Se funde el medio y se enfría a 45 – 50º C.
Se coloca asépticamente 1 ml de cada dilución en cada una de las cajas de Petri,
previamente marcadas con las diluciones a sembrar.
Se vierte en cada una de las cajas de Petri el medio fundido. Se mezcla con suaves
movimientos de rotación y se deja solidificar.
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Las cajas se incuban invertidas en estufa a 37º C durante 48 Hs. El tiempo transcurrido
desde que se efectúa la dilución hasta el agregado del medio de cultivo no debe ser
superior a los 15 minutos.
Resultados:
Después de la incubación se procede al recuento de colonias, al igual que se realizó en el
práctico anterior.
El valor normal admitido es de 50 colonias de bacterias aerobias totales / ml.
Parte 2: Investigación de coliformes
Determinación del número más probable de microorganismos coliformes totales:
METODO DE WILSON
Objetivo:
Determinar el grado de contaminación a través de la búsqueda de bacterias coliformes en
la muestra de agua en estudio.
Materiales:
Muestras de agua
3 tubos de crioscopia conteniendo caldo Mac Conkey doble concentración y campanita
Durham.
6 tubos de ensayo con caldo Mac Conkey simple concentración y campanita Durham.
Erlenmeyer conteniendo 90 o 99 ml de agua destilada estéril según la dilución a realizar
Pipetas de 10, 1 y 0,1 ml estériles.
Tubos con caldo Mac Conkey simple concentración y campanita Durham. *
Tubos con caldo Citrato de Koser. *
* Cantidad variable según los resultados obtenidos en la primera parte de la experiencia.
Procedimiento:
Según el origen de la muestra se realizará la dilución correspondiente.
En tres tubos con 10 ml de caldo Mac Conkey doble concentración sembrar 10 ml de agua
muestra.
En tres tubos con 5 ml de caldo Mac Conkey simple concentración sembrar 1 ml de agua
muestra.
En tres tubos con 5 ml de caldo Mac Conkey simple concentración sembrar 0,1 ml de agua
muestra.
Llevar todos los tubos a incubar a 37º C 24 – 48 Hs.
Resultados:
Se considera positivo todo tubo que presenta ácido y gas, lo que indica que el agua posee
bacterias coliformes.
El número más probable (NMP) de bacterias coliformes por 100 ml se calcula mediante una
tabla estadística teniendo en cuenta la combinación de tubos sembrados con 10, 1 y 0,1 ml
de agua y la combinación de tubos positivos.
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Diferenciación de las bacterias coliformes
Determinación del NMP de bacterias colifecales
De cada uno de los tubos Mac Conkey positivo, se repica con ansa rulo a tubos con 5 ml de
caldo Mac Conkey concentración simple. Se incuba a 44º C durante 48 Hs.
A esta temperatura las bacterias colifecales generan ácido y gas. Mediante el empleo de
esta tabla y usando la combinación original sembrada y la combinación de tubos positivos,
tendremos un valor *”a” que mediante la aplicación de una fórmula convencional permitirá
determinar el NMP de bacterias colifecales por 100 ml.
Determinación del NMP de bacterias intermedias aerogenes cloacae (IAC).
De todos los tubos positivos del caldo Mac Conkey incubado a 37º C hacer repiques con
ansa recta a tubos con medio Citrato de Koser e incubar a 37º C durante 48 Hs. Se utiliza
ansa recta con el objeto de no llevar a los tubos con citrato, material nutritivo del cultivo
original. Esto es importante, pues pequeñas cantidades de peptona son suficientes para
permitir el desarrollo de E. coli fecal y modificar por lo tanto los resultados del ensayo.
Se consideran como positivos los tubos que presenten coloración azul. Si el medio
permanece verde, el ensayo se considera negativo. Si la coloración es dudosa, pueden
agregarse unas gotas de solución de azul de bromotimol. El citrato es utilizado por las
bacterias como única fuente de carbono produciendo amoníaco; esto hace que el pH
aumente junto con el desarrollo microbiano y produce el viraje del indicador, lo que es
originado únicamente por las bacterias del grupo IAC.
Mediante el empleo de la tabla y usando la combinación original sembrada y la combinación
de tubos positivos obtendremos un valor **”b” que mediante la aplicación de una fórmula
convencional permite determinar el NMP de las bacterias del grupo IAC por 100 ml.
NMP colifecales por 100 ml = X
a
a+b
NMP bacterias IAC por 100 ml = X
b
a+b
Siendo:
X = NMP coliformes por 100 ml
*a y **b ya se explicó como se obtienen
Determinación de Pseudomonas aeruginosa:
Pasar 100 ml de muestra por filtro Millipore y colocar sobre Agar Cetrimida. Utilizar otra
placa como control de esterilidad del medio. Incubar a 37º por 24 horas.
Para confirmar, observar las placas de Agar Cetrimida con exposición a lámpara de luz UV
(longitud de onda larga). Las colonias de Pseudomonas aeruginosa se ven fluorescentes.
Informar como Presencia o Ausencia.
Cuestionario:
1 ¿Qué significado tienen las bacterias coliformes en un agua de bebida?
2 ¿Existen otras bacterias normalmente en el intestino humano? ¿Cuáles recuerda?
3 ¿Qué bacterias patógenas pueden transmitirse por el agua y ocasionar infecciones
intestinales?
4 ¿Qué características definen al grupo coliforme?
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5 ¿Qué límite de bacterias coliformes se ha adoptado como máximo para una agua de
bebida
6 ¿Qué volumen tienen las porciones que se acostumbra sembrar cuando se trata de agua
de bebida
7 Describa el método usado en clase para el examen bacteriológico de aguas.
8 Una muestra de agua de río dio los siguientes resultados:
Análisis cuantitativo: se realiza una dilución 1/100 y se siembra 1,0 ml de la misma en
profundidad.
Se cuentan 50 colonias.
NMP por esquema de Wilson:
Mac Conkey 37º C
Mac Conkey 44º C
Citrato de Koser 37º C
Tubos positivos por
10 ml
1,0 ml
0,1 ml
3
1
1
2
1
0
1
1
0
¿Cómo informaría dicha muestra?
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TABLA PARA LA DETERMINACIÓN DEL NMP
NMP por 100 ml usando tres tubos inoculados con 10, 1 y 0,1 ml de muestra
Tubos Positivos
10 ml
1 ml
0,1 ml
0
0
1
0
0
0
NMP
Tubos Positivos
NMP
10 ml
1 ml
0,1 ml
3
2
0
1
14
2
6
2
0
2
20
0
3
9
2
0
3
26
0
1
0
3
2
1
0
15
0
1
1
6
2
1
1
20
0
1
2
9
2
1
2
27
0
1
3
12
2
1
3
34
0
2
0
6
2
2
0
21
0
2
1
9
2
2
1
28
0
2
2
12
2
2
2
35
0
2
3
16
2
2
3
42
0
3
0
9
2
3
0
29
0
3
1
13
2
3
1
36
0
3
2
16
2
3
2
44
0
3
3
19
2
3
3
53
1
0
0
4
3
0
0
23
1
0
1
7
3
0
1
39
1
0
2
11
3
0
2
64
1
0
3
15
3
0
3
95
1
1
0
7
3
1
0
43
1
1
1
11
3
1
1
75
1
1
2
15
3
1
2
120
1
1
3
19
3
1
3
160
1
2
0
11
3
2
0
93
1
2
1
15
3
2
1
150
1
2
2
20
3
2
2
210
1
2
3
24
3
2
3
290
1
3
0
16
3
3
0
240
1
3
1
20
3
3
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NORMAS Y SUGERENCIAS PARA TRABAJAR EN ÉL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Normas a seguir en el laboratorio
1. El uso de la bata de laboratorio es indispensable para asistir a la práctica.
2. No se debe comer, fumar, ni beber en el laboratorio.
3. Mantenga la mesa libre de todo lo que no sea esencial.
4. Limpiar y desinfectar la superficie de mesones antes y después del trabajo del día.
5. Lave sus manos con agua y jabón antes y después de cada práctica. Luego asegure
de frotarse las manos con alcohol.
6. Llevar registro de sus análisis indicando: Tipo de muestra, procedencia, fecha, tipo
de siembra o método, cultivos empleados y resultados obtenidos.
7. Identificar las muestras antes de comenzar el análisis, no desechar hasta obtener el
resultado.
8. El material a examinar debe tocarse exclusivamente con instrumentos estériles.
9. En caso de regarse un cultivo sobre la mesa o el piso o cualquier accidente como
cortadura, quemaduras, caída del material infectado en la conjuntiva ocular, ruptura
de una lámina montada al microscopio de aviso inmediato al profesor o monitor.
Tome todas las precauciones posibles para evitar estos accidentes.
10. Cuando tenga el asa bacteriológica cargada con algún cultivo de microorganismos
no se desplace de un área a otra ya que puede crear aerosoles, trabaje solo en su
puesto.
11. Flamee el asa antes y después de usarla.
12. Descarte todo el material usado en recipientes destinados para tal fin por ningún
motivo en los desagües o lavatorios.
13. Tenga cuidado con las preparaciones teñidas ya que puede salpicar colorantes a
mesones y pisos.
14. Al final de la práctica dejar el lugar limpio y ordenado. Sugerencias para el trabajo
en el laboratorio
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
Es muy importante la asistencia a la práctica a la hora indicada, ya que las
explicaciones se darán en los primeros minutos.

Antes de comenzar la práctica, léase la guía de laboratorio. Esto le ayudará
a entender mejor y a realizar un ordenado y eficiente trabajo de
laboratorio.

Anote todos los resultados y las explicaciones pertinentes.

Cada sesión de laboratorio deberá iniciarse con una corta explicación. No
empiece a trabajar hasta que haya recibido todas las instrucciones. La
buena técnica de laboratorio depende primordialmente de que se sepa lo
que se va a hacer.

Los instrumentos de laboratorio son muy delicados. Tenga mucho cuidado
al manejarlos. Cualquier pequeño descuido puede ocasionar una pérdida
irreparable.

El material entregado para la práctica debe ser devuelto antes de
abandonar el laboratorio.
EL MICROSCOPIO
Un microscopio simple no es más que una lente biconvexa, es decir solo tiene un sistema
de lentes, pero el microscopio compuesto emplea dos sistemas de lentes separados,
consiguiendo con ellos mayores aumentos. Al ser el microscopio compuesto un instrumento
fundamental en microbiología, el conocer los principios básicos de la microscopía y la
pericia en el empleo y la manipulación de este instrumento, son requisitos imprescindibles
para casi cualquier estudio en esta ciencia.
DESCRIPCIÓN DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO
Parte Mecánica
Pie base o soporte basal: Es una pieza maciza y pesada para asegurar la estabilidad del
aparato y servir de soporte a sus demás partes.
Platina: Es una pieza metálica redonda o cuadrada, donde se colocan las preparaciones;
tiene en el centro una abertura por la cual pasan los rayos luminosos procedentes del
sistema de iluminación. En los microscopios corrientes puede estar fija o adosada a un
carro con los tornillos de cremallera que permiten dos movimientos de traslación para
controlarla, y también, si los tornillos están graduados para medir sus desplazamientos.
Las preparaciones sujetas con las platinas fijas, por medio de dos palanquitas móviles y en
las platinas de carro por un reborde, en forma de escuadra y pestillo que le impide
cualquier movimiento imprevisto.
Tubo: En él está instalado el sistema óptico. Está constituido por dos tubos o cuerpos. Uno
de ellos externo, en el cual se encuentran la cremallera y el ocular y otro interno adosado
al interior, donde está el objetivo. Son corrientes en los aparatos modernos los binoculares,
que facilitan la visión con ambos ojos.
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Revolver: Pieza circular y giratoria. En ella se insertan en sentido antihorario los objetivos;
sin embargo su movimiento, para colocar en posición un objetivo, debe ser en sentido
horario. Brazo o soporte vertical: Parte por medio de la cual debe asirse el microscopio
para transportarlo de un lugar a otro.
Carro o escuadra, Pinzas: Parte mecánica accionable, mediante dos tornillos que permiten
movimientos laterales o longitudinales para colocar la preparación en posición de
observación. En algunos casos es reemplazable por pinzas.
Tornillo macrométrico: Tornillo de paso largo y por el cual se ejecutan desplazamientos a
veces imperceptibles a simple vista.
Tornillo micrométrico: En contraposición al anterior su paso es pequeñísimo y sus
desplazamientos a veces imperceptibles. Debe utilizarse con sumo cuidado.
Parte óptica
Objetivos: Son uno de los elementos más importantes del microscopio. Están formados por
la reunión de varias lentes para corregir las aberraciones. Deben tratarse con mucho
cuidado, pues cualquier golpe puede variar la posición de las lentes y averiarlas. Se
atornillan a la parte del tubo o al revolver porta-objetivos.
En cuanto a los objetivos tenemos dos clases:
Objetivos secos: Son los que se emplean más corrientemente. Entre la lente frontal y el
porta objetivos sólo hay aire. A este grupo pertenecen los objetivos de menores aumentos
tales como 10X y 40X.
Objetivos de inmersión: Como se había mencionado anteriormente se llama así a aquellos
en los cuales, para la observación de interponerse entre la lente frontal y la preparación un
líquido como por ejemplo aceite. Oculares: Los forman dos lentes separados por un
diafragma y van montados en la parte superior del tubo. La lente superior se llama lente
ocular; la inferior lente de campo.
Sistema de Iluminación: Se encuentra situado bajo la platina y tiene la misión de iluminar a
los objetivos por medio de la luz transmitida.
Puede constar de: Fuente de luz natural o artificial..
Diafragma: Va montado sobre la platina y permite graduar según la necesidad, la
intensidad luminosa; el más usado hoy es el tipo iris, accionable mediante manecilla
lateral.
Condensador: Consta de un sistema de lentes colocados bajo la platina. Su función es
condensar el haz de rayos luminosos, permitiendo una iluminación uniforme del campo
microscópico. Se acciona por medio de un tornillo, el cual permite graduar la intensidad.
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RECOMENDACIONES PARA LA ADECUADA CONSERVACIÓN DEL MICROSCOPIO
• No tocar nunca las lentes: Si se ensucian estas, limpiarlas suavemente con papel de seda
especial para lentes.
• No dejar el porta-objetos sobre la platina, cuando no se está usando el microscopio.
• Limpiar siempre el objetivo de inmersión después de usarlo. Si involuntariamente los
objetivos de pocos aumentos se manchan de aceite, limpiarlos suavemente con papel
especial.
• Mantener seca y limpia la platina del microscopio, si se derrama sobre ella algún líquido,
secarla con un paño.
• No inclinar el microscopio cuando se está trabajando con aceite de inmersión.
Este puede caer al sistema mecánico de la platina de donde es difícil limpiarlo, o puede
gotear al condensador y allí solidificarse.
• Cuando no esté en uso el microscopio, cubrirlo con la funda y guardarlo.
• No forzarlo nunca. Todas las conexiones deben funcionar suave y fácilmente.
Si algo no funciona bien, no intentar arreglarlo uno mismo. Llamar inmediatamente al
instructor.
• Las lentes objetivo no deben tocar nunca el porta-objetos.
• No bajar el tubo del microscopio con el tornillo de enfoque grueso mientras se está
mirando por el ocular.
• No intercambiar los objetivos o los oculares del microscopio distintos, y bajo ninguna
circunstancia, separar las lentes frontales de los objetivos.
• Cuando no se usa, guardar el microscopio en su caja. Dejarlo con el objetivo de pocos
aumentos y asegurarse que la parte mecánica de la platina no sobresalga del borde de la
misma.
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