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5. ANALISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
INTRODUCCIÓN
El crecimiento de la población a nivel mundial y el aumento del uso del agua para
diferentes actividades, ha incrementado los niveles de contaminación. Esta contaminación
está relacionada con los vertidos de origen doméstico e industrial a los cuerpos de agua.
En el caso de los residuos de origen doméstico, la carga contaminante está representada
por altos porcentajes de materia orgánica y microorganismos de origen fecal. Estos
microorganismos son causantes de enfermedades de origen hídrico, que generan altos
porcentajes de morbi-mortalidad en la población. El control de la calidad microbiológica
del agua de consumo y de vertido, requiere una serie de análisis dirigidos a determinar la
presencia de microorganismos patógenos.
Dentro de los microorganismos patógenos se encuentran el grupo de bacterias coliformes
el cual está conformado por dos subgrupos: los coliformes totales y los termotolerantes. A
estos últimos antes se los denominaba coliformes fecales. El cambio de nombre se debe a
que se demostró que en el grupo de coliformes que se detectaban en siembras incubadas
a temperaturas de 44,5 °C y en medios de cultivo específicos, sólo una parte del grupo
eran bacterias de origen fecal; el resto eran bacterias ambientales. Se les puso entonces el
nombre de bacterias coliformes termotolerantes debido a la alta temperatura de
incubación (44,5 °C) en la cual se obtenía un óptimo desarrollo.
En el grupo de bacterias termotolerantes está incluida la Escherichia coli, considerada
como un organismo indicador de contaminación fecal. Se ha demostrado que esta bacteria
siempre está presente en un número elevado en las heces de humanos y animales de
sangre caliente y comprende casi 95% de los coliformes en las heces. Por esta razón, la
contaminación de origen fecal puede ser evaluada mediante la determinación de
coliformes termotolerantes o mediante la presencia de E. coli. En los valores guía para la
calidad bacteriológica del agua de bebida (OMS, 1995), ambas determinaciones se
consideran como alternativas aceptables y su presencia indica contaminación de origen
fecal. Por esta razón, en los métodos descritos en el presente manual se encontrará que
algunos están dirigidos a la investigación de coliformes
OBJETIVOS
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Determinar la presencia de coliformes totales y fecales en una muestra de agua
potable mediante el método de filtro de membrana
MATERIALES Y REACTIVOS
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Sistema de filtración
Pinzas
Mechero
Cajas de petri con medio
membrana de 0,45 micrómetros de diámetro
PROCEDIMIENTO
Método de filtro de membrana.
La técnica de filtro de membrana se fundamenta en la filtración de un volumen
determinado de muestra (100 mililitros o volúmenes menores según la densidad
bacteriana esperada) a través de un filtro de membrana de 0,45 micrómetros de
diámetro de poro, el cual es colocado sobre un medio de cultivo específico y luego
incubado a la temperatura adecuada. El método de filtración con membrana para la
determinación de coliformes totales y termotolerantes está aceptado por el Standard
Methods for the Examination of Water and Wastewater (American Public Health
Association-American Water Works Association, 1999), que lo propone como una
alternativa para la determinación de los coliformes totales y termotolerantes. Este
método se recomienda para la determinación de bacterias en muestras de agua
potable y agua de origen subterráneo.
En una rampa de filtración estéril conectada a vacio. Desenvolver el filtro de la
envoltura con la que se ha esterilizado.
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Separar el embudo de la base del filtro.
Colocar la membrana filtrante sobre el portafiltros de la base del mismo. El manejo
de las membranas se debe realizar con pinzas de punta plana o guantes de goma
para no lesionarlas.
Colocar el embudo sobre la base, teniendo cuidado de no lesionar la membrana y
que esta quede bien centrada. La membrana filtrante queda ahora situada entre el
embudo y la base-soporte del filtro.
Filtrar 100ml de muestra de agua a través del filtro. Poner en marcha el sistema de
vacío.
Una vez filtrada toda la muestra, parar el sistema de vacío y separar el embudo de
la base del filtro.
Retirar con pinzas estériles o flameadas la membrana filtrante.
Colocar la membrana sobre una placa petri e incubar en estufa a 37ºC durante 24
horas.
Comprobar resultados a las 24 horas.
CUESTIONARIO
1. De acuerdo a los resultados obtenidos que se puede decir de los sistemas de
potabilización de agua de los puntos donde fueron tomadas las muestras
2. ¿Qué tipo de microorganismos patógenos se pueden encontrar en el agua y que
enfermedades causan?
3. Explique la importancia de realizar análisis microbiológicos al agua
4. Mencione las técnicas más usadas para la determinación de coliformes totales y
fecales en el agua potable
BIBLIOGRAFIA
American Public Health Association-American Water Works Association (1999).
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewate